水质细菌总数FISH检测技术的优化

在水质卫生检测方面,FISH具有检测快速、可检测指标多样、检出微生物数量准确等优势。但因其结果稳定性较差,尚不能替代培养计数法成为标准方法。本研究从影响结果稳定性的细胞制片、蛋白酶K消化时间、探针浓度和杂交时间四个方面优化FISH技术。结果表明,46℃、2 h烘烤制片可明显减少因洗涤造成的细胞流失;终浓度10μg/mL的蛋白酶K经37℃、2 min消化可使样品得到较高的荧光信号且背景干扰少;探针终浓度5 ng/μL,46℃、5 h的条件下可促进寡核苷酸探针EUB338 mix与细菌细胞充分杂交。优化后的FISH定量结果较稳定,三次实验的荧光细胞数量无明显差异(P>0.05)。本研究为水质细菌总数检测的FISH法走向标准化提供了一定的技术基础。