湿热证大鼠肾内髓及尿液中水通道蛋白AQP2含量的变化

目的 :探讨湿热证大鼠肾内髓AQP2和尿液AQP2与湿热证中“湿”的形成的关系。方法 :复制湿热证大鼠模型 ,检测各组肾内髓及尿液AQP2的含量。结果 :湿热证模型组AQP2水平较正常组明显降低 ,尿液AQP2蛋白的排出量与肾脏AQP2蛋白的表达量有着良好的相关性。结论 :模型组大鼠肾脏AQP2的减少与湿热因素造模有着密切联系 ,尿液AQP2含量可以反映肾内髓AQP2蛋白的水平。

水通道蛋白AQP2在原发性肝细胞肝癌多柔比星耐药机制中的作用研究

目的探索原发性肝细胞肝癌(HCC)多柔比星(doxorubicin,DOX)耐药的机制,为进一步提高HCC患者介入治疗的疗效提供前期探索。方法应用Western blotting方法检测DOX处理后的上皮间质化转变(EMT)的相关蛋白E-Cadherin和Vimentin表达情况,使用流式细胞仪观察细胞干性标记CD133的变化情况,使用基因芯片技术观察DOX处理后的细胞机制变化。结果 DOX能诱导HCC细胞发生上皮间质化转变,并且能提升HCC细胞CD133的比例(3.5%vs 35.5%,P<0.05);基因芯片提示HCC细胞内水通道蛋白AQP2基因显著上调;敲降AQP2基因后,能显著减弱DOX诱导HCC细胞产生EMT的效果。结论水通道蛋白AQP2在肝细胞肝癌多柔比星耐药机制中具有重要作用,降低AQP2的表达可以减弱多柔比星诱导肝癌细胞上皮间质化转变的效果。

益气养阴通络方通过抑制PI3K/AKT通路和水通道蛋白2(AQP2)表达减轻糖尿病肾病大鼠肾损伤

目的探讨益气养阴通络方(YYTR)对糖尿病肾组织磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、水通道蛋白2(AQP2)表达的影响及机制。方法将60只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、缬沙坦(20 mg/kg)组、YYTR(4 mg/kg、1 mg/kg)组、4 mg/kg YYTR联合0.5μmol/kg 740Y-P组,每组各10只。除空白组外,其余各组大鼠利用高糖高脂饲料联合注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病肾病(DN)大鼠模型。造模成功次日,灌胃给药,共8周。实验结束后检测肾功能指标,根据肾脏组织HE染色和Masson染色结果评价肾小球硬化指数、肾间质损伤指数。Western blot法检测AQP2、PI3K、AKT、磷酸化PI3K(p-PI3K)和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白水平,免疫组织化学染色检测肾组织AQP2表达和分布。结果与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白总量(24 h UTP)、血肌酐、尿素氮、β2微球蛋白(β2-MG)含量、肾脏指数、肾小球硬化指数、肾间质损伤指数、AQP2蛋白和PI3K、AKT、p-PI3K和pAKT蛋白表达量升高;与模型组相比,4 mg/kg YYTR组大鼠以上指标均明显降低,与4 mg/kg YYTR组相比,YYTR联合740Y-P组大鼠以上指标则升高。结论YYTR下调糖尿病肾病大鼠肾脏组织AQP2蛋白表达并抑制PI3K/AKT通路活化发挥肾保护作用。

大蒜素对阿霉素诱导慢性心衰大鼠心功能及血精氨酸血管加压素、尿水通道蛋白-2的影响

目的观察大蒜素对阿霉素诱导慢性心衰大鼠心功能的影响,并分析其血精氨酸血管加压素(AVP)、尿水通道蛋白(AQP)-2水平变化。方法随机选取90只SD雄性大鼠,其中15只为正常组,剩余75只用于建立阿霉素诱导慢性心衰大鼠模型,随机分为模型组和A、B、C、D组,每组15只。正常组和模型组给予10 ml/kg玉米油处理,A、B、C、D组分别给予含10、15、20、25 mg/kg剂量大蒜素玉米油10 ml/kg,干预8 w后观察各组心功能,并检测血AVP、尿AQP-2的变化。结果模型组心功能各项指标与正常组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。A、B、C、D组左室舒张末内径(LVEDD)、左室收缩末内径(LVESD)、左室重量(LVM)均显著低于模型组,且D组显著低于A、B、C组(P<0.05),而A、B、C、D组左室短轴缩短率(FS)、左室射血分数(LVEF)均显著高于模型组,且D组均显著高于A、B、C组(P<0.05);模型组血AVP、尿AQP-2与正常组比较均明显增高(P<0.05)。A、B、C、D组血AVP、尿AQP-2均显著低于模型组(P<0.05),且组间两两比较均差异有统计学意义(P<0.05)。结论大蒜素可能具有改善阿霉素诱导慢性心衰大鼠心功能,降低AVP、尿AQP-2水平含量的作用,对治疗阿霉素诱导慢性心衰具有潜在的价值。

水通道蛋白2在人胎膜中的表达及意义

目的:通过检测水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)是否在人胎盘和胎膜组织中表达,探讨AQP2在羊水平衡中的意义。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学技术对5例足月正常分娩的胎盘和胎膜组织样本进行AQP2的检测。结果:RT-PCR显示AQP2mRNA水平在胎膜组织中有表达;免疫组化显示AQP2阳性着色主要分布于羊膜上皮细胞的胞膜和平滑绒毛膜滋养细胞。结论:AQP2在人胎膜组织中表达,提示其可能在羊水平衡的调节中发挥作用。

脾胃湿热证大鼠湿偏重、热偏重模型尿液AQP_2的变化及其在肾组织的表达

目的:研究脾胃湿热证湿、热偏重型之间AQP2在尿液中的变化及在肾脏组织中表达的变化规律,揭示清香散、白虎加苍术汤分别治疗脾胃湿热证湿、热偏重型的作用机制。方法:采用Bradford方法测定尿液中AQP2含量,采用SABC免疫组化法检测肾脏内外髓集合管、远曲小管管壁上AQP2的表达。结果:湿偏重组尿液AQP2含量明显减少,热偏重组尿液AQP2含量明显增加,而且热偏重组尿液AQP2含量更高。AQP2在肾脏的表达中,湿偏重组肾脏内外髓集合管、远曲小管管壁上AQP2表达明显比正常组、白虎加苍术汤组及清香散组减少,热偏重组表达最多。结论:AQP2对于脾胃湿热证"湿"的形成,湿、热的量化,判断湿、热的偏重具有重要的作用。白虎加苍术汤及清香散祛湿的作用可能是通过调节AQP2对细胞内外体液平衡的功能而达到的。

基于cAMP/AQP2/NLRP3通路探讨济生肾气丸对慢性肾脏病模型大鼠的影响

目的:通过观察济生肾气丸对慢性肾脏病(CKD)模型大鼠环磷酸腺苷(cAMP)/水通道蛋白2(AQP2)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路及其相关炎性因子的影响,探讨其改善慢性肾脏病大鼠的作用机制。方法:将60只SPF级SD大鼠随机分为空白组(15只)和造模组(45只),通过腺嘌呤灌胃28 d诱导建立CKD大鼠模型,将造模组随机分为模型组和济生肾气丸高、中、低剂量组(1.2、0.6、0.3 g·kg^(-1)·d^(-1)),空白组和模型组灌胃等体积纯净水,连续给药28 d。在给药的第14、28天收集大鼠24 h尿量,检测大鼠24 h尿蛋白含量。经末次给药后,大鼠称体质量麻醉取材,采用生化法检测大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)的含量。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肾组织AQP2、cAMP、精氨酸加压素(AVP)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织NLRP3、AQP2蛋白表达水平。苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色及过碘酸-雪夫染色(PAS)观察大鼠肾组织病理变化。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量、24 h尿量显著下降,24 h尿蛋白、肾脏湿重及肾体比显著升高(P<0.01),血清SCr、BUN和肾组织IL-1β含量明显升高(P<0.05,P<0.01),肾组织AVP、cAMP、AQP2含量显著降低(P<0.01),肾组织NLRP3蛋白表达水平显著升高(P<0.01),AQP2蛋白表达水平显著降低(P<0.01),肾脏组织病理损伤严重;与模型组比较,济生肾气丸组明显改善大鼠精神状况,体质量、24 h尿量显著增加,24 h尿蛋白含量、肾脏湿重及肾体比明显下降(P<0.05,P<0.01),血清SCr、BUN水平明显降低(P<0.05,P<0.01),肾组织AVP、cAMP、AQP2含量显著升高(P<0.01),肾组织IL-1β和NLRP3蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),AQP2蛋白表达水平显著升高(P<0.01),肾脏组织病理损伤得到明显改善。结论:济生肾气丸可通过调控cAMP/AQP2/NLRP3信号通路减少炎性因子释放,改善肾脏功能和病理损伤,发挥防治慢性肾脏病作用。

3种模拟中医体征的体虚便秘大鼠模型建立及效果观察

目的:分别建立大鼠血虚、阴虚和阳虚便秘模型并比较其结肠动力、结肠水代谢、结肠黏液分泌和结肠水通道蛋白2(AQP2)的表达水平。方法:40只SD大鼠,雌雄各半,随机分为4组(n=10):正常对照组(N)、血虚便秘组(XC)、阴虚便秘组(YC)、阳虚便秘组(YAC)。分别采用放血+洛哌丁胺、甲状腺素+洛哌丁胺、冰水刺激+洛哌丁胺建立血虚便秘、阴虚便秘、阳虚便秘大鼠模型,放血每周1次,药物每天灌胃1次,连续42 d。检测大鼠活动状态、体质量、大便性状、口肛传输时间、小肠推进率、粪便和结肠含水量等体征指标,对结肠组织进行AB-PAS染色和免疫组化染色,观察黏液分泌情况和AQP2表达水平。结果:与正常对照组比较,3种模型大鼠体重增长减慢;造模第40天自主活动量变化率由大到小依次为YC、XC和YAC;造模第30天出现固体硬质粪便,粪便评分升高顺序为XC、YC和YAC;口肛传输时间均显著延长、小肠推进率均显著降低(P<0.05,P<0.01),肠动力减低顺序为YC、YAC和XC;粪便含水量均显著减少(P<0.05,P<0.01),XC和YAC组大鼠结肠含水量显著减少(P<0.05,P<0.01),YC大鼠结肠含水量有减少趋势,结肠水代谢顺序为YC、YAC和XC;3种模型大鼠结肠黏膜层腺管和杯状细胞出现不同程度缩小,黏液分泌减少,分泌功能障碍顺序为YAC、YC和XC,且近端和远端结肠AQP2的表达均显著增加(P<0.05,P<0.01),增加顺序近端结肠为YAC、YC、XC,远端结肠为YAC、XC和YC。结论:复合因素长期刺激均可建立符合中医体征的便秘大鼠模型,且各模型大鼠结肠运动、结肠水代谢、结肠黏液分泌和AQP2表达水平存在一定的差异。

真武汤调控AVP/AQP2通路改善自发性高血压大鼠肾损伤研究

目的:探讨真武汤对自发性高血压大鼠(SHR)基于AVP/AQP2通路调控对肾损伤的保护作用。方法:50只SHR随机分为模型对照组、依那普利0.67 mg/kg组、真武汤2.1、8.4 g/kg组,Wistar Kyoto大鼠(WKY)为正常对照组,连续灌胃给予相应药物或蒸馏水8 w。每两周测大鼠尾动脉血压;实验末,记录24 h尿量,进行尿渗透压、Na^(+)、K^(+)离子浓度、HE染色、肾脏指数检测;全自动生化仪测定尿液总蛋白(UTP)、β2-微球蛋白(β2-MG);ELISA试剂盒测定尿液水通道蛋白2(AQP2)和血清精氨酸加压素(AVP)、醛固酮(ALD)含量,免疫印迹法检测肾组织AQP2蛋白表达情况。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠24 h尿量、Na^(+)、Na^(+)/K^(+)比值显著降低(P<0.01),尿液渗透压、K^(+)、UTP、β2-MG、AQP2含量、血清ALD、AVP含量、肾脏指数及肾组织AQP2蛋白表达显著增加(P<0.01)。与模型对照组比较,真武汤两个剂量组给药后能明显降低UTP、β2-MG的含量(P<0.05或P<0.01),改善SHR肾小球病变,明显降低血清ALD、AVP含量(P<0.05或P<0.01),明显促进尿液排出、明显降低渗透压、明显升高Na^(+)/K^(+)比值(P<0.05或P<0.01),显著降低肾组织AQP2蛋白表达和尿液AQP2含量(P<0.01),以真武汤8.4 g/kg组改善最明显。结论:真武汤通过调节AVP/AQP2通路保护高血压肾损伤。

桑白皮各化学拆分组分对阿霉素肾病大鼠水钠潴留的影响

目的:探讨桑白皮各化学拆分组分对阿霉素肾病大鼠水钠潴留的影响及其作用机制。方法:采用一次性尾静脉注射阿霉素(6.5 mg·kg^(-1))建立阿霉素肾病模型,造模7 d后开始ig给药,连续给药21 d。实验期间于第7,14,21,28天留取尿液,检测大鼠尿量,24 h尿蛋白,尿钠及尿渗透压。给药3周后,测定各组大鼠血液渗透压、电解质及血液中总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),白蛋白(ALB),尿素氮(BUN),肌酐(Cr),抗利尿激素(AVP)的含量,同时计算肾脏指数,并检测肾脏中抗利尿激素V2受体(AVPV2R),水通道蛋白-2(AQP2)的水平及Na+-K+-ATP酶的活性等指标,蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测肾脏AQP2的表达。结果:桑白皮水煎液能够降低阿霉素肾病大鼠的尿蛋白含量,改善低蛋白血症与高脂血症,并且以低剂量(476 mg·kg^(-1))效果最好;各化学拆分组分中桑白皮30%乙醇洗脱组分能够显著降低阿霉素肾病大鼠24 h尿蛋白,TC,TG,AVP,AVPV2R,AQP2含量,降低Na+-K+-ATP酶活性及肾脏指数(P<0.05,P<0.01),能够明显增加阿霉素肾病大鼠ALB,尿量,尿钠及尿渗透压(P<0.05,P<0.01)。结论:桑白皮水煎液能够显著改善阿霉素肾病大鼠的各项病理症状,其30%乙醇洗脱组分为最佳有效部位,且其改善阿霉素肾病大鼠水钠潴留的机制可能与调节血浆AVP,肾脏AVPV2R,AQP2表达及Na+-K+-ATP酶活性有关。