水解酪蛋白肽粉抗肾性高血压大鼠心肌重构作用研究

目的:考察酪蛋白肽粉对肾性高血压大鼠收缩压及心肌重构的作用并探讨其机制。方法:将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(依那普利,1 mg·kg^-1),水解酪蛋白肽粉低(12.5 mg·kg^-1)、中(25 mg·kg^-1)、高(50 mg·kg^-1)剂量组,每组10只。用双肾双夹法建立肾性高血压大鼠模型,连续给药4周后,测定大鼠收缩压、心脏结构;Masson染色后观察心脏胶原含量;测定心脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量变化,肥大基因β肌球蛋白重链(β-MHC)、纤维连接蛋白(FN)mRNA表达及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NADPH)亚型NOX-2、NOX-4 mRNA表达。结果:酪蛋白肽粉中、高剂量组与模型组相比能降低肾性高血压大鼠收缩压,改善心肌重构,减轻心肌肥厚和心肌纤维化,降低β-MHC、FN、NOX-2、NOX-4 mRNA的表达,增加SOD活性,降低MDA含量(P<0.05)。结论:酪蛋白肽粉对肾性高血压大鼠具有积极的心肌保护作用,这可能与降低β-MHC、FN、NOX-2、NOX-4 mRNA的表达,减轻氧化应激有关。

水解酪蛋白肽粉复方对高血压大鼠的降血压作用及机制研究

目的探讨水解酪蛋白肽粉(CH)复方的降血压药理作用及30天喂养试验毒性结果。方法选取16只SD大鼠和56只原发性高血压大鼠(SHR)参加功效试验,将SD大鼠分为空白对照组和正常给药组各8只,分别给予蒸馏水、复方样品液;取SHR大鼠按血压及体质量随机分为模型对照组,牛黄降压胶囊组,CH复方低、中、高剂量组(简称复方低、中、高剂量组),CH组和中药组,每组8只,灌胃给药,每天1次,连续30d。选取20只SD大鼠随机分为空白对照组和复方药物组,每组10只,分别给予蒸馏水、复方样品液,每天给药1次,喂养30d。记录大鼠收缩压、舒张压、心率,并对血清中一氧化氮(NO)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素-1(ET-1)等指标进行检测。结果给药30d后,牛黄降压胶囊组、复方低剂量组、复方中剂量组、复方高剂量组、CH组和中药组大鼠收缩压和舒张压均明显低于模型对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);复方中剂量组大鼠的收缩压和舒张压明显低于CH组与中药组,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组大鼠给药前与给药30d后心率比较,差异均无统计学意义。给药30d后,牛黄降压胶囊组、复方低剂量组、复方中剂量组、复方高剂量组、CH组及中药组大鼠血清AngⅡ,NO和ET-1水平与模型对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。复方中剂量组大鼠血清AngⅡ水平明显低于中药组,NO水平明显高于CH组,ET-1水平明显低于CH组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。30天喂养试验结果显示,复方药物组和空白对照组大鼠一般体征无明显差异,在喂养7d,14d,21d及30d时的体质量比较,差异无统计学意义。复方药物组和空白对照组大鼠主要脏器大小及形态未见明显异常,肝、肾、脾和睾丸脏器系数比较,差异无统计学意义。复方药物组大鼠总蛋白(TP)水平明显高于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),其余各项血液生化指标与空白对照组比较,差异均无统计学意义。结论 CH复方具有降血压作用,其作用优于复方各单一组分;30d喂养未发现明显毒性反应。

中药复方联合水解酪蛋白肽对自发性高血压大鼠的降压作用及机制探讨

目的:考察中药复方(何首乌、罗布麻、丹参)联合水解酪蛋白肽对自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用并初步探讨其作用机制。方法:分别采用SD大鼠和自发性高血压大鼠,实验前随机分为正常对照组、高血压模型组、卡托普利组、水解酪蛋白肽组、中药复方组及中药复方+水解酪蛋白肽低、中、高剂量组,每周测定尾动脉收缩压,连续给药4 w,末次给药24 h后,采用ELISA法检测大鼠血浆儿茶酚胺、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALS)水平和血清肾胺酶、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)含量,检测大鼠血脂水平。结果:水解酪蛋白肽配伍中药复方何首乌、罗布麻、丹参可显著降低SHR尾动脉收缩压并能显著降低大鼠血浆儿茶酚胺、AngⅡ、ALS及血清ET-1、TC、TG、LDL-C水平,升高血清肾胺酶、NO水平(P<0.05或P<0.01)。结论:水解酪蛋白肽配伍中药复方何首乌、罗布麻、丹参有良好的降压效果,配伍用药明显优于单独用药,主要通过调节血脂、交感神经-肾上腺素系统、肾素-血管紧张素系统、血管内皮紧张因子-收缩因子系统等机制来降低血压。

水解酪蛋白肽通过调节肠道菌群改善睡眠质量的随机双盲安慰剂对照临床试验

目的 本研究以安慰剂(片剂载体)作为对照,评价低(500 mg/d)、高剂量(1 000 mg/d)水解酪蛋白肽(HCP-2hvy)改善失眠患者睡眠质量的效果并从肠道菌群的角度分析其作用机制。方法 采用随机双盲安慰剂对照临床试验方法,纳入82名患者,分为低、高剂量组和安慰剂组。患者每日服用HCP-2hvy或安慰剂1次,疗程为14 d。收集患者治疗前后睡眠日记与睡眠监测仪数据,同时于治疗前后采集患者血液与粪便样本进行检测。结果 与安慰剂组比较,低、高剂量HCP-2hvy均能显著延长患者客观睡眠总时间(低剂量组t=2.870,P=0.005;高剂量组t=2.590,P=0.010)。高剂量HCP-2hvy能显著增加患者肠道菌群Shannon指数(t=2.716,P=0.008),同时低、高剂量HCP-2hvy均能显著增加患者肠道菌群Simpson指数(低剂量组t=2.066,P=0.041;高剂量组t=3.221,P=0.002),且低、高剂量组患者肠道菌群的CPCoA均与安慰剂组显著分离(P=0.048)。低、高剂量HCP-2hvy能分别提高肠道Faecalibacterium_prausnitzii(t=2.146, P=0.036)、Romboutsia_timonensis(t=2.263,P=0.027)的相对丰度。结论 HCP-2hvy可能通过调节肠道菌群改善失眠人群的睡眠质量。因此HCP-2hvy可以作为一种改善失眠的膳食补充剂加以推广应用。

胶束酪蛋白复酶水解肽与钙形成螯合物的制备、表征及螯合机制

本研究利用胶束酪蛋白为原料制备酪蛋白水解肽(casein hydrolytic peptide,CHP),并与氯化钙进行螯合(肽钙质量比2∶1),制备得到酪蛋白肽钙螯合物CHP-Ca。以水解度(hydrolysis degree,DH)和钙螯合量为指标,对5种酶(风味蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶)进行筛选,筛选出风味蛋白酶和胰蛋白酶作为复酶,采用响应面法用进一步优化复酶酶解条件,结果表明最佳酶解条件为酶底比6000 U/g、复酶比1∶1、酶解时间90 min、pH 6.9、温度42℃,在此条件下肽钙螯合量为(90.46±0.72)μg/mg。最后通过X射线衍射、热重分析、Zeta电位和粒径分析以及红外光谱对CHP-Ca的结构特性及螯合机制进行研究。结果表明CHP-Ca主要通过羧基、氨基和磷酸基团相互作用的方式结合,螯合后Zeta电位和粒径减小,CHP-Ca结构变得更加紧密。

水解酪蛋白肽粉联合中药复方的降血压作用研究

目的考察水解酪蛋白肽粉(CH)联合配伍中药复方(杜仲、天麻、罗布麻叶)的降血压作用及肾脏保护作用。方法以原发性高血压大鼠(SHR)为模型动物,考察CH联合中药复方对动物收缩压(SP)、舒张压、心率、血清一氧化氮(NO)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素-1(ET-1)、降钙素基因相关肽(CGRP)指标的影响。以两肾一夹制备肾性高血压模型,考察CH联合中药复方对动物SP、醛固酮(ALD)、血管紧张素转化酶(ACE)、CGRP、AngⅡ、尿微量白蛋白(m ALB)、尿β2-微球蛋白(β2-MG)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)指标的影响。结果在SHR模型大鼠中,两者单用组和联合用药低、中、高剂量组有显著降血压作用,联合用药组作用强于单用组,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05),药物可改善血清NO、AngⅡ、ET-1、CGRP指标。肾性高血压模型在给药10 d后,单独用药组与联合用药组均可不同程度降低模型收缩压,其中联合用药组优于单独用药组,差异有统计学意义(P<0.05),联合用药组以中、高剂量组较优并以给药30 d后降低血压效果最为明显,药物均可改善血清ALD、ACE、CGRP、AngⅡ、尿m ALB、尿β2-MG、Scr、BUN指标。结论水解酪蛋白肽粉联合中药复方不仅可增加降血压作用,增强改善血清、尿液生化指标,并具有不同程度的肾脏保护作用。

酪啡肽及其酪蛋白水解肽对早期断奶仔猪分泌型免疫球蛋白A和细胞因子水平的影响

本文旨在研究酪啡肽及其酪蛋白水解肽对早期断奶仔猪分泌型免疫球蛋白A(SIgA)和细胞因子水平的影响。24头仔公猪随机分为对照组(正常哺乳28d断奶)、试验Ⅰ组(添加β-酪啡肽-7)和试验Ⅱ组(添加酪蛋白酶解物)。试验组于21d断奶,再连续添加酪蛋白胃蛋白酶解液或β-酪啡肽-710d,每天2次(共20mL),至32d,3组动物各随机取6头同时剖杀,取血、胃食糜和空肠食糜。观察其血清IL-2、TNF-α和胃肠内容物中SIgA的含量变化。结果表明:添加酪蛋白水解液组仔猪血清中IL-2的水平比对照组高75.9%,差异极显著(P<0.01);试验Ⅰ组血清中IL-2水平比对照组高35.7%,差异显著(P<0.05)。血清中TNF-α水平试验组略低于对照组。在对照组、试验Ⅰ和Ⅱ组仔猪的空肠食糜中均检测到SIgA,平均含量分别为(6.48±0.85)ng/g、(6.30±0.85)ng/g和(8.71±0.54)ng/g。与对照组相比,试验Ⅱ组差异极显著(P<0.05);胃食糜中未检测到SIgA。提示乳源活性肽对早期断奶仔猪细胞免疫和黏膜免疫活性具有一定的促进作用。

添加酪蛋白水解肽乳粉的抗疲劳作用研究

目的:通过动物实验评价添加酪蛋白水解肽乳粉的抗疲劳功能。方法:对健康雄性BALB/c小鼠连续28d灌胃受试物,然后通过小鼠负重游泳实验以及血尿素氮、血乳酸、肝糖原等疲劳指标的测定,评价酪蛋白水解肽及其配方乳粉的抗疲劳作用。结论:酪蛋白水解肽和添加酪蛋白水解肽的乳粉使小鼠游泳时间延长,使血乳酸、尿素氮含量降低,提高肝糖原含量,显示出一定的抗疲劳作用,延缓疲劳的产生。

酪啡肽及酪蛋白水解肽对糖尿病大鼠血糖的影响

选用SD雄性大鼠50只,随机取42只作为糖尿病模型组,另8只为空白对照组。糖尿病模型组大鼠按60 mg·kg-1一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ),空白组大鼠腹腔注射等体积生理盐水。分别于注射STZ后24 h和72 h剪尾取血,血糖仪测定所有大鼠的空腹(禁食8 h)血糖水平。取造模成功大鼠(血糖值≥11.1 mmol·L-1)32只,随机分为阳性对照组(蒸馏水灌胃)、β-酪啡肽7组(β-酪啡肽7灌胃)、水解肽组(酪蛋白水解肽灌胃)和酪蛋白组(酪蛋白溶液灌胃),每12 h灌胃1次。每3 d空腹测血糖1次。连续灌胃15 d后断颈处死,取血浆、肝脏、心脏和腿肌等样品,观察血糖浓度以及其他影响血糖的重要指标的变化。结果显示:与阳性对照组相比,β-酪啡肽7和酪蛋白水解肽均能降低糖尿病大鼠的血糖浓度,提高血浆胰岛素含量,显著降低血浆胰高血糖素含量(P<0.05),显著增加了糖原的合成(P<0.05);而酪蛋白组大鼠血糖浓度、激素水平、糖原含量与阳性对照组无显著差异。提示:β-酪啡肽7和酪蛋白水解肽具有一定的降糖作用,其降低血糖的途径可能是通过提高胰岛素的分泌和促进肝、肌糖原的合成进行的;酪蛋白本身没有降糖作用。

添加酪蛋白水解肽改善酸乳的加工特性

向牛乳中添加不同含量菠萝蛋白酶酪蛋白水解肽(0.1%、0.3%、0.5%),测定酸乳发酵及冷藏过程中理化、微生物和风味指标变化。结果表明,添加酪蛋白水解肽(casein hydrolytic peptides,CHP)加快了酸乳发酵后期pH值下降,缩短发酵时间;CHP添加量为0.1%时发酵时间较对照组缩短了34 min。微流变测定表明,添加CHP降低了发酵后期酸乳的弹性指数(elasticity index,EI)和流动性指数(fluidity index,FI),但宏观黏度指数(macroscopic viscosity index,MVI)有所升高。扫描电镜图像显示,各组酸乳样品均呈多孔网状结构,适量添加CHP(0.1%)可以改善酸乳的胶体结构,使酸乳网络结构更致密均匀。酸乳冷藏期间,添加CHP可以提高发酵剂菌株的活菌数,一定程度地促进酸类、醛类和酮类等风味化合物的形成,添加0.3%的CHP降低了酸乳EI;随着CHP添加量的增加(0.3%、0.5%),酸乳的硬度及胶着性逐渐下降,但对持水力、内聚性及黏性无明显影响。本研究为CHP在酸乳加工中的应用及产品品质和功能性提升提供技术参考。

牛奶酪蛋白水解肽血脑屏障透过性的研究

目的研究牛奶酪蛋白水解肽的血脑屏障透过性。方法利用一种大鼠静脉给药后抽取脑脊液的动物模型,静脉注射牛奶酪蛋白水解肽后,在不同的时间点分别取血清样品和大鼠脑脊液样品,样品经过预处理后,用高效液相色谱(HPLC)进行分析。结果结果显示该多肽混合物在体循环中极易被代谢,在静脉给药6 min之后就无法在血清中检测到任何可见的样品峰。而在6 min之前不同时间点的血清检测结果中,样品峰强度随着时间的递增逐渐降低。同时在脑脊液样品的检测中,结果显示在3 min和4 min这两个时间点的脑脊液样品中出现了一个保留时间相同的新峰。其保留时间与其中一个多肽样品峰非常的接近。结论牛奶酪蛋白水解肽中的某种成分通过血脑屏障进入脑内,也可能是脑脊液中的某些分子的浓度发生了变化。该结果同时提示我们食源性的天然多肽分子有可能能够直接通过血脑屏障进入中枢伸进系统CNS,从而发挥相应的神经生物学功能。

仔猪胃肠道食糜和血液中酪啡肽的检测及阿片样活性分析

将24头仔公猪分为对照组(正常哺乳28 d断奶)、试验I组(添喂β-酪啡肽-7)和试验Ⅱ组(添喂酪蛋白酶解物)。试验组于21 d断奶,再连续添喂酪蛋白胃蛋白酶解液或β-酪啡肽-7 10 d,每天2次(共20mL),至32 d,3组动物各随机取6头同时剖杀,取血、胃食糜和空肠食糜。通过所建立的RP-HPLC方法,在胃食糜和空肠食糜中检测到β-酪啡肽-5、β-酪啡肽-7样物质。对照组、酪啡肽-7组和酪蛋白水解液组,β-酪啡肽-7的平均含量分别为21.12±2.38,23.58±7.49、21.81±9.93μg/g胃食糜和16.99±3.48、19.08±2.85、21.36±4.85μg/g肠食糜;胃食糜中-βCM-7的含量高于空肠食糜,试验组均高于对照组。在各组仔猪的血液中未检测到酪啡肽样物质。肠食糜的细胞生物学试验结果表明:与喂仔猪料的对照组比较,试验I组和试验Ⅱ组对细胞腺苷酸环化酶的活性均具有不同程度的抑制作用,抑制率分别为27.9%和89.0%,抑制作用均能被纳洛酮反转,逆转率分别是43.2%和89.07%。提示在21日龄断奶仔猪饲料中添加酪啡肽或酪蛋白酶解物,其肠道中有酪啡肽释放,阿片总活性升高。

A Novel Exponential Kinetic Model for Casein Tryptic Hydrolysis to Prepare Active Peptides

The kinetics of casein tryptic hydrolysis to prepare activepeptides was investigated. Taking into account the reaction mechanismincluding single substrate hydrolysis, irreversible enzymeinactivation, and substrate inhibition, a set of exponentialequations was established to characterize the enzymatic hydrolysiscurves. The verification was carried out by a series of experimentalresults and indicated that the average regressive error was less than5/100. According to the proposed kinetic model, the kinetic constantsand thermodynamic constants of the reaction system were alsocalculated.