水蛭液对热缺血肾保护作用的实验观察

文献指出,肾急性缺血引起的肾皮质,尤其外髓层血液瘀滞在急性肾功能衰竭(ARF)的发生、维持和转归上起着十分重要的作用,瘀血的程度和持续时间与肾功能的变化存在着相关性。

水蛭提取液中的氨基酸的HPLC测定

建立了HPLC法测定水蛭提取液中总氨基酸和游离氨基酸的含量。采用ODS柱,0.02mol/L醋酸钠溶液(pH7.20)-0.1mol/L醋酸钠溶液(pH7.20)-甲醇-乙腈为流动相进行梯度洗脱,检测波长为338nm和262nm。总氨基酸和游离氨基酸的回收率分别为97.8%和98.3%,RSD分别为1.76%和1.90%。

水蛭提取液对实验性脑内血肿吸收的病理学及动物行为的影响

目的:探索水蛭提取液对实验性脑内血肿吸收的作用。方法:采用成组设计的随机对照研究。脑出血模型用定量胶原酶注入大鼠尾状核来建立,观察水蛭提取液对大鼠神经功能缺损体征评分;血肿容积与血肿周围缺血,血肿周围脑组织水含量及病理改变的影响。结果:①神经功能缺损评分:3d时治疗组(1.96±0.29)分低于对照组(2.88±0.33)分(P=0.004),至第10天时治疗组评分为0,低于对照组(0.94±0.68)分(P=0.000)。②治疗后6,10d的大鼠脑内血肿治疗组犤(15.54±0.23),(1.39±0.39)μL犦比对照组犤(21.33±0.39),(5.69±0.34)μL犦明显缩小(P<0.05),同时血肿周围缺血范围治疗组小于对照组,脑水肿比对照组减轻。③水蛭提取液能加快脑出血后的病理组织修复,促进病灶周围血管内皮细胞、毛细血管和胶质细胞增生,无新鲜出血灶发现。结论:水蛭提取液对大鼠脑出血后脑内血肿有治疗作用,而不引起出血并发症。

水蛭提取液对实验性脑血肿周围组织热休克蛋白70与转移生长因子β-1表达的影响

目的探讨水蛭提取液对实验性脑血肿周围组织热休克蛋白70（HSPTO）及转移生长因子β-1（TGFβ-1）表达的影响。方法采用成组设计的随机对照研究，用定量胶原酶注人大鼠尾状核建立脑出血模型，并于制模后随机分为水蛭提取液治疗组和生理盐水对照组，分别经尾静脉注射水蛭提取液和生理盐水，每日1次；制模后每日给予神经功能缺损评分，术后第3d、6d及10d通过免疫组化染色观察鼠脑血肿周围脑组织HSPTO与TGFβ-1的表达，图像分析仪计算阳性细胞面积。结果脑出血后两组神经功能缺失评分均随时间延长而显著改善（P〈0．01～0．001），治疗组评分各时间点明显优于对照组（均P〈0．01）；术后第3d、6d及10d治疗组脑血肿周围组织HSPTO及TGFβ—1阳性细胞面积显著高于对照组（均P〈0．05）。结论水蛭提取液对实验性脑出血血肿周围组织保护作用机制可能与HSPTO与TGFβ—1表达增强有关。

水蛭提取液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放凝血因子的影响

目的 观察水蛭提取液对凝血酶诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）释放血管性血友病因子（vWF）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）、组织型纤溶酶原激活物（t-PA）的影响,探讨水蛭抗凝的作用机制.方法 体外培养 HUVECs,将生长良好的2～3代细胞分为对照组、凝血酶刺激组及水蛭提取液高、中、低剂量组5组.将生药浓度600、300、150 mg/L的水蛭提取液加入到10 kU/L凝血酶刺激的HUVECs培养12 h,对照组加等量RPMI 1640培养液.用酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养上清液中vWF、PAI-1、t-PA的含量.结果 与对照组比较,凝血酶刺激组细胞培养上清液中vWF、PAI-1（μg/L）含量显著升高[vWF：（11.01±0.54）%比（7.05±0.49）%;PAI-1：72.26±0.85比55.89±1.26,均P〈0.01],t-PA（μg/L）含量显著降低（15.15±1.41比34.29±1.22,P〈0.01）.与凝血酶刺激组比较,水蛭提取液高、中、低剂量组vWF、PAI-1含量[vWF：（9.48±0.64）%、 （8.57±0.50）%、 （7.97±0.44）%;PAI-1：58.30±0.90、 62.69±1.01、 67.47±1.28]显著降低,t-PA含量（32.59±1.46、 26.40±0.82、 21.06±1.13）显著升高（均P〈0.01）.说明水蛭提取液能显著减弱凝血酶诱导HUVECs释放vWF、PAI-1,增强凝血酶促进HUVECs表达t-PA.结论 水蛭具有明显的抗凝作用,其作用机制可能为参与调节内皮细胞释放vWF,调节纤溶平衡及保护受损的血管内皮细胞.

水蛭提取液对恒河猴视网膜血管内皮细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察渗滤法水蛭提取液对恒河猴视网膜血管内皮细胞RF/6A细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用MTT法观察不同浓度水蛭提取液(0g.L-1、8g.L-1、16g.L-1、32g.L-1、64g.L-1、128g.L-1)对RF/6A细胞增殖的影响,筛选最佳抑制浓度,应用流式细胞仪观察水蛭提取液对凝血酶诱导的RF/6A细胞周期的影响。结果8g.L-1、16g.L-1浓度组水蛭提取液对血管内皮细胞RF/6A有促进生长作用,与空白对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);32g.L-1、64g.L-1、128g.L-1浓度组水蛭提取液对血管内皮细胞RF/6A均有明显抑制作用,与空白对照组相比差异也均有统计学意义(均为P<0.05);24hIC50为97g.L-1;64g.L-1为水蛭提取液的最佳抑制浓度,用于后期实验。流式细胞仪检测发现:水蛭提取液组G1期细胞比例(91.95±1.69)%高于其他各组,合药组(83.60±1.88)%高于凝血酶组(77.78±3.22)%,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。凝血酶组S期细胞比例(21.75±2.94)%高于其他各组,水蛭提取液组(7.55±2.45)%低于合药组(14.42±1.48)%,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论不同浓度的水蛭提取液对视网膜血管内皮细胞RF/6A的增殖产生不同作用,64g.L-1水蛭提取液可以抑制血管内皮细胞的增殖,将细胞阻滞在G1期,可能是一种潜在的抗新生血管药物。

不同方法水蛭提取液对体外培养LEC影响的实验研究

目的:观察不同方法水蛭提取液对体外培养的晶状体上皮细胞(LEC)生长的影响,比较不同提取方法的作用强度。方法:以五种常用中药提取法(水醇双提法、乙醇回流法、水提法、水提醇沉法、渗滤法)提取水蛭;植块培养法体外培养牛LEC,各方法水蛭提取液组以等比组距设置药物浓度,分别作用于体外培养LEC各24、72h;以MTT法测定OD值,并计算细胞抑制率,以克贝尔法计算各提取液组24、72hID50值。结果:水蛭渗滤液24hID50与水蛭水醇双提液、水蛭乙醇回流液24hID50比较有显著性差异(P<0.05);水蛭水提醇沉液24hID50与水蛭乙醇回流液24hID50比较有显著性差异(P<0.05)。结论:五种水蛭不同方法提取液均能不同程度抑制体外培养LEC的生长,其中水提醇沉液、渗滤液作用更为明显。

水蛭提取液对实验性脑内血肿周围组织及血浆D-D、Fbg、PT、aPTT的影响

目的:探索水蛭提取液对实验性脑内血肿周围组织及血浆D-D、Fbg、PT、aPTT的影响。方法:采用成组设计的随机对照研究。用定量胶原酶注入大鼠尾状核来建立脑出血模型,检测血肿周围脑组织及血浆生化指标(D-D、Fbg、PT、aPTT)变化。结果:水蛭提取液治疗组较生理盐水对照组能升高血浆与血肿周围脑组织D-D含量(但以后者为主),延长血浆aPTT,不影响血浆PT、Fbg。结论:水蛭提取液促进实验性脑内血肿吸收的可能机制与局部纤溶活性增高有关。

水蛭提取液体外对人视网膜色素上皮细胞PAR-1表达的影响

目的:研究水蛭提取液对人视网膜色素上皮(retinal pigment epichelial,RPE)细胞PAR-1表达的影响。方法:水蛭提取液体外单独或与凝血酶共同作用于人RPE细胞后,用免疫荧光法测定PAR-1的荧光表达。结果:PAR-1的免疫荧光光密度值比较:(1)凝血酶组与正常对照组比较,PAR-1的IOD值下降(1608±675,4036±1134,P<0.01)。(2)单加水蛭提取液组与正常对照组比较,PAR-1的IOD值升高(9998±2374,4036±1134,P<0.01)。(3)凝血酶和水蛭提取液同时加药组与凝血酶组比较,PAR-1的IOD值显著升高(19664±5436,1608±675,P<0.01)。表明水蛭提取液能竞争性抑制凝血酶对PAR-1的活化作用。结论:水蛭提取液能抑制凝血酶诱导的人RPE细胞膜上的PAR-1的活化,阻断PAR-1介导的细胞信号传导。

水蛭提取液对体外培养RF/6A的细胞液中MMP-2、IV型胶原含量的影响

目的初探水蛭提取液对新生血管生长的作用机制。方法采用酶联免疫法、放射免疫法检测不同时间点水蛭提取液对细胞培养上清液中MMP-2、IV型胶原表达的影响。结果 12 h各组间比较,空白组、水蛭组MMP-2的OD值分别为0.137±0.006、0.136±0.007,表达低于凝血酶组0.165±0.018,组间差异均有统计学意义(均为P<0.05)。空白组12 h的MMP-2含量要低于2 h、6 h,差异均有统计学意义(均为P<0.05);水蛭组2 h时MMP-2的分泌高于6 h、12 h,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。2 h时空白组IV型胶原的含量(20.67±1.02)ng·mL-1高于凝血酶组(15.58±3.40)ng·mL-1、合药组(15.75±6.23)ng·mL-1,差异均有统计学意义(均为P<0.05);6 h时水蛭组IV型胶原的含量明显高于其他3组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);12 h时观察,空白组IV型胶原的含量(21.33±2.75)ng·mL-1,明显高于合药组(16.49±1.59)ng·mL-1,差异有统计学意义(P<0.05),水蛭组IV型胶原的含量明显高于凝血酶组及合药组,差异有统计学意义(P<0.05)。空白组2 h、12 h IV型胶原的含量均较6 h高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);凝血酶组IV型胶原的合成呈增加趋势,12 h与2 h相比,差异有统计学意义(P<0.05);水蛭组IV型胶原的合成明显增加,6 h、12 h IV型胶原的含量显著高于2 h,差异有统计学意义(P<0.05)。结论64 g·L-1水蛭提取液可以促进IV型胶原合成,抑制MMP-2的分泌,对新生血管的形成有抑制作用。

水蛭提取液对正常及血瘀模型大鼠体外血栓形成及血小板聚集功能的影响

水蛭是一味传统的破血逐瘀药物,近年来临床将水蛭单味或复方用于治疗脑血肿、脑栓塞、冠心病等心脑血管病取得了较好的疗效,本文以正常和血瘀模型大鼠为实验对象,观察了水蛭提取液对体外血栓形成及血小板聚集功能的影响。1 材料1.1 动物 SD大鼠,雄性,体重230～260g,由第四军医大学实验动物研究中心提供,动物合格证号:陕医动字第08014号。

水蛭提取液对大鼠上皮组织炎症的效果观察

目的研究水蛭提取液对实验性上皮组织炎症具有抗炎作用。方法对30只昆明小白鼠进行全层皮肤缺损处理,利用金黄色葡萄球菌建立皮肤炎症模型,以涂抹水蛭提取液为A组,涂抹红霉素为B组、涂抹凡士林为C组,分别记录相应药物涂抹前后的红肿的高度、面积,结痂的面积数值,将数值进行对比与统计学分析。结果水蛭提取液A组在红肿高度平均下降0.32mm,面积平均减小5.73 mm消炎程度方面与红霉素B组相比抗炎能相仿;A组与凡士林C组相互比较,A组抗炎效果明显(P<0.05),具有显著性差异。结论水蛭提取液对大鼠实验性上皮组织炎症具有抗炎作用。

水蛭提取液对培养的大鼠脑皮质微血管内皮细胞分泌组织型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活剂抑制物1的影响

目的探讨水蛭提取液(HEL)对培养的大鼠脑皮质微血管内皮细胞分泌组织型纤溶酶原激活物(tPA)、纤溶酶原激活剂抑制物1(PAI-1)的影响。方法建立大鼠大脑皮质微血管内皮细胞培养实验模型。MTT法筛选HEL的有效浓度。检测培养上清液的tPA、PAI-1含量与活性变化,RT-PCR检测经HEL治疗组与生理盐水对照组处理后的微血管内皮细胞tPA与PAI-1的表达,免疫组化检测两组微血管内皮细胞tPA的表达。结果 HEL在一定浓度范围内(0.25～1mg/μl)可促进微血管内皮细胞的生长,有剂量依赖关系(P<0.05)。HEL治疗组较生理盐水对照组能促进培养的大鼠脑皮质微血管内皮细胞分泌tPA,同时提高其活性,促进tPA mRNA的表达及tPA免疫活性表达,且呈剂量依赖性表达增强(P<0.01)。结论 HEL在体外能激活内源性纤溶系统。

水蛭地龙提取液治疗急性脑梗死的疗效观察

目的探讨水蛭地龙提取液(extract liquor from hirudo and earthworm,ELHE)治疗急性脑梗死的疗效。方法 175例急性脑梗死患者被随机分为2组:对照组85例,进行基础治疗;治疗组90例,在基础治疗的同时静脉给予ELHE(20ml+等渗盐水250ml静滴1次/d,连续2周)。观察2组脑梗死患者治疗前、后神经功能缺损评分及活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)、国际标准化比值(INR)的变化。结果 ELHE组患者经过14d治疗,其神经功能缺损评分由19．42±4．15下降为10．35±3．50,APTT、PT分别由(28．1±3．7)s、(12．1±3．4)s延长为(41．8±5．1)s、(19．7±2．2)s,与对照组比较均有显著差异(P< 0．05)。结论 ELHE具有明显抗凝、促纤溶、抑制血小板聚集,改善血液循环的作用,对急性脑梗死的治疗和预防安全有效。

水蛭地龙提取液治疗缺血性心脏病作用机理的研究

目的观察水蛭地龙提取液对冠心病治疗的效果。方法入选诊断为冠状动脉粥样硬化性心脏病的患者60例,随机分为水蛭地龙提取液组30例,肝素治疗组30例另设一般基础资料相仿的30例无明确心肌缺血,未进行抗凝治疗的患者作为对照组。观察了3组患者的凝血时间包括APTT、PT、DD、CK-Mb、NO、FP-A的含量。结果水蛭地龙提取液组在治疗后APTT、PT、NO、DD值明显大于对照组,CK-Mb、FP-A值明显低于对照组;结论水蛭地龙提取液可以改善患者的高凝状态;具有促纤溶作用;具有心肌保护作用。

水蛭提取液对人视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用

目的:研究水蛭提取液对人视网膜母细胞瘤WERI-RB-1细胞的抑制作用。方法:采用不同浓度水蛭提取液(0.02、0.04、0.08、0.16U/mL)作用于体外培养的WERI-RB-1细胞0、24、48、72h,经CCK-8法筛选最佳药物干预浓度和时间进行后续实验。将体外培养的WERI-RB-1细胞分为对照组(正常培养基培养)和实验组(含水蛭提取液培养基培养),采用流式细胞仪检测药物对细胞周期和细胞凋亡的影响,Transwell侵袭实验检测药物对细胞侵袭能力的影响。结果:根据CCK-8法检测结果选择0.04、0.08U/mL水蛭提取液作用48h为最佳干预条件进行实验。水蛭提取液干预的细胞主要阻滞在G2/M期,其中0.04、0.08U/mL实验组处于G2/M期的阳性细胞率分别为(12.59±5.36)%、(14.79±4.12)%,均明显高于对照组[(3.00±2.32)%,P<0.01]。水蛭提取液可诱导细胞凋亡,其中0.04、0.08U/mL实验组细胞凋亡率分别(37.91±3.44)%、(33.05±2.25)%,均明显高于对照组[(4.64±2.56)%,P<0.01]。Transwell侵袭实验检测结果显示,实验组Transwell小室下细胞数明显少于对照组,表明水蛭提取液能够抑制细胞侵袭。结论:水蛭提取液在体外实验中能够抑制人视网膜母细胞瘤细胞的增殖、侵袭,并诱导细胞凋亡。

活性炭对水蛭酶解液脱腥脱色试验研究

目的:采用活性炭方法对水蛭多肽提取液进行脱腥脱色处理,最终得出最佳脱腥脱色方法。方法:分别采用粉末活性炭、颗粒活性炭及与白陶土的联合方法对水蛭酶解液进行脱腥脱色处理,确定最佳方法,并对最佳脱色脱腥方法进行分析,得出组合之间的具体参数。结果:通过实验得出,采用粉末活性炭与白陶土联合方法对水蛭酶解液进行脱腥脱色效果最佳,即水蛭酶解液p H为5.0,粉末活性炭加入量为1.0%,白陶土加入量为2.5%,活性炭脱色温度为60℃,反应时间40 min时,再加白陶土,先振荡40 min,后常温静置吸附60 min,在此条件下得到的水蛭酶解液基本无颜色、澄清,同时腥味感官评分可以达到4.0以上。结论:试验结果表示采用粉末活性炭与白陶土联合方法可以达到脱腥脱苦的目的,同时也提高了水蛭酶解液的品质,为水蛭酶解液以后的深度开发奠定了基础。

水蛭地龙提取液对抗大鼠心肌缺血作用的实验研究

目的观察水蛭地龙提取液的抗心肌缺血作用,为该药治疗心绞痛、心肌梗死等缺血性心脏病提供实验依据。方法采用结扎冠状动脉制作心肌梗死模型,将60只大鼠分为模型对照组(模型组)、假手术组、水蛭地龙提取液治疗组(治疗组),观察各组大鼠治疗后凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、部分凝血酶原时间(APTT)、D-二聚体(DD)及组织纤溶酶原激活物(t-PA)含量的变化。测定各组大鼠血清中磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,并测定心肌梗死范围。结果与假手术组与模型对照组比较,治疗组TT、PT、APTT明显延长(P<0.05或P<0.01),血清CPK、LDH、MDA含量降低(P<0.05或P<0.01),且可提高SOD活性,显著减少心肌梗死范围。结论水蛭地龙提取液有抗心肌缺血作用,这一作用与其抗凝促纤溶、心肌保护、改善心肌血液循环有关。