水蛭渗滤液对猴RF/6A细胞表达TNF-α的影响

目的观察水蛭渗滤液对凝血酶诱导下猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞(RF/6A)表达促血管生成因子TNF-α的影响。方法采用消化培养法,对猴RF/6A细胞进行体外传代培养,选择20μ/ml的凝血酶作为诱导浓度,分别作用于RF/6A细胞2、4、6、8、10、12及24 h,用ELISA法观察凝血酶对视网膜血管内皮细胞表达TNF-α的诱导情况。观察在有或无凝血酶诱导下水蛭渗滤液(64 mg/ml)对视网膜血管内皮细胞表达TNF-α的影响。结果 (1)凝血酶作用2 h,TNF-α的表达开始增加,作用4 h,TNF-α的表达达到最大,持续至10 h;4、6、8 h与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.05);当凝血酶作用时间达12 h,TNF-α的表达开始下降,凝血酶组与空白组12 h和24 h比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)水蛭渗滤液对有或无凝血酶诱导组都能下调TNF-α的表达(P<0.05)。结论水蛭渗滤液能下调凝血酶诱导下猴RF/6A细胞表达TNF-α。

水蛭渗滤液对凝血酶诱导的人视网膜色素上皮细胞周期的影响

目的研究水蛭渗滤液对凝血酶诱导的人视网膜色素上皮细胞周期的影响，从而探讨中药水蛭用于防治PVR的作用机制。方法（1）采用消化培养法，对人视网膜色素上皮细胞进行体外传代培养。（2）在前期实验基础上选择128mg／ml、64mg／ml、32mg／ml、16mg／ml、8mg／ml浓度的水蛭渗滤液，用流式细胞仪测定细胞周期，观察水蛭渗滤液单独或与0．5NIHU／ml凝血酶共同作用于人视网膜色素上皮细胞24h对细胞周期的影响。（3）选择64mg／ml水蛭渗滤液，观察单独或与0．5NIHU／ml凝血酶共同作用于人视网膜色素上皮细胞6、12、24和48h对细胞周期的影响。结果（1）水蛭渗滤液在所选择浓度范围内具有使人视网膜色素上皮细胞抑制在G0／G1期的趋势，其中最显著的是64mg／ml水蛭渗滤液可以将77．9％的人视网膜色素上皮细胞抑制在G0／G1期，使进入S期的细胞数减少，细胞增殖活性降低。（2）在观察的时限内，64mg／ml水蛭渗滤液随作用时间的延长，能使更多的人视网膜色素上皮细胞抑制在G0／G1期，增殖活性降低。结论证实了水蛭渗滤液能抑制体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖。其机制可能是作用于细胞周期，使更多的视网膜色素上皮细胞抑制在G0／G1期，进入S期的细胞数减少，细胞增殖活性降低。