UPLC-Q-Orbitrap-MS快速分析水红花子的化学成分

目的建立水红花子化学成分的快速鉴定方法。方法利用超高效液相串联四极杆静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Orbitrap-MS)技术,正、负离子模式下分别采集一级、二级质谱信息。通过推导质谱裂解规律,与质谱数据库(MassBank、mzCloud)、文献数据、对照品比对等方式,对化合物进行指认。结果从水红花子中共鉴定出54种化学成分,主要包括黄酮类、酚酸类、生物碱类等,其中有15种成分为首次从水红花子中发现,也是首次从药用植物红蓼中发现。结论该研究可为水红花子的深入质量评价及药效物质基础研究提供依据。

基于双波长差示融合图谱的中药水红花子质量分析方法研究

该研究建立了以对照药材为基准物质定性和不依赖多种对照品定量的水红花子药材质量控制方法。采用高效液相色谱(HPLC)技术,结合双波长差示融合技术,以对照药材为基准物质建立水红花子的特征图谱,通过特征峰的标定明确药材真伪;对内标成分花旗松素进行准确定量,以花旗松素为基准计算各特征峰的相对含量,取“平均数-标准差”作为特征峰成分相对于内标物质化学成分的相对含量下限,依据相对含量下限明确水红花子药材的优劣。结果标定了水红花子特征图谱的10个共有特征峰,通过质谱(MS)鉴定出水红花子药材的7个成分,经对照品比对,指认特征峰中的3个化学成分分别为花旗松素、槲皮素和原儿茶酸,检测各批次药材中花旗松素的含量为0.5994%~0.7766%,规定了水红花子药材特征峰化学成分相对含量下限。该方法不依赖多种对照品,能清晰判断药材的真伪优劣,可为水红花子的质量控制提供参考。

UPLC法测定水红花子中花旗松素及槲皮素的含量

目的 应用超高效液相色谱法(UPLC)建立同时测定水红花子药材中花旗松素和槲皮素含量的方法。方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水为流动相梯度洗脱,柱温25℃,检测波长290 nm,流速0.2 mL·min^(-1),进样量1μL。结果 建立的分析方法方法学考察良好。花旗松素、槲皮素进样浓度分别在3.258~104.272μg·mL^(-1)、2.983~95.452μg·mL^(-1)内呈良好的线性关系(r~2=0.999 9),平均加样回收率为98.8%、98.8%,RSD值为1.9%、2.2%。结论 本方法简便、快速,可在同一波长下快速测定水红花子中花旗松素及槲皮素的含量,为水红花子药材质量控制提供参考依据。

水红花子醇提物的抗脂质过氧化作用

目的研究水红花子醇提物的抗脂质过氧化作用。方法用D-半乳糖造衰老小鼠模型,同时ig相当于水红花子0.6,1.2,2.4,4.8g·kg-1·d-1醇提物,观察其对衰老模型小鼠抗氧化系统的影响。结果0.6,1.2,2.4,4.8g·kg-1·d-1水红花子醇提物能使衰老模型小鼠血清、肝、肾组织中MDA明显下降;SOD及CSH-PX活力明显提高;脑组织中LF明显下降。结论水红花子醇提物有显著清除氧自由基,活性氧及抗脂质过氧化作用。

水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721的影响

目的:研究水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法:采用MTT法研究水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用及时效量效关系;并通过PI染色法和Annexin V-EGFP/PI双染法观察水红花子黄酮类成分作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后细胞周期DNA含量变化及细胞凋亡率。结果:水红花子黄酮类成分能调节SMMC-7721人肝癌细胞株G1/S转换,使肿瘤细胞发生S期阻滞,造成S期细胞堆积,阻断细胞的DNA合成和复制,阻滞肿瘤细胞进入G2/M期,从而抑制肿瘤细胞的增殖,诱导SMMC-7721细胞凋亡,且具有明显的时效及量效关系。结论:水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721具有明显的抑制作用,且抑制作用和时间剂量成线性关系,其作用机制为抑制肿瘤细胞的增殖和诱导该细胞的凋亡。

水红花子醇提物抑制大鼠组织脂质过氧化反应的体外作用研究

目的研究水红花子醇提物的抗氧化活性。方法用·OH生成系统Fe2++抗坏血酸诱导大鼠心、肝、肾组织匀浆脂质过氧化,用TBA比色法测定MDA含量;用NBT还原法测酵母多糖A刺激大鼠中性白细胞产生的O2-;用分光光度法测H2O2诱发的大鼠红细胞溶血度。结果6.3、12.5、25、50、100、200μg/LEFPO能不同程度抑制Fe2++抗坏血酸诱导的大鼠心、肝、肾脂质过氧化产物MDA生成,其抑制心、肝、肾MDA生成的IC50分别为31.8、32.5、40.2μg/L,量效关系均呈负相关,r分别为-0.886、-0.874及-0.918(P<0·01);能不同程度抑制酵母多糖A刺激中性粒细胞生成O2-,IC50为31.9μg/L,量效关系呈负相关,r为-0.873(P<0·01);能不同程度抑制H2O2诱发的红细胞氧化溶血,IC50为56.2μg/L,量效关系呈负相关,r为-0.888(P<0·01)。结论水红花子醇提物通过清除·OH、O2-及H2O2发挥抗氧化活性。

高效液相色谱法测定水红花子中芦丁与槲皮苷的含量

目的用高效液相色谱法测定水红花子中芦丁与槲皮苷的含量。方法芦丁的含量采用ShimadzuC_(18)柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为甲醇-0.05%H_3PO_4溶液(42:58),流速1.0mL·min^(-1),检测波长254nm,柱温25℃,用外标法定量;采用ShimadzuC_(18)柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%H_3PO_4溶液(45:55),流速1.0mL·min^(-1),检测波长350nm,柱温室温,用外标法定量,测定槲皮苷的含量。结果芦丁的线性范围0.053～0.53μg,r=0.9999;槲皮苷的线性范围0.40～2.00μg,r=0.9996。结论该方法简便,快速,线性关系良好。

紫外分光光度法测定水红花子中槲皮素的含量

目的采用紫外分光光度法测定水红花子中槲皮素的含量。方法在25℃、最大吸收波长为370nm处测吸光度。结果此法线性范围0．004～0．0119g／L内，r=0．9992，平均回收率为96．55％，RSD为0．78％（n=5）。结论用此方法可测量水红花子中槲皮素的含量。方法简便，灵敏度和准确度较高，结果满意。

HPLC测定水红花子中槲皮素的含量

目的：研究和测定不同产地、不同炮制品水红化子中槲皮素的含量.方法：采用HPLC法。色谱柱为Shim-pac kODS（4.6mm×150mm），流动相为甲醇-0．5％磷酸溶液（1：1），检测波长为360nm。线性范围0．0564—0．2820μg，r=0.9999，加样同收率为99．2％。RSD=2．70％。结论：本方法简便、快速、重现性好，准确度高，可用于控制水红花子的质量。

水红花子对小鼠免疫功能及迟发型超敏反应的抑制作用

目的研究水红花子对小鼠的免疫调节作用,并探讨其对迟发型超敏反应的影响.方法:用水红花子水煎剂对小鼠连续灌胃一周,采用MTT法检测脾淋巴细胞转化率、a-醋酸萘酯酶法检测T淋巴细胞数量,利用碳廓清实验检测吞噬细胞活性、定量溶血分光光度法检测IgM抗体生成量,并检测水红花子对DNCB诱导的迟发型超敏反应的影响.结果:与对照组相比,水红花子水煎剂可显著降低小鼠脾淋巴细胞的转化率,T淋巴细胞的数量、巨噬细胞的吞噬指数和IgM抗体生成量,可显著减轻耳部肿胀度,且差异均达到极显著水平.结论:水红花子可以明显抑制小鼠的细胞免疫和体液免疫功能,并能明显缓解由DNCB诱导的小鼠迟发型超敏反应.

水红花子消积止痛药效学实验研究

目的:通过药理学实验,比较水红花子生品与制品的水提物与醇提物消积止痛作用药效学差异。方法:离体肠管法、小肠炭末推进法、热板法、醋酸扭体法。结果:水红花子生品与制品的水溶性与醇溶性提取物的消积止痛作用药效不同。结论:制品水提物的消积止痛作用佳,与传统中医用药理论一致。

Box-Behnken设计-效应面法优化水红花子中总黄酮和花旗松素的提取工艺

目的优化水红花子中总黄酮和花旗松素的提取工艺。方法采用Box-Behnken设计,以水红花子总黄酮、花旗松素提取率为指标,并对2种指标进行归一化处理,优化水红花子最佳提取工艺。结果最优工艺条件为:乙醇体积分数为66%,提取时间为93 min,乙醇量为20倍,提取1次;提取实际值与预测值偏差为2.44%、-2.11%。结论方法简便合理,稳定,可预测性较优。

水红花子水提物的抗氧化活性

目的研究水红花子水提物的抗氧化活性及其机制。方法用D-半乳糖建立衰老小鼠模型,分别灌胃服用生药量0.8、1.6和3.2g/kg·b.w.的水红花子水提物(n=10),每日1次,共7周。分别用TBA比色法、亚硝酸盐法、DTNB法及Sohal法测定心、肝、肾中丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及脑中脂褐质(LF)含量。结果衰老小鼠心、肝、肾组织中MDA含量升高,SOD及GSH-PX活性降低,脑组织中LF升高。上述3种剂量的EFPO,能不同程度抑制脑组织中LF升高及心、肝、肾组织中MDA升高,其量效关系均呈负相关,相关系数分别为-0.963(相关性检验P<0.01)、-0.981(P<0.01)、-0.966(P<0.05)及-0.978(P<0.01);能不同程度抑制心、肝、肾组织中SOD活力下降,其量效关系均呈正相关,相关系数分别为0.984(P<0.05)、0.990(P<0.01)、0.985(P<0.01);能不同程度抑制心、肝、肾组织中GSH-PX活力下降,其量效关系均呈正相关,相关系数分别为0.984(P<0.01)、0.956(P<0.01)及0.957(P<0.01)。结论水红花子水提物可通过清除·OH,提高SOD及GSH-PX活力而发挥抗氧化活性。

水红花子花旗松素乙醇回流法提取工艺优化

研究水红花子花旗松素乙醇回流法提取工艺。在单因素试验的基础上,以乙醇浓度、提取时间、料液比为自变量,以花旗松素提取量为响应值,利用响应面法优化水红花子中花旗松素的提取条件。结果表明:花旗松素的最佳工艺条件为乙醇体积分数63%、提取时间3.4h、料液比1∶19(m∶V)、提取温度95℃、提取2次,该条件下,花旗松素提取量为7.2mg/g。

水红花子对LPS诱导流产小鼠子宫巨噬细胞的抑制效应及其保胎作用

目的:探讨水红花子对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠的免疫抑制及其保胎作用。方法:昆明种小鼠55只,随机分为对照组(A组,10只)和实验组。实验组又分为细菌脂多糖(LPS)处理组(B组),水红花子处理组(C组),水红花子及LPS双处理组(D组),每组各15只。观察妊娠结果,用酶组织化学、免疫组化和ELISA方法分别检测非特异性酯酶阳性(α-NAE+)、CD14+和CD204+巨噬细胞、TNF-α的变化。结果:B组小鼠流产率和胚胎吸收率均为100%(P<0.01);而D组流产率降低为13.33%,胚胎吸收率降至10.39%。与A组相比,在B组,α-NAE+、CD14+巨噬细胞数量和阳性面积,以及TNF-α含量均显著增加;在D组,环肌外侧极显著增多(P<0.01),但环肌内侧、功能层均接近正常水平。与A、B组相比,C、D组CD204+巨噬细胞数量和阳性面积均显著增多。结论:通过调节子宫巨噬细胞的表型、活性和TNF-α的分泌,可能是水红花子对抗LPS所致流产效应的机制之一。

水红花子炮制品化学成分研究

目的:研究水红花子炮制品的化学成分。方法:利用硅胶色谱柱进行分离,通过波谱数据和理化性质进行化合物结构鉴定。结果:共分离得到8个化合物,分别鉴定为正二十烷酸(Ⅰ),β-谷甾醇(Ⅱ),白桦酯酸(Ⅲ),22-O-(4-hydroxy-3-methoxy-cinnamyl)-docosanoic acid(Ⅳ),3,5,7-三羟基色原酮(Ⅴ),paprazine(Ⅵ),槲皮素(Ⅶ),花旗松素(Ⅷ),胡萝卜苷(Ⅸ)。结论:首次对水红花子炮制品进行了系统分离。

水红花子对免疫性肝损伤小鼠肝功能的影响

目的:观察人用口服剂量40倍的水红花子20g/(kg.d)对免疫性肝损伤小鼠的影响。方法:观察水红花子20g/(kg.d)对BCG/LPS致免疫性肝损伤模型小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响。结果:水红花子20g/(kg.d)肝脏病理损伤明显,血清ALT、AST均显著升高(P<0.01),肝组织SOD值明显下降(P<0.05),MDA明显升高(P<0.05)。结论:人用口服剂量40倍的水红花子20g/(kg.d)可提高免疫性肝损伤小鼠的肝脏损伤程度,具有肝毒性。其肝损伤的作用环节可能与诱导肝脏自由基的生成,降低自由基清除酶的功能,破坏自由基代谢的动态平衡有关。

水红花子黄酮类成分的HPLC指纹图谱研究

目的:对不同产地水红花子进行HPLC指纹图谱比较研究。方法:选择D iamonsilTMC18柱(250 mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.2%磷酸为流动相梯度洗脱,流速为1 m l/m in,检测波长为310 nm。结果:建立了水红花子黄酮类成分的指纹图谱,发现11个共有峰,确定了其相对保留时间和峰面积比值范围。结论:利用该指纹图谱,可以对不同产地水红花子药材进行鉴别,并可在一定程度上进行质量控制。

分光光度法测水红花子中花旗松素含量

目的:检测水红花子中花旗松素的含量。方法:采用紫外分光光度法,在常温下(25℃)290nm处,对水红花子乙醇提取物进行吸光度测定。结果:此方法线性范围:0.002～0.01 g/L,花旗松素浓度与吸光度线性关系:y=0.0724x+0.007,r^2=0.9986;平均回收率为99.37%,RSD=0.897%。结论:紫外分光光度法测定水红花子中花旗松素含量操作简便、快速和准确度高,具有一定实用价值。