缺氧缺血对新生大鼠脑组织半胱氨酸蛋白水解酶激活因子蛋白表达的影响

目的探讨缺氧缺血(HI)对新生大鼠脑组织半胱氨酸蛋白水解酶激活因子(Smac)蛋白表达的影响。方法构建新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)动物模型,实验动物随机分为HIE模型组、假手术组和正常对照组。在HI24、48、72、96h不同时间点取新生大鼠缺血侧大脑半球的海马组织,应用Westernblot技术测定其Smac蛋白水平。用比色法测定其Caspase-3活性。应用SPSS10.0软件进行单因素方差分析。结果HIE模型组大鼠海马组织在24、48、72、96h各时间点Smac蛋白水平均显著高于假手术和正常对照组(Pa<0.01),72h达到高峰,而假手术组和正常对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。HIE模型组72h时间点,海马组织Smac蛋白水平与Caspase-3活性呈显著正相关(r=0.7131P<0.05)。结论HI对新生大鼠脑组织的损害机制,可能涉及到Smac基因的蛋白表达。

血小板活化因子水解酶基因突变与原发性肾病综合征的相关性

目的研究血小板活化因子水解酶(PAF-AH)基因突变与不同类型原发性肾病综合征(PNS)的相关性。方法94例PNS患儿,依据对激素治疗的效应分为激素敏感型NS(SSNS)组37例,激素耐药型NS(SRNS)组26例,激素依赖型NS(SDNS)组31例,239例健康对照组儿童作为对照,应用聚合酶链反应(PCR)及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析的方法检测其PAF-AH基因第9外显子-994位点基因型及等位基因频率,同时对各种PAF-AH基因型的PNS患儿的病情反复情况进行对比分析。结果NTNS患儿血浆型PAF-AH基因-994位点基因突变频率显著高于STNS及健康对照组;所有PNS及SSNS、SRNS与健康对照组儿童比较,PAF-AH基因第9外显子-994位点基因突变频率差异无统计学意义,SDNS组突变频率显著高于健康对照及SSNS组;PAF-AH基因第9外显子-994位点基因GT型或TT型第1年内反复次数显著高于GG型者。结论血浆型PAF-AH基因第9外显子-994位点基因突变的PNS患儿在临床类型上多为NTNS,且易于在以后的治疗中出现依赖倾向。

银屑病患者血浆血小板活化因子乙酰水解酶活性变化及其临床意义

目的 探讨银屑病患者血浆血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)活性变化在银屑病发病机制中的作用。方法 采用酶水解底物显色法测定银屑病患者血浆PAF-AH活性。结果 银屑病患者血浆PAF-AH活性明显低于健康对照者(P<0.01)。进展期银屑病患者的血浆PHF-AH活性明显低于静止期和退行期患者(P<0.01),静止期组和退行期组的差异不具有显著性(P>0.1)。结论 PAF-AH活性不足可能是银屑病发病的重要内源性因素之一,其活性水平与银屑病的病情活动性具有相关性,在进行病情及预后判断时可能具有一定的参考意义。

哮喘患儿血小板活化因子乙酰水解酶活性的研究

目的 探讨哮喘患儿血小板活化因子乙酰水解酶 (PAF AH)活性与病情的关系 ,及其活性与基因型的关系。方法 应用酶水解底物显色法测定不同病情哮喘患儿和健康儿童PAF AH活性。应用等位基因特异性聚合酶链式反应 (AS PCR)技术检测PAF AH基因第 9外显子Val2 79Phe基因型。结果 重度哮喘组血浆PAF AH活性明显低于轻、中度哮喘组和对照组 ,酶活性缺失率重度组占 15.4% ,而轻、中度哮喘组和对照组酶活性缺失率占 2 %～ 3 %。哮喘组及对照组 3种基因型 (Val/Val、Val/Phe和Phe/Phe)血浆PAH AH活性间比较有显著性差异 (P均 <0 .0 1) ,同一种基因型PAH AH活性哮喘组与对照组相比无显著性差异 (P >0 .0 5)。结论 血浆PAF AH活性与哮喘严重程度相关联 ,重度哮喘组酶活性显著低于轻、中度哮喘组和对照组 ;血浆PAF AH活性与PAF AH(Val2 79Phe)

原发性肾病综合征与血小板活化因子水解酶的相关性分析

目的:观察原发性肾病综合征(primary nephritic syndrome,PNS)与血小板活化因子水解酶(platelet activating factor cetylhydrolase,PAF-AH)相关性关系。方法:选择2013年1月至2013年6月收治的原发性肾病综合征患者48例作为研究对象,均为初治患者,分为单纯性肾病综合征组(STNS组)31例及肾炎型肾病综合征组(NTNS组)17例;并根据对激素治疗效应差异分为激素敏感型肾病综合征(steroid-sensitive nephritic syndrome,SSNS)组19例,激素耐药型肾病综合征(steroid-resistent nephritic syndrome,SRNS)组15例,激素依赖型肾病综合征组(steroid-dependent nephritic syndrome,SDNS)组14例,选择本院体检健康人员30例作为对照组,78例入选对象均测定PAF-AH活性,比较各组之间差异。结果:STNS组PAF-AH活性为(51.9±8.3)umo L·min-1·L-1,均高于NTNS组及健康对照组,均P<0.05;且NTNS组PAF-AH活性高于健康对照组,均P<0.05。SSNS组PAF-AH活性均高于SRNS组、SDNS组、对照组,均P<0.05,且SRNS组、SDNS组PAF-AH活性均高于对照组,均P<0.05。经perason分析,PAF-AH活性与原发性肾病综合征之间有明显相关分析,其中,rSTNS=0.618;rNTNS=0.524;rSSNS=0.717;rSRNS=0.567.;rSDNS=0.327,P<0.05。结论:原发性肾病综合征患者血小板活化因子水解酶活性显著高于正常人群,且不同类型PNS患者PAF-AH活性不同.

脑出血与血浆血小板激活因子乙酰水解酶基因G994T突变的相关研究

目的探讨血浆血小板激活因子乙酰水解酶pPAF-AH基因G994T突变与中国人群脑出血发病的相关关系。方法利用等位基因特异性聚合酶链反应技术分析了150例原发性脑出血病人和150例非脑血管病对照组pPAF-AH基因的基因型位点频率。结果T等位基因在脑出血组的频率是3%,在对照组是4%,GT杂合子在脑出血组和对照组频率分别为6.8%和8.5%,两组差异无显著意义。没有发现突变型的纯合子。结论pPAF-AH基因G994T突变与中国人群的脑出血没有明显的相关关系。

血小板活化因子及其乙酰水解酶在新生儿感染中的变化及临床意义

目的检测感染新生儿血浆血小板活化因子(PAF)水平及其乙酰水解酶(PAF-AH)的活性,探讨两者在新生儿感染中的变化及临床意义。方法以复旦大学附属儿科医院新生儿科病房收治的日龄<30d的新生儿为研究对象。依据感染部位和程度分为全身感染组、局部感染组及非感染组;依据日龄分为早期新生儿(≤7d)和晚期新生儿(>7d)。采集研究对象桡动脉血标本,对全身感染组中合并器官功能衰竭的患儿在感染的第1、3、5和7天增加采集桡动脉血标本。测定血浆PAF水平(μg.L-1)和PAF-AH活性(μmol.L-1.min-1)。分析感染程度、性别、日龄和出生体重对血浆PAF水平和PAF-AH活性的影响,比较不同感染组PAF水平和PAF-AH活性的差异,观察全身感染合并器官功能衰竭患儿血浆PAF水平和PAF-AH活性在病程1～7d的变化趋势。结果研究期间共收治247例新生儿,男146例,女101例;平均日龄9.2(1～57)d;平均胎龄35.85(27～43)周;平均出生体重2517(906～4750)g。全身感染组91例,局部感染组63例,非感染组93例。①新生儿血浆PAF水平与感染程度相关(P=0.000);血浆PAF-AH活性与感染程度及日龄(P均为0.000)相关。②全身感染组血浆PAF水平(9.5±8.1)显著高于局部感染组(5.3±3.2)及非感染组(4.6±3.5)。早期新生儿中,全身感染组血浆PAF-AH活性(5.7±2.7)显著低于局部感染组(7.3±2.9)和非感染组(7.3±2.5)。晚期新生儿中,全身感染组血浆PAF-AH活性(7.0±2.5)显著低于局部感染组(9.7±2.2)和非感染组(9.7±2.7)。③全身感染组合并器官功能衰竭的9/12例存活患儿在病程的1～7d血浆PAF水平呈下降趋势,PAF-AH活性呈上升趋势。3/12例死亡患儿中两者的变化趋势则相反。④全身感染组31/91例确诊败血症患儿中,革兰阴性菌感染者血浆PAF水平(13.1±11.0)显著高于革兰阳性菌感染者(5.4±3.9),PAF-AH活性(4.9±2.1)显著低于革兰阳性菌感染者(7.9±2.4)。结论新生儿严重感染时血浆PAF水平增高,PAF-AH活性降低,两者的变化趋势与预后相关。

血小板活化因子乙酰水解酶基因多态性与黎族支气管哮喘相关作用的研究

目的探讨血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)基因多态性与黎族支气管哮喘之间的关系。方法采用等位基因特异性聚合酶链式反应技术等方法,检测108例黎族支气管哮喘患者及115例健康黎族人PAF-AH基因第9外显子Val279Phe基因多态性和酶活性。结果(1)哮喘组与对照组研究对象血浆PAF-AH突变基因型频率、突变等位基因频率间差别均无显著性意义(P>0.05);(2)哮喘缓解组与对照组研究对象血浆PAF-AH活性间差别无显著性意义(P>0.05),二者均高于哮喘发作组(P<0.001);(3)不论是在对照组,还是在哮喘缓解组,Val/Val基因型和Val/Phe基因型血浆PAF-AH活性间差别均有显著性意义(P<0.01),而两组研究对象在同一基因型中血浆PAF-AH活性间差别均无显著性意义(P>0.05)。结论海南黎族哮喘与PAF-AH基因型无关,但其哮喘所处状态与PAF-AH活性有关。

血小板活化因子乙酰水解酶基因Ile198Thr突变与银屑病的相关研究

目的:探讨血小板活化因子乙酰水解酶基因(Ile198Thr)突变与银屑病的关系。方法:对50例银屑病患者及50例健康对照者,分别用聚合酶链反应技术(PCR)及测序分析基因组DNA的突变等位基因。结果:银屑病组突变率与对照组无显著差异(P>0.05)。结论:血小板活化因子乙酰水解酶基因(Ile198Thr)突变与银屑病无相关性,其突变可能与银屑病的发病无关。

血小板活化因子乙酰水解酶基因多态性与脑动脉粥样硬化性狭窄的关联性研究

目的研究血小板活化因子乙酰水解酶(platelet-activating factor acetylhydrolase,PAF-AH)基因Arg92His(4,275;G→A)、Ile198Thr(7,593;T→C)、Val279Phe(9,994;G→T)突变与脑动脉粥样硬化性狭窄(cerebral artery atherosclerotic stenosis,CAAS)及狭窄颅内外分布的关系。方法 642例行全脑血管数字减影造影(cerebral digital subtraction angiography,DSA)检查的患者,根据狭窄程度,分为脑动脉狭窄(CAAS)组477例和对照组156例,CAAS组进一步分为3个亚组,单纯颅内动脉狭窄(intracranial atherosclerotic stenosis,ICAS)组,单纯颅外动脉狭窄(extracranial artery atherosclerotic stenosis,ECAS)组,颅内外动脉联合狭窄(intracranial-extracranial artery atherosclerotic stenosis,IECAS)组。比较Arg92His、Ile198Thr、Val279Phe突变基因型及等位基因频率在各组的分布。结果 Arg92His突变基因型及等位基因频率,在ICAS组显著高于对照组(42.6%vs.30.3%;23.3%vs.16.4%)(P<0.05),而ECAS组、IECAS组突变基因型频率(28.7%,26.1%)及突变等位基因频率(17.0%,15.3%)与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Ile198Thr、Val279Phe突变基因型及等位基因频率在ICAS组、ECAS组、IECAS组与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。CAAS组与对照组比较,Arg92His、Ile198Thr、Val279Phe突变基因型及等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Arg92His位点突变可能参与了颅内动脉粥样硬化性狭窄的发生。

原发性痛经患者瘀血舌象与血小板活化因子及血小板活化因子乙酰水解酶关系

目的探讨原发性痛经患者瘀血舌象形成的病理机制。方法 随机选择原发性痛经患者41例和健康人20名,采用ELISA法检测血小板活化因子(PAF)和血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)水平。结果 原发性痛经瘀血舌组(22例)PAF值水平(ng/L)(252.214±37.568)高于非瘀血舌组(212.348±22.794,19例)及健康对照组(182.126±18.306),而PAF-AH值相反[依次分别为(μg/L)3.090±1.483,5.382±1.873,5.607±2.073,P<0.05];非瘀血舌组仅PAF高于健康对照组(P<0.05)。瘀血舌3个中医证型间PAF和PAF-AH比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 原发性痛经瘀血舌象患者外周血中PAF活性明显增高,PAF-AH活性明显降低,PAF-AH与PAF的失衡与原发性痛经瘀血舌象患者发病机制有关。

蛋白水解诱导因子在食管鳞状细胞癌中的表达

目的:研究蛋白水解诱导因子(proteolysis-inducing factor,PIF)在食管鳞状细胞癌中的表达及意义。方法:应用免疫组化方法,检测PIF在107例食管鳞状细胞癌病人癌组织以及其中35例癌旁正常组织以及8例食管良性疾病标本中的表达情况,并探讨PIF表达与食管癌临床分期、肿瘤分化程度的关系。结果:食管鳞状细胞癌组织中存在PIF表达,其表达与食管良性疾病对照组中的表达差异有统计学意义(P<0.05),肿瘤组织中表达PIF的个体其癌旁正常组织中亦有PIF表达,PIF表达在肿瘤分化、是否侵及浆膜层、有无淋巴结转移和肿瘤分期中的差异无统计学显著性(P(0.05)。结论:食管鳞状细胞癌组织中存在PIF表达,其表达与肿瘤分化、是否侵及浆膜层、有无淋巴结转移和肿瘤分期无关。

细胞型血小板活化因子乙酰水解酶Ⅱ活力与急性脑梗死的关系

目的研究细胞型血小板活化因子乙酰水解酶Ⅱ（PAF-AHⅡ）活力与急性脑梗死的关系。方法采用PAF-AHⅡ活力检测试剂盒检测120例不同病程、梗死面积及病情的急性脑梗死患者的PAF-AHⅡ活力,并与健康对照组比较。结果脑梗死组病程1d、2-3d、4-7dPAF-AHⅡ活力明显高于健康对照组（均P〈0.01）,病程8-14d与健康对照组差异无统计学意义（均P〉0.05）;病程1d、2-3d、4-7d大面积脑梗死组的PAF-AHⅡ活力比中、小面积脑梗死组明显增高（均P〈0.05）,病程8~14d两组间差异无统计学意义（均P〉0.05）;病程≤7d脑梗死患者的PAF-AHⅡ活力与病情严重程度呈正相关（r=0.31,P〈0.05）,病程8-14d脑梗死患者的PAF-AHⅡ活力与病情严重程度无相关性（P〉0.05）。结论PAF-AHⅡ活力与急性脑梗死的发生、发展有密切关系,并对判断脑梗死的严重程度有一定意义。

重组人血小板活化因子乙酰水解酶保护小鼠脑缺血再灌注的研究

目的观察重组人血小板活化因子乙酰水解酶(rPAF-AH)对小鼠脑缺血再灌注的保护作用。方法采用线栓法建立小鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,尾静脉注射rPAF-AH预处理后观测模型小鼠神经行为学和脑梗死灶大小的改变,采用Westernblot研究MMP-2的表达及活性,同时与奥扎格雷钠注射液、金纳多注射液及假手术对照组比较。结果 rPAF-AH预处理明显降低脑梗死小鼠行为障碍的神经行为学评分和脑梗死灶的大小(P<0.01)。Westernblot分析结果证明,rPAF-AH预处理可降低脑缺血再灌注损伤所诱导的MMP-2蛋白的表达及其活性水平(P<0.01)。结论 rPAF-AH预处理对小鼠脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用,这可能得益于其抑制了MMP-2蛋白的高表达及活性增高。

血小板活化因子乙酰水解酶与过敏性紫癜肾脏损害的相关性研究

目的:研究过敏性紫癜(HSP)患者血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)与肾脏损害的关系。方法:临床纳入81例我院2016年10月～2017年10月期间收治的HSP患者作为研究对象。按有无肾脏损伤分为紫癜性肾炎(HSPN)组(n=36)与非HSPN组(n=45)。另选取40例同期来我院体检的健康志愿者作为对照组。结果:HSPN组PAF-AH mRNA、PAF-AH蛋白、VEGF以及HSP70水平明显高于非HSPN和对照组,P <0. 05;非HSPN组PAF-AH蛋白、VEGF以及HSP70水平明显高于对照组,P <0. 05;但非HSPN组PAF-AH mRNA与对照组无差异,P> 0. 05。HSPN患者PAF-AH水平随着VEGF、HSP70水平的升高而升高,均呈正相关,P <0. 05。结论:PAF-AH参与了HSP患者肾脏损伤的过程,且随着肾脏损伤程度的加重,PAF-AH表达水平升高。

血小板活化因子乙酰水解酶与相关疾病的研究

血小板活化因子(PAF)是具有多种生物学活性的磷脂,能够活化血小板和其他炎症细胞,在变态反应及呼吸、消化等系统的炎症反应中扮演重要的角色。血小板活化因子乙酰水解酶(PAF—AH)能够水解PAF和相关的氧化磷脂并使之失活,从而发挥有效的调节作用。本文对PAF-AH的结构特性、对相关疾病的影响以及基因多态性和重组PAF-AH的应用研究进行综述。

人细胞内Ⅰ型血小板激活因子乙酰水解酶重组蛋白的构建、纯化及酶活性研究

目的构建人细胞内Ⅰ型血小板激活因子乙酰水解酶(PAF-AH)重组蛋白并加以纯化,利用不同底物研究酶活性。方法细胞内Ⅰ型PAF-AHβ亚基基因进行PCR扩增,目的基因经纯化、连接载体转化大肠杆菌DH5α感受态细胞构建重组蛋白,提取质粒行琼脂糖凝胶电泳、NdeⅠ和HindⅢ双酶切及测序鉴定。鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞诱导蛋白表达和纯化,15%SDS-PAGE和Western blotting鉴定。分别以乙酸苯酯、l-O-hexadecyl-2-deoxy-2-thioacetyl-sn-glycero-3-phosphocholine(2-Thio PAF)和1-myristoyl-2-(4-nitrophenylsuccinyl)phosphatidylcholine为底物(后两者为血浆型PAF-AH的商业化底物),应用分光光度法检测纯化后重组蛋白的酶活性,以血浆型PAF-AH作为阳性对照。结果人细胞内PAF-AHⅠ型β亚基重组蛋白构建正确,纯化后在大肠杆菌感受态细胞中诱导表达。与阳性对照血浆型PAF-AH比较,纯化后的重组蛋白同样能够水解乙酸苯酯,具有芳香酯酶活性;能快速水解2-Thio PAF,但不能水解1-myristoyl-2-(4-nitrophenylsuccinyl)phosphatidyl-choline。结论成功构建人细胞内Ⅰ型PAF-AH重组蛋白,其对血浆型PAF-AH的两个商业化底物具有完全不同的水解能力,以此可快速区分细胞内和血浆型PAF-AH。

血小板活化因子乙酰水解酶基因多态性V279F与缺血性卒中易感性及复发的相关性研究

目的评价血小板活化因子（platelet-activating factor,PAF）乙酰水解酶（acetylhydrolase,AH）基因多态性位点V279F与缺血性卒中易感性及复发的关系。方法本研究连续选取2008年11月-2014年11月山东省潍坊市人民医院神经内科住院的386首发急性TOAST分型[5]中大动脉粥样硬化（large-artery atherosclerosis,LAA）性卒中和小动脉闭塞（smallartery occlusion,SAO）性卒中患者共386例为试验组和386例健康体检者,作为对照组,采用酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定血清PAF-AH浓度,聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）及基因直接测序法测定V279F基因位点多态性,对缺血性卒中患者平均随访4.5年,通过多元生存分析,探讨基因多态性与缺血性卒中复发的相关性。结果缺血性卒中患者血清PAF-AH浓度[（4.78±1.28）μg/L]高于对照组[（4.11±1.34）μg/L],V279F位点中FF＋VF基因型频率（44.6%）,VF基因型频率（28.8%）和F等位基因频率（16.5%）在缺血性卒中组及LAA性卒中组均高于对照组（30.4%,22.3%,12.2%）,差异有显著性（P=0.023,P=0.031,P=0.022）。卒中亚组分析显示V279F多态性与LAA性卒中相关性更强。随访结果提示,25.8%患者缺血性卒中复发,将高血压、糖尿病、高血脂、吸烟史、既往短暂性脑缺血发作病史及基因型分布进行多元回归分析显示,VF＋FF基因型与缺血性卒中及LAA性卒中复发相关[风险比（hazard ratio,HR）1.75,95%可信区间（confidence interval,CI）1.03~2.29,P=0.041;HR 1.84,95%CI 1.13~2.41,P=0.037）]。结论缺血性卒中患者Lp-pla2水平升高,LAA性卒中升高最明显;V279F基因多态性可能与LAA性卒中的易感性相关,与缺血性卒中及LAA性卒中复发相关。

血小板活化因子乙酰水解酶基因多态性与支气管哮喘的相关性

目的研究血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)基因多态性与支气管哮喘儿童发病的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术,对53例哮喘及35例正常对照组儿童PAF-AH第11外显子Ala379Val位点基因多态性进行分析。结果哮喘组患儿基因组型频率和等位基因频率与对照组比较均无显著性差异(P均>0.05)。结论PAF-AH第11外显子Ala379Val基因突变与儿童支气管哮喘发病无关。

血小板活化因子乙酰水解酶基因Val379Ala位点多态性与脓毒症易感性相关性研究

目的探讨血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）基因Val379Ala位点多态性与脓毒症易感性及预后的关系。方法采用PCR-RFLP技术，分析82例不同程度脓毒症患者及90名健康对照者PAF-AH基因Val379Ala位点的多态性，对含有等位基因多态性的片段进行DNA测序分析。结果全部样本经PCR-RFLP分析后，脓毒症组82例中，仅1例纯合子Val／Val型，24例杂合子Val／Ala型，57例纯合子Ala／Ala型；对照组90例中，2例Val／Val型，29例Val／Ala型，59例Ala／Ala型。Val379Ala基因型和等位基因频率：脓毒症组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05），存活组、死亡组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05），轻型脓毒症组、严重脓毒症组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论PAF-AH基因Val379Ala位点多态性与脓毒症易感性、预后及病情严重程度可能不相关。