水通道蛋白11在羊水量过少产妇胎盘和胎膜中的表达变化及意义

目的探讨水通道蛋白(AQP)11在特发性羊水过少产妇胎盘和胎膜中定性及相对定量表达情况及其在羊水平衡过程中的作用。方法选择在兰州大学第一医院经剖宫产分娩的55例产妇,其中25例特发性羊水过少者作为实验组,30例羊水量正常的足月产妇为对照组。采用SABC免疫组化法和实时荧光定量PCR技术,检测两组产妇羊膜、绒毛膜、胎盘中AQP11的表达及分布。结果 AQP11在足月妊娠产妇羊膜、绒毛膜及胎盘中均有表达,且在羊膜的表达与羊水量呈正相关,在胎盘的表达与羊水量呈负相关;在不同羊水量的绒毛膜的表达均呈增加趋势。结论AQP11在妊娠晚期羊水量调节中可能发挥着重要作用。

水通道蛋白11参与马兜铃酸损伤人肾小管上皮细胞的体外实验

目的:探讨马兜铃酸(AA)对人肾小管上皮细胞(HK-2)损伤机制及水通道蛋白11(AQP11)在损伤过程中的作用。方法:将不同浓度的AA(10、20、40μg/ml)作用于体外培养的HK-2细胞,用四甲基偶氮唑盐法(MTT)选择最适浓度AA;用AQP11过表达质粒转染至HK-2细胞并验证,用以观察AQP11是否对AA诱导HK-2细胞转分化具有保护作用。予未转染及转染HK-2细胞分别加入最适浓度AA培养48 h,用ELISA法检测细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)含量,Real-time PCR检测AQP11 mRNA表达,Western印迹法检测AQP11、结缔组织生长因子(CTGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达。结果:MTT法筛选出的AA最适浓度为20μg/ml;转入质粒过表达AQP11培养48 h后AQP11的表达量显著高于空白组(P<0.01),提示转染成功。加入20μg/ml AA后,ELISA检测显示,未转染组的TGF-β1表达量较空白组明显上升(P<0.05),至48 h达高峰(P<0.01),而转染APQ11质粒组则明显低于未转染组(P<0.05);PCR检测显示,未转染组AQP11 mRNA的表达量逐渐降低,至72 h显著低于空白组(P<0.05),而转染组虽低于空白组(P<0.05),但略高于未转染组(P=0.137);Western印迹法检测显示,未转染组α-SMA、CTGF蛋白表达较空白组明显上升(P<0.01)、AQP11蛋白逐渐降低(P<0.05),转染组48 h的α-SMA、CTGF蛋白表达量均较空白组有所提高(P=0.874,P=0.696),但显著低于未转染组(P<0.01)。结论:AA可抑制HK-2细胞增殖,诱导细胞纤维化、坏死;过表达AQP11蛋白可以抑制AA作用下的细胞纤维化发生发展,AQP11表达调控异常可能是AAN的一个重要发病机制。

猪AQP11基因微环表达载体的构建

旨在构建猪AQP11基因高效表达载体,观察该载体转染Hela细胞的转染效果。本研究通过PCR方法从猪肠道黏膜组织中克隆AQP11基因,构建了微环表达载体minicircle-AQP11,通过瞬时转染Hela细胞观察绿色荧光蛋白表达。结合测序结果表明,本研究成功地克隆了AQP11基因的全序列,包含了完整的CDS区,构建了AQP11基因的微环表达载体,在Hela细胞中观察到了持续1周的绿色荧光蛋白表达。这为进一步阐明AQP11合成的生化过程及功能调控提供新思路。