一种鉴定多糖水解酶类及其产生菌的新方法

利用曲里苯蓝能与多糖形成复合物的原理，建立起一种简便、快捷、灵敏的筛选多糖水解酶类及其产生菌的平板鉴定方法。曲里苯蓝对供试微生物无毒害作用，不影响酶的活性，并可高温灭菌。其最适浓度在0．005％～0．01％（W／V）之间。可用于纤维素水解酶类、淀粉水解酶类、甘露聚糖酶、普鲁兰酶等多糖水解酶，与传统方法相比，该方法不仅有着同样高的灵敏度，而且能够提高筛选效率，避免污染问题，同时适合于多种多糖底物。但不能用于木聚糖酶和菊粉酶的检测。

绿色木霉产生的糖苷水解酶类

利用微生物的纤维素酶水解纤维素为可溶性糖类的研究是具有广泛应用前景的工作,但由于在植物残体中纤维素总是与半纤维素、木素以及甘露聚糖、果胶等聚合物形成复杂的高聚物,因而任一单独的酶类都不能对其进行有效的酶解。通常都需用物理、化学方法脱除半纤维素、木素之后,纤维素始可被有效酶解。但是,这类预处理方法又有成本高,能耗大,副产物不易被利用等缺点,因此,利用多种糖苷酶类对植物材料进行全组分水解,以实现生物量的全利用,被认为是解决上述难题的合理途径。

利用环状糊精纯化淀粉水解酶类

环状糊精是由环状糊精葡萄糖基转移酶作用于淀粉所产生的一组非还原性环状低聚糖 ,最常见的有α,β和γ型 ,它们分别是由 6、7或 8个葡萄糖单元以α 1,4糖苷键联结而成的。由于其特殊的“内疏水外亲水”分子结构 ,使得环状糊精能与多种有机分子形成特殊结构的包合物 ;同时环状糊精还能与酶的活性 /非活性部位相互作用 ,所以以环状糊精为配体 。

地衣芽孢杆菌CP-16脂类水解酶的研究

本试验旨在通过异源表达获得地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CP-16的脂类水解酶,并探究其在羽毛降解过程中的作用。试验以地衣芽孢杆菌CP-16基因组DNA为模板,扩增脂类水解酶基因,转化入大肠杆菌中表达,获得重组酶L-4。研究重组酶L-4的适宜p H、p H稳定性、适宜温度、温度稳定性以及有机溶剂和金属离子对其相对活性的影响,同时探究其对角蛋白酶K水解天然羽毛角蛋白的作用。结果显示,获得的脂类水解酶基因大小为747 bp,编码248个氨基酸,在大肠杆菌中成功表达出重组酶L-4,其分子质量约为28.3 ku,酯酶活性为0.42 U/m L,适宜p H为6.5,适宜温度为50℃;在p H 6.5~9.5条件下处理30 min相对活性保持80%以上,在低于50℃温度条件下处理30 min相对活性保持70%以上。二价铁离子(Fe^(2+))、钠离子(Na^+)、锰离子(Mn^(2+))、钙离子(Ca^(2+))对重组酶L-4相对活性具有激发作用,钡离子(Ba^(2+))、锌离子(Zn^(2+))、铜离子(Cu^(2+))、镍离子(Ni^(2+))对重组酶L-4相对活性具有抑制作用。当有机溶剂浓度为30%时,重组酶L-4在二甲基亚砜(DMSO)和甲醇中保存97%和85%的相对活性,在丙酮、乙醇中保存45%以上的相对活性,在异丙醇中保存不到20%的相对活性,而在乙腈中相对活性基本完全丧失。用重组酶L-4预处理天然羽毛底物,可提高角蛋白酶K对底物的水解效率,促进率为4.32%。由此可见,脂类水解酶可降解羽毛表层脂质,可在促进角蛋白酶水解羽毛角蛋白中发挥作用。

γ-干扰素和黄芪浸膏对高氧肺损伤大鼠转化生长因子-β_1、基质金属蛋白水解酶-2、9 mRNA表达的影响

目的探讨γ-干扰素(IFN-γ)和黄芪浸膏对高氧肺损伤大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白水解酶-2(MMP-2)和MMP-9 mRNA表达的影响。方法取空气对照组和高氧暴露7d的幼年Wistar大鼠肺组织,随机分为空气对照组、高氧损伤组、高氧损伤加IFN-γ干预组和高氧损伤加黄芪浸膏干预组。培养48h后收集沉淀肺组织,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定TGF-β1、MMP-2和MMP-9 mRNA水平。结果IFN-γ干预使TGF-β1 mRNA表达明显下降(P<0.05),且呈剂量依赖性;而对MMP-2、MMP-9 mRNA的影响仅在50000IU/mL时有显著性差异(P<0.05)。黄芪浸膏对MMP-2和MMP-9的mRNA表达均有明显的抑制作用(Pa<0.05),且呈剂量依赖性,而对TGF-β1的抑制效应则相对较弱。结论IFN-γ和黄芪浸膏对高氧所诱导的TGF-β1和MMPs增高均有抑制作用。

两肾一夹大鼠高血压模型肾组织可溶性表氧化物水解酶表达及作用

目的:初步探讨可溶性表氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)在肾血管性高血压肾组织中的表达及其作用。方法:采用两肾一夹高血压大鼠模型,雄性SD大鼠分为两组,假手术(sham)组(n=8)和两肾一夹(two kidney one clip,2K1C)组(n=8),术前及术后每10天测定大鼠血压并收集24 h尿液,观察40 d,用自动生化分析仪测定血钠、肌酐及尿蛋白,用放射免疫法测定血浆和肾组织内肾素活性和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)含量,免疫组织化学染色和Western blotting的方法检测肾组织的sEH、过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxi-some proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)表达情况,六铵银染色观察肾形态学变化。结果:2K1C组大鼠术后10d血压(124.04±6.79)mmHg(1 mmHg=0.133kPa),比sham组(106.70±7.71)mmHg显著升高,P<0.001;术后30 d尿蛋白排泄量(292.33±20.53)mg/d,显著高于同期sham组(206.81±37.61)mg/d,P=0.005,这种差异并一直持续到观察结束;术后40 d,2K1C组与sham组比较的具体值为:肾素活性在血浆为(132.90±31.22)vs.(50.00±13.66)ng/(L.h),P=0.03,在钳夹(左)肾组织为(324.90±56.66)vs.(128.40±36.88)ng/(g.h),P=0.01,右肾为(345.10±42.68)vs.(103.00±19.87)ng/(g.h),P<0.001;AngⅡ浓度在血浆为(10 470.00±1 760.00)vs.(4 810.00±1 164.00)ng/L,P=0.02,在钳夹(左)肾组织为(2 094.00±372.20)vs.(735.90±154.40)ng/g,P=0.005,右肾(1 774.00±206.60)vs.(648.10±217.90)ng/g,P=0.002;Western blotting示肾皮质sEH表达量(sEH/β-actin)左肾为(1.73±0.12)vs.(0.33±0.08),P<0.001,右肾为(0.70±0.05)vs.(0.43±0.09),P=0.04;肾皮质内PPARγ的表达量(PPARγ/β-actin)左肾为(0.89±0.11)vs.(0.17±0.05),P=0.002,右肾为(0.56±0.07)vs.(0.27±0.07),P=0.04。免疫组织化学染色定量分析2K1C皮质光密度高于sham组,sham组和2K1C组髓质的平均光密度都分别高于皮质。肾病理显示钳夹肾出现局灶肾小球硬化和肾小管萎缩,对侧肾出现代偿性肾小球肥大和肾小管扩张。结论:sEH可能在肾血管性高血压的发生发展中发挥重要作用,其作用机制可能与肾素-血管紧张素-醛固酮系统以及PPARγ有关。

白三烯A4水解酶基因多态性与结核性脑膜炎易感性的研究

目的探讨中国汉族人群中白三烯A4水解酶(LTA4H)基因多态性与结核性脑膜炎的相关性。方法应用SNaPshot技术检测48例结核性脑膜炎患者和70名健康对照者LTA4H基因中rs1978331,rs2247570,rs2660898,rs2660845多态位点的等位基因、基因型和单体型分布频率,采用SHEsis软件进行相关统计学分析。结果对照组与患者组rs1978331多态性位点C等位基因例数分别为83和40、频率分别为59.3%和41.7%,T等位基因例数分别为57和56、频率分别为40.7%和58.3%,差异有统计学意义(χ2=7.080,P=0.008);rs1978331位点CC、CT和TT基因型在对照组例和患者组中的例数分别为12、33、25和20、16、12,分布频率分别为17.1%、47.1%、35.7%和41.7%、33.3%、25.0%,差异有统计学意义(χ2=8.670,P=0.013);rs2660898位点AA、AC和CC基因型在对照组和患者组中的数分别为28、32、10和20、12、16,分布频率分别为40.0%、45.7%、14.3%和41.7%、25.0%、33.3%,差异有统计学意义(χ2=7.980,P=0.019);对照组与患者组单体型CACT频率分别为26.3%和45.8%,差异有统计学意义(χ2=7.349,P=0.007)。结论 LTA4H基因中rs1978331基因多态性位点等位基因、rs1978331和rs2660898基因多态性位点基因型、单倍体型CACT与中国汉族人群结核性脑膜炎的易感性存在相关性。

血小板活化因子及其乙酰水解酶与中枢神经系统疾病研究进展

血小板活化因子（PAF）是具有多种生物学活性的磷脂，是迄今发现的最有效的血小板激活剂。通过免疫促炎、促血栓形成、兴奋性氨基酸释放、自由基产生、离子超载、即早基因表达等途径，在神经系统疾病中扮演重要的角色。

清香型大曲淀粉水解酶系解析

对清香型大曲中可能存在的淀粉代谢相关酶类及各自催化作用进行全面分析,并从Brenda数据库中搜索酿酒相关的淀粉水解酶,了解不同来源淀粉水解酶类的酶学特征,并从基因组角度分析酿酒微生物合成的淀粉代谢酶类,对酿酒微生物有更深入的认识,为选育理想的酿酒微生物提供理论依据。

黄曲霉毒素高危区肝细胞癌患者微粒体环氧化物水解酶基因检测

目的 :探讨微粒体环氧化物水解酶 (microsomalepoxidehydrolase ,mEH)低活性基因型与肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)的相关性。方法 :应用PCR RFLP和PCR方法检测 5 2例HCC患者和5 6例健康成人中微粒体环氧化物水解酶及谷胱甘肽硫转移酶M1和T1基因型频率的分布。结果 :发现mEH第 3外显子 113纯合组氨酸型和第 4外显子 139纯合组氨酸型都是低活性基因型 ,在HCC组和对照组分别占 5 7 1% (30 /5 2 )、4 8 2 % (2 7/5 6 ) ,82 7% (4 3/5 2 )、73 2 % (4 1/5 6 ) ,两组比较差异无显著意义 ,P >0 0 5。然而 ,mEH低活性型联合谷胱甘肽硫转移酶 (glutathiones transferase ,GST)M1和T1基因缺失型 ,差异有显著意义 ,P <0 0 5。结论 :mEH处于低活性基因型可能是地区性易感HCC的原因之一 ,但单一种解毒酶不起决定作用 ,多种解毒酶联合作用 。

大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因的表达

目的:观察大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因表达的改变。方法:实验于2004-09/2005-06在中南大学湘雅医院神经病学实验室(实验室B级)完成。选择青龄(2月龄)健康雌性SD大鼠10只,老龄(20月龄)健康雌性SD大鼠10只。①反转录反应:反应体系20μL,取5μg(2μL)总RNA,加1g/LOligo(dT)180.5μL,焦碳酸二乙酯处理过的水8.5μL,70℃保持5min,然后冰上骤冷30s,短暂离心3～5s,再加5×反转录buffer4μL,10mmol/LdNTPMix2μL,4U/μLRnasin0.5μL,焦碳酸二乙酯处理过的水1.5μL,轻轻混匀、离心3～5s,37℃保持5min,最后加200U/μLM-Mulv反转录酶1μL,42℃保持1h,70℃保持10min变性,冰上冷却10min,反转录产物(cDNA)于-20℃保存备用。②聚合酶链反应:总反应体系25μL,包括10×聚合酶链反应buffer2.5μL,25mmol/L氯化镁1.5μL,10mmol/LdNTP1μL,2U/μLTaq酶0.5μL,上述反转录产物cDNA2μL,50μmol/L上游目的引物0.5μL,50μmol/L下游目的引物0.5μL,ddH2O16.5μL。各程序均采用95℃5min预变性,94℃,45s、退火温度30s,72℃1min进行32个循环,最后72℃延伸10min。退火温度,去整合蛋白和金属蛋白水解酶10:62.3℃;去整合蛋白和金属蛋白水解酶17:50.2℃;肌动蛋白:46℃。取聚合酶链反应产物5μL于15g/L琼脂糖凝胶电泳,然后在凝胶图像处理系统上扫描,测定各目的基因和肌动蛋白扩增产物的吸光度值,分别计算其比值,即目的基因值=目的基因吸光度值/肌动蛋白吸光度值。结果:纳入动物20只,均进入结果分析。①老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶10的表达水平(1.2170±0.4308)低于青龄大鼠(1.5050±0.4958),但两组比较差异无显著性(t=1.239,P>0.05)。②老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶17的表达水平(1.5720±0.5670)高于青龄大鼠(0.9740±0.3281),但两组比较差异无显著性(t=-1.476,P>0.05)。结论:去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17的基因表达水平可能不是老龄人易发阿尔茨海默病的生物学基础。

黄杆菌对硫磷水解酶及大肠杆菌过氧化氢酶无水解梭曼活性

黄杆菌对硫磷水解酶及大肠杆菌过氧化氢酶无水解梭曼活性邵煌孙曼霁（军事医学科学院毒物药物研究所，北京１００８５０）黄杆菌（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐ．ｓｔｒａｉｎＡＴＣＣ２７５５１）和缺陷假单胞菌（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｄｉｍｉｎｕｔａＭＧ）的对...

环氧化物水解酶Tyr113His多态性与中国北方人群食管鳞状细胞癌易感性的研究

目的 :研究微粒体环氧化物水解酶Tyr113His多态性与中国北方人群食管鳞状细胞癌 (esophagealsquamouscellcarcinoma ,ESCC)易感性的关系。方法 :采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应 (polymerasechainreaction re strictionfragmentlengthpolymorphism ,PCR RFLP)方法分析 2 5 7例食管癌患者和 2 5 2名健康对照组人群mEHTyr113His基因型分布。结果 :Tyr和His等位基因频率在食管癌患者和健康对照组中分别为 44 2 %、5 5 8%和 44 0 %、5 6 0 %。等位基因分布在两组之间差异无统计学意义 ,χ2 =0 0 0 8,P =0 92 9;基因型分布在病例组与对照组之间差异也无统计学意义 ,χ2=2 116,P =0 3 47。相对于Tyr/Tyr基因型 ,His/His基因型或His/His与Tyr/His基因型相加均未增加ESCC的发病风险。它们的危险度分别为 1 0 76( 95 %可信区间 =0 85 0～ 1 3 61)和 0 75 6( 95 %可信区间 =0 493～ 1 15 7)。如按性别、年龄、吸烟状态及是否具有上消化道肿瘤家族史进行分类 ,His/His基因型或His/His与Tyr/His基因型相加也未对ESCC的发病风险造成明显影响。结论 :mEH的Tyr113His多态性不能作为筛查ESCC患病风险的独立因素。

食品水解酶的助消化吸收与辅助治疗作用研究进展

随着人口老龄化速度加快和社会生活压力的增加,消化道障碍人群数量迅速增加,这对食品和医药行业提出了新的要求和挑战。食品水解酶的助消化作用和辅助治疗功效对改善老年人和消化吸收障碍等特殊人群的营养健康和身体机能具有重要意义。为此,本文介绍了食物的消化吸收过程,综述了外源水解酶的助消化作用,以及对某些消化相关疾病的辅助疗效,并对相关酶功能产品开发做出了展望,旨在为引领食品消化酶的基础科学研究,推动食品消化酶新兴产业的健康发展提供参考。

泛素羧基末端水解酶及其在肿瘤发生发展中的作用研究进展

泛素—蛋白酶体系统通过调控关键蛋白的泛素化和去泛素化介导多种细胞活动。泛素羧基末端水解酶在多种肿瘤组织中表达异常，作为去泛素化酶家族成员，可移除泛素化蛋白上的泛素分子，从而介导肿瘤发生中关键蛋白的泛素化水平，参与多种肿瘤的发生发展过程。本文对泛素羧基末端水解酶家族成员特点及其在肿瘤发生发展中的作用进行综述，以期为寻找肿瘤治疗新靶点提供线索。

酶水解-DNS比色法测定烟草中淀粉含量

目的：烟草中淀粉经淀粉酶水解成单糖后，利用DNS比色法测定其还原糖并确定淀粉的含量。方法：用DNS比色法取代传统经典的高锰酸钾滴定法测定烟叶中淀粉含量。结果：DNS试剂中的3，5-二硝基水杨酸与烟样中的还原糖共热生成的红棕色产物在反应后6h内保持稳定，其吸光度在一定浓度范围内与还原糖含量成正比，可以稳定测定还原糖的含量，回收率98％～102％。结论：与高锰酸钾滴定法比较，酶解DNS比色法的回收率高，成本低，特别适合大批量烟样淀粉含量的测定。

脑蛋白水解物注射液致严重全身性皮疹二例

脑蛋白水解物注射液多用于颅脑外伤、脑血管病后遗症伴有记忆减退及注意力集中障碍的症状改善的治疗,一般无明显不良反应.我们于2004年7月26日～28日发现2例出现不良反应,现报告如下.

利用瘤胃微生物酶类增进畜牧业的生产能力

随着畜牧业竞争的日益加剧 ,畜牧生产者正积极寻求先进的技术来提高生产。其中有效途径之一就是在非反刍类动物饲料中添加纤维类水解酶(Fibrolyticen zymes) ,如纤维素酶 ,木聚糖酶和 β-葡聚糖酶。这些酶能促进植物细胞壁多糖类的降解和可溶性糖分的释放 ,从而提高饲料的利用率并降低植物成分的天然抗营养效应。最近的研究结果表明 ,反刍动物的瘤胃虽产生多种纤维类水解酶 ,进一步添加这类酶仍能提高生产能力。但是 ,酶生产成本偏高和使用的不方便极大地阻碍了这一技术的广泛利用。令人欣慰的是近十几年DNA重组技术显著地改进了微生物的酶生产系统 ,瘤胃微生物也被认定为饲料添加酶和工业酶的丰富而多样化的基因来源。这些基因正被新颖的生物技术推向酶生产和实际应用。因此 ,利用生物技术开发饲料添加酶 。

几种植物类伐昔洛韦水解酶基因的生物信息学分析

以拟南芥和蓖麻为重点,利用生物信息学对不同植物的类伐昔洛韦水解酶(valacyclovir hydrolase-like,VACVase-Like)蛋白的理化性质、保守结构域、信号肽、跨膜结构域、导肽、亲疏水性、二级结构及三级结构等进行预测和分析,并构建了该家族系统发生树。结果表明,除了可可树属于稳定蛋白外,其余均属于不稳定蛋白。该基因家族均含有明显的信号肽、导肽、跨膜结构和亲疏水结构,且结构组成上相似,属于分泌蛋白,但是对亚细胞定位分析发现,在不同植物中存在和发挥功能部位均不相同。分析结果可为植物VACVase-like的研究提供有价值的信息,为进一步研究其在植物体内的功能和作用机理提供依据。