水通道蛋白8对脓毒症大鼠肝细胞线粒体形态的影响

目的研究脓毒症状态下大鼠肝细胞线粒体形态学的变化及线粒体水通道蛋白8（AQP8）的表达。方法将24只sD大鼠分成对照组和脓毒症组（每组12只）。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）建立脓毒症实验动物模型，用Western印迹法检测大鼠肝细胞线粒体AQP8蛋白的表达，应用RT—PCR技术检测线粒体AQP8mRNA相对表达量；电镜下观察两组大鼠肝细胞线粒体的超微结构。结果脓毒症组大鼠肝细胞线粒体出现明显损伤；将对照组肝细胞线粒体AQP8蛋白相对表达水平设为1，则脓毒组AQP8蛋白表达水平为0．61±0．08，较对照组平均减少约39％，差异有统计学意义（P〈0．01）；将对照组肝细胞线粒体AQP8mRNA相对表达量设为1，脓毒组大鼠肝细胞线粒体AQP8mRNA相对表达量为1．59±0．24，较对照组平均增加约59％，差异也有统计学意义（P〈0．01）。结论脓毒症状态下，肝细胞线粒体出现肿胀、变性，线粒体AQP8蛋白表达下调可能是重要因素之一；由于机体的代偿作用，线粒体AQP8mRNA的表达是增加的。

健脾益肝方对肝硬化大鼠AQP8的影响

目的:观察健脾益肝方对肝硬化模型大鼠肝组织水通道蛋白AQP8表达的影响。方法:将90只Wist-ar大鼠随机分为空白对照组、模型组、健脾益肝方高、中、低剂量组及秋水仙碱组,运用CCL4法造肝硬化模型,并对肝脏组织作AQP8 PCR定量及Western Blotting检测。结果:模型组AQP8蛋白含量及平均光密度值和积分光密度值均很低,与空白组相比有极显著差异(P<0.01);经过治疗后健脾益肝方可以使AQP8蛋白含量及平均光密度值和积分光密度值均升高,其中疗效与中药使用剂量正相关,健脾益肝方低剂量组与模型组相比有显著差异(P<0.05),而健脾益肝方中剂量组及高剂量组与模型组相比具有极显著差异(P<0.01);秋水仙碱组与模型组比较没有显著差异(P>0.05)。结论:健脾益肝方对AQP8蛋白的升高作用是治疗肝硬化的靶点之一。

AQP1、AQP8在病变宫颈上皮组织中的表达及临床意义

目的:探究水通道蛋白1(aquaporin-1,AQP1)及水通道蛋白8(aquaporin-8,AQP8)在病变宫颈上皮组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学法、蛋白质印迹法对32例宫颈炎、95例宫颈癌及30例宫颈上皮内瘤变Ⅲ患者AQP1、AQP8的表达进行检测并分析。结果:3组AQP1微血管密度及AQP8阳性表达率差异均具有统计学意义(P<0.05),且3组AQP1/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、AQP8/GAPDH差异均具有统计学意义(P<0.05);宫颈癌患者AQP1、AQP8的表达与临床分期、浸润深度、肿瘤直径等显著相关(P<0.05)。结论:不同宫颈上皮组织病变程度的AQP1、AQP8表达差异具有统计学意义(P<0.05),且AQP1、AQP8在宫颈癌病情发生、发展过程中具有重要的临床病理意义。

健脾活血袪湿方对肝硬化腹水大鼠水通道蛋白8的影响

目的观察健脾活血袪湿方对肝硬化腹水大鼠肝组织AQP8表达的影响。方法将健康SPF级雄性Wistar大鼠90只,随机分为空白组、模型组、健脾活血祛湿方高、中、低剂量组及秋水仙碱组,运用改良CCl4-酒精综合法造肝硬化腹水大鼠模型。用荧光定量PCR检测肝组织AQP8m RNA表达水平,免疫组织化学和Western Blotting法检测AQP8蛋白表达。结果模型组AQP8m RNA表达较空白组明显减少(P<0.01),健脾活血祛湿方高剂量组AQP8m RNA表达较模型组显著(P<0.01),秋水仙碱组与健脾活血祛湿方中、低剂量组AQP8m RNA表达与模型组差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示模型组AQP8少量表达,与空白组比较,AQP8蛋白表达量有显著差异(P<0.01),健脾活血祛湿方高剂量组与模型组与比较,AQP9蛋白表达量显著增高(P<0.01);健脾活血祛湿方高剂量组与模型组与比较,AQP8蛋白表达量显著增高(P<0.01);Western Blotting结果显示健脾活血祛湿方高剂量组表达较模型组明显升高(P<0.01),健脾活血祛湿方中剂量组AQP8表达较模型组略有升高,但无统计学意义(P>0.05),健脾活血祛湿方低剂量组AQP8表达低于模型组。秋水仙碱组与模型组比较有差异有统计学意义(P<0.05)。AQP8基因及蛋白表达升高程度与中药使用剂量有关。结论 AQP8可能在肝硬化腹水的形成及消退中起着重要作用,健脾活血祛湿方可明显提高肝硬化腹水大鼠水通道蛋白AQP8表达,可能是该方起到治疗肝硬化腹水作用的分子生物学基础之一,可以作为治疗肝硬化腹水的新靶点。

肝内胆汁淤积机制的新假说

胆汁淤积(Cholestasis)是肝脏疾病的一种常见并发症,病理机制尚不清楚。研究表明,胆汁流障碍是导致胆汁淤积的重要因素。胆汁的形成主要依赖于肝细胞内胆盐的分泌,是在胆汁中水份转运的主要驱动力。肝细胞胆小管膜是胆汁分泌的限速步骤。水通道蛋白-8(Aquaporin-8,AQP8)高表达于肝细胞胆小管膜上,跨膜转运水分子进入胆小管。研究表明AQP8在胆汁淤积的小鼠模型中表达下降;我们利用AQP8敲除小鼠发现,AQP8敲除明显减少了胆汁分泌量,胆汁中胆盐显著增加。因此,我们设想AQP8敲除可能通过提高胆盐输出泵的分泌活性增加胆盐浓度,进而损伤胆小管膜,导致胆小管形成减少,最终导致肝内胆汁淤积。AQP8的激动剂或内源性AQP8表达的再激活将是一个治疗肝内胆汁淤积的新策略。