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用SDS凝胶电泳法测定水解丝蛋白的分子量
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作者 吴斗思 卢淑琴 吴献役 《天津纺织工学院学报》 北大核心 1996年第4期23-26,共4页
低分子量水解丝蛋白对皮肤有良好的保湿作用和保香效果,是高级洗发、护肤化妆品的优质添加剂.本文作者用改进的SDS凝胶电泳法对丝素课题组实验室生产的水解丝蛋白产品的分子量进行了测定,测定表明该产品分子量分布在43000-... 低分子量水解丝蛋白对皮肤有良好的保湿作用和保香效果,是高级洗发、护肤化妆品的优质添加剂.本文作者用改进的SDS凝胶电泳法对丝素课题组实验室生产的水解丝蛋白产品的分子量进行了测定,测定表明该产品分子量分布在43000-2900范围,分子量在10000以下的低分子蛋白成份含量高于50%,品质上好,可用于工业产品生产. 展开更多
关键词 SDS凝胶电泳法 水解丝蛋白 分子量测定
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丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂高通量筛选模型的建立及应用 被引量:4
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作者 李健蕊 武燕彬 +3 位作者 司书毅 陈鸿珊 蒋建东 彭宗根 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期98-101,共4页
目的应用荧光共振能量转移(FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)丝氨酸蛋白水解酶(NS3-4A)活性,建立HCV蛋白酶抑制剂筛选模型。方法将质粒pMAL-c2/NS3-4A转化到大肠杆菌K12TB1中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析柱纯化得... 目的应用荧光共振能量转移(FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)丝氨酸蛋白水解酶(NS3-4A)活性,建立HCV蛋白酶抑制剂筛选模型。方法将质粒pMAL-c2/NS3-4A转化到大肠杆菌K12TB1中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析柱纯化得到麦芽糖结合的NS3-4A融合蛋白,用FRET法测定蛋白水解酶活性,建立特异性蛋白酶抑制剂筛选模型,优化反应体系,评价模型的可靠性。结果建立了HCV蛋白酶抑制剂高通量筛选模型,经优化确定了酶及底物用量。在模型可靠性评价中,Z因子高达0.80,变异系数为1.91%。蛋白酶的Km值为4.74μmol/L,测得已知HCV蛋白酶抑制剂BILN 2061的Ki值为0.30 nmol/L。结论建立的HCV丝氨酸蛋白酶抑制剂FRET法筛选模型稳定可靠,适用于高通量筛选。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 氨酸蛋白水解 高通量筛选模型 荧光共振能量转移
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纤维蛋白溶解系统与缺血性脑血管病 被引量:8
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作者 李振 丁素菊 《国外医学(脑血管疾病分册)》 2003年第1期59-61 , ,共3页
纤维蛋白溶解系统在缺血性脑血管病的发生和发展中起着重要作用。组织型纤溶酶原激活物(tPA)活性降低、tPA抑制物活性增高是缺血性脑血管病的主要危险因素之一。长期以来,调节纤维蛋白溶解系统的功能是临床治疗缺血性脑血管病的手段之一... 纤维蛋白溶解系统在缺血性脑血管病的发生和发展中起着重要作用。组织型纤溶酶原激活物(tPA)活性降低、tPA抑制物活性增高是缺血性脑血管病的主要危险因素之一。长期以来,调节纤维蛋白溶解系统的功能是临床治疗缺血性脑血管病的手段之一,tPA也被直接用于缺血性脑血管病的治疗。但近年来的研究表明,tPA能够促进缺血或再灌注后兴奋性毒性诱导的神经元死亡,增大梗死面积。tPA的天然抑制物神经系统丝氨酸蛋白水解酶抑制物neuroserpin却能使脑梗死体积缩小,减少神经元脱失。 展开更多
关键词 缺血性脑血管病 纤维蛋白溶解系统 组织型纤溶酶原激活物 危险因素 神经系统氨酸蛋白水解酶抑制物
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结核分枝杆菌ATP依赖的丝氨酸蛋白酶蛋白水解亚基1基因的原核表达 被引量:1
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作者 张春燕 杨春 +3 位作者 李岱容 穆柳青 杨静 冯鑫 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第6期792-794,803,共4页
目的构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)ATP依赖的丝氨酸蛋白酶蛋白水解亚基1(ATP-dependent Clp proteolytic subunit 1,ClpP1)基因重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达重组蛋白。方法从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DN... 目的构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)ATP依赖的丝氨酸蛋白酶蛋白水解亚基1(ATP-dependent Clp proteolytic subunit 1,ClpP1)基因重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达重组蛋白。方法从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中PCR扩增ClpP1基因,插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1,转化大肠埃希菌B21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1经双酶切和测序鉴定,证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约35 000,可与鼠抗His单克隆抗体特异性结合。结论成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1,并在大肠埃希菌中表达了重组蛋白,为进一步研究ClpP1蛋白在MTB中的生物学特性奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 ATP依赖的氨酸蛋白蛋白水解亚基1 原核细胞 基因表达
原文传递
牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的分泌表达、纯化和活性鉴定 被引量:12
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作者 孙自勇 陈均勇 +4 位作者 陈新园 汪晶 田鹏鹏 吴盛 刘建宁 《南京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期41-48,共8页
 用RT_PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,EnterokinaseLightChain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichiapastorisGS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn_Sephar...  用RT_PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,EnterokinaseLightChain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichiapastorisGS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn_Sepharose亲和层析一步纯化,从每升培养液可获得1.6mgEKLC,其纯度达90%以上.酶反应动力学结果表明,EKLC对小分子底物Gly_Asp_Asp_Asp_Asp_Lys_β_naphthylamide的Km为(753±42)mol/L,kcat为(31.5±3.8)s-1.对硫氧化还原蛋白-脑钠素融合蛋白(Trx_hBNP)的酶解作用显示,当酶与底物重量比大于1∶100时,经37℃保温5h后,超过75%的融合蛋白被裂解.上述结果表明,EKLC能够特异识别并水解Asp_Asp_Asp_Asp_Lys_肽键,是一种能将融合蛋白中目标蛋白与载体蛋白裂解释放的有效工具酶. 展开更多
关键词 肠激酶 毕赤酵母 分泌表达 纯化 酶切 免疫印迹 氨酸蛋白水解
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Ca^(2+)激活猪凝血酶原作用的初步研究 被引量:4
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作者 辛春艳 陈英珠 +3 位作者 吴萌 籍宝霞 刘玉翠 邹岳奇 《河北省科学院学报》 CAS 2001年第3期171-173,共3页
为探讨Ca2 + 激活猪凝血酶原的最适工作浓度和激活时间 ,以新鲜猪血为材料 ,采用HAc等电点沉淀法获取凝血酶原后 ,添加 0 .2 5mol/LCaCl2 作为凝血酶原激活剂 ,使Ca2 + 达到不同终浓度 ,并经过不同激活时间进行对比试验。结果显示以Ca2... 为探讨Ca2 + 激活猪凝血酶原的最适工作浓度和激活时间 ,以新鲜猪血为材料 ,采用HAc等电点沉淀法获取凝血酶原后 ,添加 0 .2 5mol/LCaCl2 作为凝血酶原激活剂 ,使Ca2 + 达到不同终浓度 ,并经过不同激活时间进行对比试验。结果显示以Ca2 + 单一因子激活猪凝血酶原的最适CaCl2终浓度为 0 .0 5mol/L ;最适激活时间为 1.5h。使Ca2 + 激活猪凝血酶原的实验条件得以确立。 展开更多
关键词 凝血酶原 激活 盐析 钙离子 氨酸蛋白水解 HAc等电点沉淀法
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从猪血中提取纯化凝血酶方法的改进 被引量:3
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作者 周文静 吕嘉枥 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期199-199,共1页
关键词 提取纯化 猪血 氨酸蛋白水解 工业化生产 血液凝固 猪凝血酶 制备工艺 技术要求 环境污染 资源浪费 专一性 止血药 酶制备 国内外 极大的
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基于树突状细胞的卵巢癌免疫治疗策略
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作者 赵清平 高国兰 彭芝兰 《实用癌症杂志》 2003年第2期213-215,共3页
关键词 卵巢癌 免疫疗法 树突状细胞 T淋巴细胞 肿瘤标志物 氨酸蛋白水解酶类 基质金属蛋白
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Physico-Chemical Properties of a Water-Insoluble Silk Fibroin Film
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作者 孙东豪 胡景芝 +2 位作者 戴礼兴 李明忠 白伦 《Journal of Donghua University(English Edition)》 EI CAS 2010年第4期566-570,共5页
The conventional silk fibroin(SF)films obtained by casting from SF aqueous solution are amorphous,and easily dissolved in water.This defect limits the practical use of SF films in biomedical field.A new water-insolubl... The conventional silk fibroin(SF)films obtained by casting from SF aqueous solution are amorphous,and easily dissolved in water.This defect limits the practical use of SF films in biomedical field.A new water-insoluble silk fibroin film(an SF-FA film)could be simply prepared by casting from SF formic acid solution.The physical properties and moisture permeability of SF-FA films were examined.The results show that the SF-FA film swollen in water exhibits outstanding pliability.The weight loss of SF-FA films in water is also very little.The unique physical properties for the SF-FA film in the wet relate to the intrinsic structure of the fibroin film.The cell viability of rat embryo dermal fibroblasts seeded on the control films and the SF-FA films was evaluated by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)assay.Results show that the optical density(OD)value of the SF-FA film is almost the same as that of the conventional SF film treated with alcohol,therefore,the SF-FA film has good cell compatibility.In addition,the SF-FA film is also a biodegradable material.Because of their good transparency,it is helpful in study of clinical experiment with the SF-FA films. 展开更多
关键词 silk fibroin water-insoluble film BIOMATERIALS
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发色底物法测定血浆激肽释放酶原及其临床应用
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作者 袁承泰 袁岳沙 《湖北省卫生职工医学院学报》 1989年第2期40-42,共3页
1986年以来,国内开始应用人工合成的发色性多肽底物(Chromogenic Peptide Substrate,CPS)测定丝氨酸蛋白水解酶的活性,其灵敏度高、测定迅速,日益引起人们的重视。本文简要介绍发色底物法测定血浆激肽释放酶原及其临床应用。
关键词 发色底物法 血浆激肽释放酶 临床应用 测定 发色性 氨酸蛋白 灵敏度 氨酸蛋白水解 接触系统 凝血酶
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