湿阻中焦证模型胃肠水通道蛋白9(AQP9)的病理特征性表达分布谱以及平胃散干预的研究

目的以前期较成熟湿阻中焦证动物模型为研究平台,研究湿阻中焦证动物模型胃肠组织AQP9的分布和含量以及平胃散的干预,揭示湿阻中焦证动物模型水通道蛋白病理特征性表达分布谱。从蛋白水平揭示湿阻中焦证在水液代谢失调病机方面以及平胃散治疗湿阻中焦证的科学内涵;搭建中药复方水通道调节剂的研究平台。方法模拟外湿过盛、困阻脾胃,饮食不节、湿从内生,情志不遂、气机受阻、水湿不运三大致湿病因,建立湿阻中焦证模型。用免疫组化技术测定胃肠组织AQP9的分布,用酶联免疫法(ELISA)测定胃肠组织AQP9的含量。结果湿阻中焦证AQP9在胃贲门粘膜、胃体中间组织、小肠中段粘膜下组织表达减少,AQP9在胃贲门粘膜下组织表达增加。平胃散增强湿阻中焦证胃体中间组织AQP9的表达。结论 AQP9在湿阻中焦证胃肠特征性表达分布谱可能是湿阻中焦证湿邪困阻脾胃,阻遏气机,散输水津失调所表现证候的分子基础之一。平胃散对湿阻中焦证胃肠AQP9表达的增强可能是平胃散燥湿运脾、行气导滞、散中焦之湿阻治疗湿阻中焦证湿邪困阻脾胃,阻遏气机,散输水津失调所表现证候的分子机理之一。平胃散增强正常大鼠胃肠AQP9的表达,可能是平胃散苦燥虽可祛湿但也可伤津液的分子机理之一。平胃散治疗湿阻中焦证的疾病临床疗效确切,但也不能乱服多服。

水牛水通道蛋白9基因克隆及其表达分析

本研究旨在对水牛水通道蛋白9(aquaporins 9,AQP9)基因进行克隆,并对其在水牛不同组织中的表达规律及其在水牛卵巢和睾丸组织中的表达差异进行探索。根据GenBank上黄牛AQP9基因序列(登录号:NM_001205833.1)设计特异性引物,以水牛睾丸组织cDNA为模板,应用RT-PCR方法扩增AQP9基因编码区片段;运用生物信息学方法分析其核苷酸序列的保守性和氨基酸的理化性质;应用实时荧光定量PCR技术分析AQP9基因在水牛组织中的表达情况;免疫组织化学方法分析AQP9蛋白在不同发育阶段水牛卵泡及睾丸组织中的表达差异。结果表明,克隆获得了888bp的水牛AQP9基因编码区序列,其编码295个氨基酸。多重序列比较显示,水牛AQP9核苷酸序列与牛、猪、绵羊和人相应序列相似性分别为99%、90%、97%、88%;氨基酸序列的同源性分别为99%、86%、97%、83%,系统进化树分析结果推测,AQP9基因在物种进化过程中具有高度保守性。实时荧光定量PCR结果显示,AQP9基因在水牛肝脏、肺脏、大脑、皮肤、睾丸和卵巢组织中有不同程度的表达,在肝脏组织中表达最高,皮肤和睾丸次之,肺脏和卵巢表达较低。免疫组化结果显示,在卵巢组织中,AQP9蛋白表达随卵泡发育时期的不同而变化,并随着卵泡发育其表达逐渐增强;在睾丸组织中,AQP9蛋白在各级精母细胞和间质细胞中均有表达。结果提示,成功克隆得到水牛AQP9基因序列;AQP9在水牛卵巢和睾丸中的表达及其功能可能与水牛卵泡发育和精子发生有重要的关联。

过度训练对大鼠睾丸AQP9表达的影响

目的探讨过度训练对大鼠睾丸水通道蛋白AQP9表达的影响以及睾酮和人参二醇皂甙对过度训练的影响．方法半定量RT—PCR．结果与对照组相比，过度训练大鼠睾丸的AQP9表达下降，而外源睾酮及人参二醇皂甙可以使过度训练大鼠睾丸的AQP9表达增强．结论过度训练抑制大鼠睾丸AQP9的表达，而外源睾酮及人参二醇皂甙可以增强大鼠睾丸AQP9的表达．

商陆皂苷甲肠黏膜损伤与泻下作用及其机制研究

目的研究商陆皂苷甲的肠黏膜损伤与泻下作用及其机制。方法实验分为空白组、商陆生品组、商陆皂苷甲高剂量组和低剂量组。免疫组织化学和实时荧光定量PCR的方法检测各实验组大鼠结肠黏膜粘蛋白2(MUC2)和水通道蛋白9(AQP9)的表达。结果 PCR结果显示商陆生品组、商陆皂苷甲高剂量组和低剂量组MUC2表达较空白组降低(P<0.05)。商陆生品组、商陆皂苷甲高剂量组和低剂量组AQP9的表达较空白组升高(P<0.05)。免疫组化结果显示空白组MUC2阳性明显,着棕黄色。商陆皂苷甲低剂量组可见零星的棕黄色阳性着色,商陆生品组和商陆皂苷甲高剂量组未见棕黄色。空白组AQP9着色浅,商陆生品组、商陆皂苷甲高剂量组和低剂量组阳性着色加深。结论商陆皂苷甲和商陆生品均可以降低大鼠结肠黏膜组织MUC2的表达损伤结肠黏膜。通过增加肠黏膜AQP9的表达发挥泻下作用。