新型水蛭肽嵌合蛋白治疗脑出血后脑水肿的实验研究

目的探讨新型基因工程药物水蛭肽嵌合蛋白(TNHH)对大鼠脑出血后脑水肿的治疗作用及其机制。方法将96只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑出血模型组、TNHH组,以自体血注入大鼠尾状核方法建立脑出血模型,假手术组只进针不注血。TNHH组静脉注射TNHH(2mg/kg),分别于造模前30min及造模后每12h给药1次。于6,24,72,168h时分别用Longa标准测定神经功能缺损,干、湿重法检测脑含水量,分光光度法测定脑血肿周围脑组织髓过氧化物酶(MPO)活性。结果与假手术组相比,脑出血模型组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、MPO活性均显著增高(P<0.05或P<0.01);与脑出血模型组相比,TNHH组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、MPO活性显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论 TNHH对大鼠脑出血后脑水肿有治疗作用,其机制可能与抑制凝血酶活性、降低中性粒细胞浸润有关。

重组人白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白保护大鼠局灶性脑缺血损伤

目的观察重组人白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白(TNHH)对大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法本实验采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)的局灶性脑缺血模型,将大鼠随机分为5组:1空白对照组,2假手术组,3脑缺血损伤模型组,4溶媒对照组和5人白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白(6.75 mg·kg-1)组。持续性脑缺血12 h后进行神经行为学评分,处死动物后用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定脑梗死面积,并对脑组织切片进行HE染色检测脑组织病理损伤情况,酶联免疫分析(ELISA)和放射免疫法分别测定血清中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β水平。结果与缺血损伤模型组相比,人白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白可以明显改善大鼠脑缺血损伤后的神经行为,减少脑梗死面积,减轻脑水肿程度和脑组织病理损伤,显著降低血清中肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β水平。结论人白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白具有明显的抗炎、抗水肿作用,可以有效改善大鼠局灶性脑缺血的损伤。

注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白处方的筛选及优化

目的 对注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白(human recombinant neutrophil inhibitory factor and hirulog hybrid,TNHH)的处方及工艺进行筛选和优化,并考察其稳定性。方法 以单因素试验结果为依据,pH范围、甘露醇用量、聚维酮K30用量为自变量,高分子蛋白含量为响应值,采用CCF响应曲面设计试验,分析各自变量及其交互作用对注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白中高分子蛋白含量的影响,筛选出最优处方。为了方便操作,对最优处方调整后制备中试规模3批样品,分别置于40℃、相对湿度(relative humidity,RH)75%条件下2、4周,2~8℃条件下3、6个月,取样,检测外观、pH、反相高效液相色谱(reversed phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)纯度和体积排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SECHPLC)纯度,验证该处方和工艺的稳定性。结果 筛选出的最优处方为:pH 4.982 6,甘露醇用量7.986 4%,聚维酮K30用量1.902 7%,最终调整为pH 5.0,甘露醇用量8.0%,聚维酮K30用量2.0%。采用优化处方和工艺制备的注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白制剂质量稳定,符合临床用药要求。结论 优选的注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白制剂处方工艺合理,适合工业化生产。