糖尿病大鼠肾脏水通道蛋白-2mRNA的表达及黄芪的调节作用

目的观察黄芪注射液(astragalus membranaceus,AM)对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠肾脏髓质水通道蛋白-2(aquaporin-2,AQP-2)基因表达的影响,以探讨黄芪治疗糖尿病的分子生物学机制。方法实验大鼠分为4组:正常组、糖尿病模型组、AM小剂量组和AM大剂量组,后两组应用AM5、10g·kg-1·d-1腹腔注射6周,测定各组大鼠血糖、血清胰岛素及C肽水平,用代谢笼法测定各组大鼠24h尿量,RT-PCR方法测定各组大鼠肾AQP-2 mRNA的表达。结果糖尿病大鼠血糖水平明显增高,血清胰岛素及C肽水平明显下降,单用黄芪注射液治疗对血糖、血清胰岛素和C肽水平无明显影响,但黄芪治疗可使糖尿病大鼠尿量明显增加。RT-PCR检测发现糖尿病大鼠肾髓质AQP-2 mRNA的表达明显上调,黄芪治疗可使其表达下降。结论黄芪治疗糖尿病利水消肿、改善水平衡代谢紊乱的作用可能与其降低肾髓质AQP-2 mRNA的表达有关。

鼻息肉组织嗜酸粒细胞中水通道蛋白-1和抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达及意义

目的 明确水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)mRNA、抗凋亡基因Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织中的表达、分布及其相关性,探讨AQP-1 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞中表达的意义。方法 16例鼻息肉组织标本来源于鼻息肉切除的患者(女11例,男5例,年龄20-65岁);10例下鼻甲黏膜组织来源于有变应性鼻炎病史的鼻整形患者(女7例,男3例,平均年龄16-58岁)。上述标本取组织相邻切片,应用原位杂交方法检测AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA的表达;以麦格-姬姆萨(May-Griunwald-Giemsa,MGG)染色法鉴别嗜酸粒细胞。结果 16例鼻息肉组织嗜酸粒细胞中均有AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA表达,其阳性细胞表达率分别为(93.16±13.25)％;(84.74±12.10)％;而10例下鼻甲组织嗜酸粒细胞中均有Bcl-2 mRNA表达,但仅有4例表达AQP-1 mRNA;AQP-1mRNA和Bcl-2 mRNA在下鼻甲组织嗜酸粒细胞中阳性细胞表达率分别为(19.54±4.98)％和(16.45±3.12)％。AQP-1 mRNA与Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞的表达呈明显正相关(r=0.875,P<0.01)。结论 AQP-1能够平衡鼻息肉组织嗜酸粒细胞内外液体渗透压,维持其存活,在嗜酸粒细胞抗凋亡中具有重要的意义。

血清及尿β_(2)微球蛋白、视黄醇结合蛋白、水通道蛋白-2与肾盂输尿管连接部梗阻致小儿肾积水严重程度的关系研究

目的探讨血清及尿β_(2)微球蛋白(β_(2)-MG)、视黄醇结合蛋白(RBP)、水通道蛋白-2(AQP2)与肾盂输尿管连接部梗阻(UPJO)致小儿肾积水严重程度的关系。方法选取南宁市第六人民医院泌尿外科接受肾盂输尿管梗阻手术治疗的60例肾积水患儿为肾积水组,根据肾积水严重程度分为轻度组(n=13)、中度组(n=22)和重度组(n=25),另外选取同期该院接受体检的60例健康儿童为对照组。比较对照组和肾积水组不同严重程度患儿血清及尿β_(2)-MG、RBP、AQP2水平;分析β_(2)-MG、RBP、AQP2水平与超声参数[肾盂前后径(APD)、肾实质厚度(PT)]的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清及尿β_(2)-MG、RBP、AQP2对中重度肾积水的诊断效能。结果肾积水组血清及尿β_(2)-MG、RBP水平均高于对照组,血清及尿AQP2水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。肾积水患儿血清β_(2)-MG、尿β_(2)-MG、尿RBP水平和APD水平由低到高为轻度组、中度组、重度组,尿AQP2水平和PT由高到低为轻度组、中度组、重度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。轻度组血清RBP水平低于中度组和重度组,差异有统计学意义(P<0.05)。肾积水患儿血清β_(2)-MG、尿β_(2)-MG、尿RBP水平与APD均呈正相关,与PT均呈负相关(P<0.05);尿AQP2水平与APD呈负相关,与PT呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清β_(2)-MG、尿β_(2)-MG、尿RBP、尿AQP2检测对中重度肾积水均具有一定诊断价值,曲线下面积(AUC)分别为0.652、0.688、0.859、0.680,尿RBP诊断中重度肾积水的AUC显著大于其余指标(P<0.05)。结论血清β_(2)-MG、尿β_(2)-MG、尿RBP、尿AQP2与UPJO致小儿肾积水严重程度相关,尿RBP对中重度肾积水的诊断效能优于其他指标。

丝瓜络对心衰大鼠肾脏水通道蛋白-2 mRNA表达的影响

目的观察丝瓜络（RLF）对慢性充血性心衰大鼠尿量及肾脏水通道蛋白-2（AQP-2）基因表达的影响，初步探讨RLF的利尿作用及其分子生物学机制。方法选取Wista大鼠，采用异丙肾上腺素法建立慢性充血性心衰大鼠模型，分别给予RLF5g·kg-1·d-1，10g·kg-1·d-1，灌胃给药，1次／d，连续用药28d。采用代谢笼法，测定各组大鼠24h尿量；采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术，观察各组大鼠肾脏髓质AQP-2mRNA的表达。结果丝瓜络连续用药可显著增加心衰大鼠尿量并降低心衰大鼠肾脏髓质AQP-2mRNA的表达（P〈0．05）。结论丝瓜络对慢性充血性·心衰大鼠有明显利尿作用，其分子生物学机制可能与降低肾脏髓质AQP-2mRNA的表达有关。

甘遂半夏汤加减甘遂甘草不同给药次数对腹水大鼠水通道蛋白-2基因及肾凋亡的影响

目的观察不同给药次数条件下的甘遂半夏汤加减甘遂甘草反药组合对腹水模型大鼠肾脏水通道蛋白(aquaporin,AQP)-2 mRNA表达及肾组织凋亡的影响。方法采用Walker-256细胞制造癌性腹水模型,将Wistar大鼠按体质量随机分为空白组、模型组、阳性对照组、全方给药一次组、去草给药一次组、去遂给药一次组、去草遂给药一次组、全方给药二次组、去草给药二次组、去遂给药二次组、去草遂给药二次组,共计11组。给药一次组每天上午给药一次,给药二次组上午下午各给药一次,一二次组每天给药总量一致。腹水长成14天取材,摘取肾脏,液氮保存,进行PCR和免疫组化实验。结果甘遂半夏汤全方给药一次组和全方给药二次组的AQP-2 mRNA表达及肾组织凋亡无明显差异。但全方组的AQP-2 mRNA表达及肾组织凋亡均较全方去一味或两味反药组有降低趋势。结论含甘遂甘草反药组合的甘遂半夏汤全方给药一次组和给药二次组抑制AQP-2mRNA表达和对癌性腹水造成的肾组织细胞过度凋亡的减缓作用无明显差异,且均优于全方去掉一味或两味反药组。

水通道蛋白-2、4在小鼠肾发育过程中的表达

目的观察水通道蛋白-2(AQP-2)和水通道蛋白-4(AQP-4)在小鼠肾脏发育过程中的表达位置,探讨其与肾脏发生发育的关系及作用。方法免疫组织化学SABC法染色和体视学半定量检测AQP-2、AQP-4的表达。结果AQP-2在胚龄17d的胎鼠可以明确检测到,其表达部位为集合管主细胞的管腔膜和胞浆内。体视学测量发现,从胚龄17d开始表达到生后1d的小鼠其管腔膜的面密度值逐渐增加,此后面密度值基本上没有变化。AQP-4在胚龄14d的胎鼠可见到微弱的表达,随着胚龄的增长其表达逐渐增加,到生后1d达到最大水平,以后随着日龄的增加表达量无明显变化,并且在每一个时期的表达量都远远小于AQP-2的表达量。AQP-4的表达部位为集合管的侧基底细胞膜。结论推测AQP-2对小鼠出生后肾脏水平衡的调节作用比较重要,而AQP-4对出生前水平衡的调节作用比较重要。

水通道蛋白-2在鼻息肉组织中的表达

目的 研究水通道蛋白 2 (waterchannelprotein ;aquaporin 2 ,AQP 2 )在鼻息肉组织中的表达 ,探讨其与鼻息肉形成的关系。方法 取鼻中隔偏曲矫正术患者下鼻甲组织 11例和鼻息肉组织46例 ,鼻息肉组中Ⅱ型 1期 10例 ,2期 12例 ,3期 10例 ;Ⅲ型 14例。采用免疫组织化学技术检测AQP 2在不同型期鼻息肉和下鼻甲黏膜组织中的表达。结果 ①在鼻息肉上皮层AQP 2阳性细胞数显著高于下鼻甲黏膜 (P <0 0 1) ;上皮层AQP 2表达的面密度值也显著高于下鼻甲组 (P <0 0 5) ,不同型期鼻息肉上皮层AQP 2的面密度值又有差异 ,Ⅱ型 2、3期和Ⅲ型鼻息肉显著高于Ⅱ型 1期鼻息肉 (P <0 0 5) ;②Ⅱ型 2、3期和Ⅲ型鼻息肉上皮下组织AQP 2阳性细胞数和面密度值均显著低于Ⅱ型 1期鼻息肉和下鼻甲黏膜上皮下组织 (P <0 0 5) ,而后两者间AQP 2阳性细胞数和面密度值均无显著性差异 (P >0 0 5)。结论 AQP 2在鼻息肉组织中的高表达可能与鼻息肉的发生和发展关系密切 。

心肌梗塞致心力衰竭大鼠模型不同时期尿液水通道蛋白-2的改变

目的 :探讨心肌梗塞致心力衰竭大鼠模型不同时期尿液水通道蛋白 - 2 (AQP2 )浓度的改变及其与低钠血症的关系。方法 :应用左冠状动脉结扎复制慢性心力衰竭大鼠模型 ,对该模型术后不同时期的大鼠应用Western蛋白印迹测定尿液AQP2浓度并测定 2 4h尿量、血钠、尿渗量等指标。结果 :在左冠状动脉结扎术后心力衰竭大鼠模型 ,尿液AQP2浓度变化有两个峰 ,一是在术后 3d ,二是在术后第 9周 ;不同时期心力衰竭组的血钠 ,尿渗量与对照组比较均存在显著差异。术后第 9周心肌梗塞心衰组尿液AQP2光密度值 (36 5 %± 10 3% )明显高于心肌梗塞心功能代偿组 (179%± 81% )及对照组 (99%± 48% ) (P <0 0 1)。结论 :左冠状动脉结扎术后不同时期心衰大鼠尿液AQP2变化的规律反映了AQP2基因在心力衰竭进程中表达明显增高 ,肾脏AQP2基因表达增高是心力衰竭伴低钠血症的重要发病原因。

尿液水通道蛋白-2双抗体夹心ELISA测定法的建立

目的建立较为稳定的定量检测尿液水通道蛋白-2(AQP2)的酶联免疫吸附测定(ELISA)法。方法人工合成AQP2蛋白C-末端的CELHSPQSLPRGSKA多肽片段,并与KLH联接,制备兔抗AQP2多肽片段的多克隆抗体,用辣根过氧化物酶标记部分抗AQP2抗体IgG。建立检测充血性心力衰竭模型大鼠尿液AQP2的双抗体夹心ELISA法。结果双抗体夹心ELISA法成功建立,灵敏度为15.625 pmol/ml,批内及批间变异系数分别为4.65%和14.05%;用该法定量检测左冠状动脉结扎术后不同梗死面积充血性心力衰竭模型大鼠的尿AQP2浓度,其结果与Western blotting半定量检测结果一致。结论双抗体夹心ELISA法可以较好地定量检测充血性心力衰竭模型大鼠的尿AQP2蛋白浓度且较Western blotting更加简便易行,便于临床推广使用。

低肾素型原发性高血压尿液水通道蛋白-2水平的研究

目的探讨低肾素型原发性高血压病(LRH)患者尿液水孔蛋白-2(AQP-2)水平及其与血压之间的关系,并评价其对LRH的诊断价值。方法根据血浆肾素活性将150例原发性高血压病患者分为LRH、正常肾素型和高肾素型3组,28例正常血压者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测尿液AQP-2含量,用放射免疫分析法同步测定血浆血管加压素(AVP)水平。结果LRH患者AQP-2、AVP水平均明显高于正常肾素型与高肾素型及对照组,分别为(77.6±12.4)nmol/L vs(50.0±10.9)nmol/L、(44.6±14.0)nmol/L、(45.5±11.8)nmol/L,均P<0.01;(5.39±1.55)ng/L vs(3.82±1.51)ng/L、(3.24±1.01)ng/L、(3.60±1.28)ng/L,均P<0.01。AQP-2与AVP、平均动脉压正相关(Rs=0.334,P=0.016;Rs=0.391,P=0.004),与血浆肾素活性负相关(Rs=-0.285,P=0.040),并且AQP-2水平随高血压分级增高而升高(68.3±17.5)nmol/L、(76.7±10.8)nmol/L、(83.4±12.7)nmol/L,F=6.64,P=0.003;多元线性回归显示AQP-2与LRH患者平均动脉压显著相关。以对照组尿液AQP-2含量(x-+1.96s)为标准,AQP-2诊断LRH的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为90.4%、94.9%、90.4%、94.9%。结论LRH患者尿液AQP-2水平升高与血压相关,并且其对LRH有一定诊断价值。

强心通脉胶囊对充血性心力衰竭大鼠血流动力学、神经内分泌和水通道蛋白-2的影响

目的探讨强心通脉胶囊对充血性心力衰竭(CHF)大鼠模型血流动力学、神经内分泌及肾脏水通道蛋白-2(AQP2)基因表达的影响。方法采用左冠状动脉结扎制备充血性心力衰竭大鼠模型,术后第6周观察大鼠的心功能变化,用放免法检测大鼠血浆心钠素(ANP)、内皮素(ET-1)水平;采用RT-PCR方法检测大鼠肾脏AQP2mRNA的表达。结果充血性心力衰竭大鼠血流动力学参数、ANP、ET-1、AQP2mRNA的表达较之假手术对照组明显异常,强心通脉胶囊可显著改善上述异常。结论左冠状动脉结扎所致的充血性心力衰竭大鼠,血流动力学参数、血浆ANP、ET-1和肾脏AQP2mRNA的表达异常,强心通脉胶囊对充血性心力衰竭的治疗作用与改善大鼠的血流动力学参数和降低血浆ANP、ET-1水平,并能部分纠正肾脏AQPmRNA的异常表达有关。

高湿环境致大鼠肾功能损害与水通道蛋白-2的表达

目的观察高湿环境对SD大鼠肾功能的影响,探讨水通道蛋白-2(AQP2)和加压素受体-2(V2R)在高湿环境大鼠肾脏中的表达及其意义。方法 20只SD大鼠随机分为对照组和高湿组,每组10只。高湿组大鼠每日放入人工气候箱10 h[温度25℃,相对湿度(RH)为(90±2)%],对照组置常温常湿环境[温度(25±2)℃,RH(55±5)%]。处理20 d后,荧光定量PCR检测肾髓质AQP2和V2R mRNA表达水平,Western blot法检测肾髓质AQP2、磷酸化AQP2(p-AQP2)以及V2R的蛋白表达水平。结果与对照组相比,高湿组大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)显著升高(P<0.05);肾髓质AQP2和V2R mRNA表达较对照组显著降低(P<0.01),AQP2、V2R的蛋白表达水平和AQP2的磷酸化水平较对照组显著降低(P<0.05)。结论高湿环境可对大鼠肾功能造成一定损害,且使V2R和AQP2的表达水平降低,AQP2磷酸化水平也降低,提示V2R和AQP2可能参与了高湿环境引起的肾功能损害的发生发展。

大鼠肾脏缺血再灌注损伤过程中水通道蛋白-2的表达变化

目的:研究大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)后水通道蛋白-2(AQP-2)的表达变化与肾功能变化的关系。方法:建立大鼠左侧肾脏缺血再灌注损伤模型,于IRI不同的时间点处死大鼠,留取尿液、血清、肾脏标本行尿常规、肾功能、肾脏病理形态学及AQP-2的免疫组化、RT-PCR检测。结果:大鼠肾脏IRI后出现尿量增多、尿渗透压降低,血肌苷、尿素氮升高症状;HE染色示肾小管上皮细胞肿胀、坏死、脱落;AQP-2表达量及其mRNA含量均较对照组减少,这些变化于IRI 3d时最低,至IRI 7d时恢复正常。结论:肾脏IRI后AQP-2表达的减少可能是急性肾衰竭时尿量增多、尿渗透压降低的重要因素之一。

宫颈阴道组织水通道蛋白-2的表达水平及其相关因素研究

目的:探讨人宫颈阴道上皮组织中水通道蛋白-2(AQP2)mRNA的表达。方法:采用实时荧光定量PCR技术检测2007年3月至2008年3月首都医科大学附属复兴医院妇产科45例患者(月经正常女性18例,围绝经期女性14例,绝经后期女性13例)宫颈阴道组织AQP2mRNA的表达水平,应用单因素方差分析及一元线性相关与回归进行分析。结果:AQP2mRNA在宫颈阴道上皮中均有表达,月经正常组、围绝经组及绝经组宫颈阴道组织中AQP2mRNA表达量依次降低,月经正常组AQP2mRNA表达水平强于围绝经组和绝经组,差异有统计学意义(P<0.05),围绝经组和绝经组比较,差异无统计学意义(P>0.05),同时研究发现AQP2mRNA表达与年龄呈负相关(r=-0.479,P<0.05),与血浆渗透压呈负相关(r=-0.285,P<0.05),与E2水平呈正相关(r=0.530,P<0.05)。结论:围绝经期及绝经后期宫颈阴道上皮中AQP2mRNA的表达下降,可能导致阴道分泌物减少,是引起围绝经期及绝经后期阴道干涩等症的可能机制之一。

充血性心力衰竭患者尿液水通道蛋白-2的临床检测

目的 :探讨充血性心力衰竭 ( CHF)患者尿液水通道蛋白 -2 ( aquaporin-2 ,AQP2 )浓度的变化及其与低钠血症的关系。方法 :应用双抗体夹心 ELISA法检测 CHF患者 ( 3 64例 )和健康对照者 ( 82例 )的尿液 AQP2浓度 ,并测定血钠、左室射血分数 ( L VEF)等指标。结果 :CHF患者比对照组尿 AQP2的浓度明显增高 ( P<0 .0 1) ,且 CHF越重( NYHY等级越高、L VEF越小 )及血钠越低 ,尿 AQP2的浓度越高。结论 :CHF患者水潴留及低钠血症越重 ,尿液AQP2排出越多。监测尿液 AQP2浓度 ,为临床防治 CHF及水钠失衡提供了新的检测指标和方法。

异丙酚预处理对HK-2细胞缺氧/复氧损伤后水通道蛋白1表达的影响

目的观察异丙酚预处理对HK-2细胞缺氧/复氧损伤后水通道蛋白(AQP-1)表达的影响。方法将培养的HK-2细胞随机分为4组:对照组(A组):细胞未经任何处理;氯化钴(CoCl2)组(B组):培养孔中加入300μmol/L的CoCl2处理4 h,然后更换正常的培养基培养24 h,之后更换无血清的培养基培养;脂肪乳剂组(C组):培养孔中加入10%脂肪乳剂90μl预处理1 h,余同B组;异丙酚组(D组):培养孔中加入用DMEM稀释至终浓度25μmol/L的异丙酚预处理1 h,余同B组。MTT法测定细胞增殖,RT-PCR技术检测AQP-1和bcl-2 mRNA的表达。结果经过25μmol/L的异丙酚预处理1 h后,HK-2细胞的增殖明显增高(P<0.01),AQP-1 mRNA的表达明显减少(P<0.01),bcl-2 mRNA的表达明显增加(P<0.01)。结论异丙酚预处理通过调节AQP-1和bcl-2的表达从而减轻HK-2细胞缺氧/复氧后的损伤。

猪苓对大鼠肾脏水通道蛋白-2基因表达的影响

目的 观察猪苓的利尿作用和对大鼠肾脏水通道蛋白-2（aquaporin-2，AQP2）基因表达的影响。探讨猪苓利尿作用机制。方法 代谢笼法观察不同时间、不同剂量的猪苓对大鼠尿量的影响；RT-PCR方法检测猪苓对大鼠肾脏水通道蛋白-2基因表达的影响。结果 猪苓1g／kg组可引起大鼠尿量明显增加，与对照组比较差异有显著性（P〈0．01）。0．5/kg组较对照组尿量有所增加，但差异无显著性（P〉0．05）。猪苓的利尿作用于药后1h起效，2～4h作用最显著，维持时间〉6h。大鼠肾脏AQP2 mRNA表达猪苓高剂量组明显低于对照组（P〈0．05）。结论 猪苓利尿作用强，起效快，维持时间较长；大鼠肾脏AQP2mRNA表达减少可能与猪苓的利尿作用机制有关。

茯苓对正常大鼠肾脏水通道蛋白-2水平的影响分析

目的探讨中药茯苓对正常大鼠肾脏及尿液水通道蛋白-2(AQP2)水平的影响。方法 30只健康SD大鼠随机分成对照组和茯苓组各15只,用药后观察大鼠尿量,用RT-PCR半定量法检测肾内髓质AQP2及血管加压素-2型受体(V2-R)基因mRNA水平,用ELISA法检测尿液AQP2浓度,Western blot检测肾内髓质AQP2含量。结果茯苓组大鼠:尿量较对照组显著增多,尿渗量低于对照组,尿液中AQP2水平明显降低;肾内髓质AQP2、V2-R基因mRNA水平较对照组降低(P<0.05),AQP2表达亦减少(P<0.05)。结论茯苓可以抑制正常大鼠肾内髓质AQP2mRNA水平和AQP2的表达,同时减少肾内AQP2经尿液的排出。

大蒜素对阿霉素诱导慢性心衰大鼠心功能及血精氨酸血管加压素、尿水通道蛋白-2的影响

目的观察大蒜素对阿霉素诱导慢性心衰大鼠心功能的影响,并分析其血精氨酸血管加压素(AVP)、尿水通道蛋白(AQP)-2水平变化。方法随机选取90只SD雄性大鼠,其中15只为正常组,剩余75只用于建立阿霉素诱导慢性心衰大鼠模型,随机分为模型组和A、B、C、D组,每组15只。正常组和模型组给予10 ml/kg玉米油处理,A、B、C、D组分别给予含10、15、20、25 mg/kg剂量大蒜素玉米油10 ml/kg,干预8 w后观察各组心功能,并检测血AVP、尿AQP-2的变化。结果模型组心功能各项指标与正常组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。A、B、C、D组左室舒张末内径(LVEDD)、左室收缩末内径(LVESD)、左室重量(LVM)均显著低于模型组,且D组显著低于A、B、C组(P<0.05),而A、B、C、D组左室短轴缩短率(FS)、左室射血分数(LVEF)均显著高于模型组,且D组均显著高于A、B、C组(P<0.05);模型组血AVP、尿AQP-2与正常组比较均明显增高(P<0.05)。A、B、C、D组血AVP、尿AQP-2均显著低于模型组(P<0.05),且组间两两比较均差异有统计学意义(P<0.05)。结论大蒜素可能具有改善阿霉素诱导慢性心衰大鼠心功能,降低AVP、尿AQP-2水平含量的作用,对治疗阿霉素诱导慢性心衰具有潜在的价值。