甲磺酸胺银杏内酯B对大鼠永久性局灶性脑缺血治疗时间窗的研究

采用大鼠永久性中动脉闭塞模型,研究甲磺酸胺银杏内酯B(代号:XQ-1H)对永久性局灶性脑缺血的治疗时间窗。通过观察中动脉闭塞造模后0.5,1,2,3hXQ-1H治疗给药(iv)对大鼠神经症状、脑含水量、脑梗死体积、组织形态学的影响,发现XQ-1H0.5h及1h治疗给药能使永久性局灶性脑缺血大鼠的神经行为明显改善,显著降低脑梗死率和含水量。通过测定脑组织内丙二醛(MDA)、乳酸(LD)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活力,显示XQ-1H0.5h及1h治疗给药,可以降低MDA及LD含量、升高SOD活力。结果表明,XQ-1H0.5及1h治疗给药对永久性局灶性脑缺血具有很好的保护作用。

延迟亚低温对自发性高血压大鼠永久性大脑中动脉闭塞作用的研究

目的建立自发性高血压大鼠(SHR)永久性大脑中动脉闭塞模型(pMCAO),观察亚低温对神经损伤的保护作用。方法将33只SHR随机分为①延迟2 h亚低温组[n=8,术后2 h给予(33±0.5)℃的全身亚低温];②延迟6 h亚低温组[n=9,术后6 h给予(33±0.5)℃的全身亚低温];③常温组(n=8,术后置于室温25℃);④假手术组(n=8,术中不插入线栓,术后置于室温25℃)。采用线栓法制作pMCAO模型。术后5 h,24 h,36 h对SHR进行神经行为学评分;并于术后36 h处死大鼠,制作脑冠状切片,尼氏染色后计算脑梗死体积、水肿程度;NeuN染色比较大鼠脑梗死周边和梗死核心区神经元的脱失。结果各组大鼠脑梗死后神经行为学评分差异无统计学意义。延迟2 h、6 h亚低温组的梗死体积分别较常温组减小23.75%(P<0.01)、18.72%(P<0.05);水肿程度减轻25.32%、21.52%(P<0.05)。神经元脱失情况:皮质梗死周边,延迟2 h、6 h亚低温组较常温组分别减少21.67%(P<0.01)、15.67%(P<0.05);而皮质梗死核心各手术组之间无明显差别。两亚低温组之间梗死体积、水肿程度及梗死周边神经元的脱失均无显著差异。结论亚低温治疗可以显著减小脑梗死体积和水肿程度。延迟6 h和延迟2 h亚低温治疗的效果无明显差异。

激光多普勒血流仪监测C57BL/6小鼠永久性大脑中动脉闭塞模型

目的评估激光多普勒血流仪监测C57BL/6小鼠永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型的可行性。方法 C57BL/6小鼠随机分为2组,假手术组和永久性MCAO组。线栓法制作永久性大脑中动脉闭塞模型,激光多普勒仪实时监测小鼠脑血流,术后神经功能学评分,24 h后2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色确定梗死体积。结果 MCAO组术前脑血流(186.78±62.50)PU,栓线插入成功后患侧脑血流降低到(25.80±7.66)PU,降低了90.4%。神经功能学评分在(2.48±0.36)分,脑梗死面积达39.79%。假手术组脑血流在基础值波动,未见降低;神经功能学评分为0分,未见脑梗死病灶。结论激光多普勒血流仪监测是一个很好的确定小鼠脑梗死模型成功与否的筛选方法。

梓醇上调局灶脑缺血大鼠缺血灶周围大脑皮质BDNF和TrkB蛋白表达

目的观察梓醇对局灶脑缺血大鼠缺血灶周围大脑皮质BDNF及其受体TrkB蛋白表达的影响,探讨梓醇促神经修复作用分子基础。方法 SD大鼠42只,随机分为假手术组、模型组、生理盐水组、梓醇低、中、高剂量治疗组(剂量分别为1、5、10 mg.kg-1)和胞磷胆碱(剂量为0.5 g.kg-1)对照组。开颅电凝右侧大脑中动脉制备局灶永久性脑缺血模型,造模后24 h,首次经腹腔注射梓醇或胞磷胆碱进行干预,每日1次,连续7 d。于造模后15 d断头取脑,制备脑片和脑组织匀浆,采用免疫荧光组织化学染色和Western blot检测缺血灶周围大脑皮质BDNF及其受体TrkB蛋白表达。结果 BDNF阳性细胞被Cy3标记,具有神经元的形态特征,胞质和突起呈现红色,细胞核未见红色荧光。缺血灶周围大脑皮质BDNF阳性细胞数模型组和生理盐水组均较假手术组明显增加(P<0.05),梓醇1、5、10 mg.kg-1剂量组均较模型组明显增加(P<0.05),且梓醇5、10 mg.kg-1剂量组明显高于胞磷胆碱组(P<0.05)。TrkB阳性细胞被FITC标记,具有神经元形态特征,胞质和突起呈现绿色,胞核未见绿色荧光。TrkB阳性细胞数模型组较假手术组有减少趋势,但差异无显著性(P>0.05);梓醇5 mg.kg-1剂量组较模型组和胞磷胆碱组明显增加(P<0.05)。Western blot检测结果与免疫荧光原位检测结果一致。结论梓醇上调局灶脑缺血大鼠缺血灶周围大脑皮质BDNF及其受体TrkB蛋白表达,有助于模型大鼠神经缺失功能恢复。

梓醇增强缺血灶周围大脑皮质神经元轴突芽生及突触新生

目的观察梓醇对局灶脑缺血大鼠缺血灶周围区大脑皮质(peri-infarct cortex,PIC)神经元轴突芽生及其形成突触的影响,揭示梓醇促神经修复作用的形态学基础。方法SD大鼠36只,随机分为假手术组、模型组、生理盐水组、梓醇低、中、高剂量组(剂量分别为1、5、10 mg.kg-1)和胞磷胆碱组(阳性药物对照组,剂量为0.5 g.kg-1)。开颅电凝右侧大脑中动脉制备局灶永久性脑缺血模型,造模后24 h,首次经腹腔注射梓醇或胞磷胆碱进行干预,每日1次,连续7 d。于造模后15 d断头取脑,采用免疫荧光双标组织化学染色技术检测PIC区生长相关蛋白-43(growth-associated protein,GAP-43)与突触素(synaptophysin,P38)共定位信号,了解梓醇对PIC区芽生轴突形成突触的影响;采用透射电镜结合体视学方法观察梓醇对PIC区神经毡内突触数密度(number density,Nv)和面密度(surface density,Sv)的影响,明确梓醇对突触重构的可能作用。结果免疫荧光双标组织化学染色显示,绿色荧光显示P38标记的突触前末端,红色荧光显示GAP-43表达阳性的芽生轴突,GAP-43/P38共定位呈现黄色,显示芽生轴突形成的突触末端。Pearson相关系数反映GAP-43/P38共定位频度,Pearson相关系数越大表明芽生轴突形成突触连接的数量越多。结果模型组和生理盐水组Pearson相关系数明显大于假手术组(P<0.05),提示脑缺血后存在自发性轴突芽生,并形成新的突触连接;梓醇各剂量组Pearson相关系数均比模型组明显增大(P<0.05),且梓醇中、高剂量组明显大于胞磷胆碱组(P<0.05),提示梓醇可促进PIC区芽生轴突形成突触连接,增强突触新生。突触超微结构分析显示,梓醇中剂量组PIC区神经毡内突触Nv和Sv较模型组和生理盐水组明显增加(P<0.05),但与胞磷胆碱组比较差异无显著性(P>0.05),提示梓醇对脑缺血后突触重构有明显促进作用。结论梓醇能促进局灶脑缺血大鼠PIC区神经元芽生轴突形成新的突触连接,增强突触结构可塑性。

梓醇对局灶性脑缺血大鼠感觉运动皮质轴突再生限制性微环境的影响

目的观察梓醇对大鼠局灶性脑缺血后对侧感觉运动皮质轴突再生限制性微环境的影响。方法 SD大鼠42只,随机分为假手术组、模型组、生理盐水组、梓醇低、中、高剂量治疗组(剂量分别为1、5、10 mg.kg-1)和胞磷胆碱(剂量为0.5 g.kg-1)对照组。制备局灶永久性脑缺血模型,造模后24 h,首次经腹腔注射梓醇进行干预,每天1次,连续7 d。于造模后15 d断头取脑,制备脑片和脑组织匀浆,采用免疫荧光组织化学染色和Western blot检测对侧感觉运动皮质Nogo-A及其受体NgR蛋白表达。结果 Nogo-A阳性细胞被Cy3标记,胞质和突起呈红色,细胞核未见红色荧光。假手术组可见少量Nogo-A阳性细胞,模型组Nogo-A阳性细胞数较假手术组明显增加(P<0.05);梓醇中、高剂量组Nogo-A阳性细胞数较模型组和胞磷胆碱组明显减少(P<0.05)。NgR阳性细胞被FITC标记,具有神经元形态特征,胞质和突起呈绿色,细胞核未见绿色荧光。假手术组可见少量NgR阳性细胞,模型组NgR阳性细胞较假手术组稍增加(P>0.05);梓醇呈剂量依赖性下调NgR表达,中、高剂量组NgR阳性细胞数均比模型组和胞磷胆碱组明显减少(P<0.05)。Western blot分析与免疫荧光原位检测结果一致。结论梓醇下调脑缺血大鼠感觉运动皮质Nogo-A及其受体NgR蛋白表达,有助于改善轴突再生限制性微环境。

梓醇促进局灶脑缺血大鼠皮质脊髓束芽生和重塑

目的观察梓醇对局灶脑缺血大鼠病灶对侧皮质脊髓束(corticospinal tract,CST)轴突芽生和重塑的影响。方法30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、生理盐水组、梓醇治疗组和胞磷胆碱对照组。开颅电凝右侧大脑中动脉,制备局灶永久性脑缺血模型,造模后24 h首次经腹腔注射梓醇(5 mg·kg-1)或胞磷胆碱(0.5 g·kg-1),每日1次,连续7d。采用黏贴物移除实验和足失误实验测试受累前肢(左前肢)功能状况;核磁共振(MRI)测量脑梗死体积;生物素化葡聚糖胺(biotinylated dextran amine,BDA)顺行示踪健侧CST,检测脊髓颈膨大区健侧CST越边至失神经支配侧的纤维数量,了解脊髓颈膨大区CST轴突重塑;免疫荧光双标脊髓颈膨大区BDA标记纤维与生长相关蛋白(growth-associatedprotein,GAP-43),检测BDA/GAP-43共定位信号,了解脊髓颈膨大区CST轴突芽生能力。结果造模后7、14、21和28d,梓醇组和胞磷胆碱组左前肢黏贴片移除时间均比模型组和生理盐水组明显缩短(P<0.05),左前肢失误率也较模型组和生理盐水组明显降低(P<0.05);其中,造模后28 d时,梓醇组左前肢感觉运动功能状况明显优于胞磷胆碱组(P<0.05)。造模后1和28 d,各组脑梗死体积差异无显著性(P>0.05)。造模后28 d,梓醇组脊髓颈膨大区健侧CST越边纤维占(8.5%±2.1%),较模型组(4.7%±1.3%)和胞磷胆碱组(5.5%±1.8%)明显增加(P<0.05);梓醇组脊髓颈膨大区BDA/GAP-43共定位信号明显强于模型组和胞磷胆碱组(P<0.05)。结论梓醇可增强缺血性脑卒中大鼠皮质脊髓束轴突芽生和重塑能力,有助于受累肢体感觉运动功能恢复。

白藜芦醇对脑梗死大鼠缺血半暗带内COX-2、IL-6表达及脑损伤程度的影响

目的探讨白藜芦醇预处理对永久性大脑中动脉闭塞（pMCAO）大鼠的神经保护作用。方法选择成年雄性sD大鼠，体质量为250g--300g，并将其随机分为假手术组、模型组、溶剂治疗组、白藜芦醇治疗组。于PMCAO）后24h处死大鼠，取出脑组织，用免疫组化、逆转录PCR（RTPCR）技术检测各组大鼠缺血半暗带内cycIoxygenase-2（Cox-2）、Interleukin-6（IL-6）的表达情况；并通过干湿重法和TTC染色检测脑组织含水量与脑梗死体积的变化。结果脑梗死发生后，缺血半暗带内COX-2、IL-6的表达水平短时间内明显增高，经白藜芦醇治疗后，其表达水平明显下降（P〈0．05），脑组织含水量以及梗死体积较治疗前亦有所明显降低（P〈0．05）。结论白藜芦醇可以通过抑制永久性大脑中动脉闭塞大鼠脑部炎症反应的程度，减轻梗死侧半球的损伤程度。

和厚朴酚衍生物HH-A通过与血红蛋白相互作用缓解动物模型脑缺血缺氧损伤

本研究旨在探讨一种新合成的和厚朴酚衍生小分子化合物HH-A在缺氧和永久性大脑中动脉闭塞条件下的抗缺氧以及减轻缺血缺氧所致脑损伤作用。利用大鼠低氧(11%氧含量)模型,给予HH-A 1 mg/kg(i.v.)和40 mg/kg(i.g.)以及和厚朴酚0.55 mg/kg,采用血气分析动脉血氧饱和度。利用大鼠永久性脑缺血模型,给予HH-A 0.25和1 mg/kg(i.v.),进行神经行为学评估,手术7天后取脑组织进行脑梗死体积测量。使用表面等离子共振技术进行HH-A靶蛋白钓取;利用缺氧探针评估脑组织缺氧程度;采用NeuN免疫荧光染色和H&E染色评估脑组织缺血缺氧损伤程度;分子对接试验分析预测HH-A与候选靶蛋白血红蛋白之间结合位点。结果显示,HH-A显著增加低氧状态下的血氧饱和度,并且显著减少脑组织的缺氧程度;在大鼠永久性脑缺血模型中,1 mg/kg HH-A显著减少神经行为评分,显著降低脑组织梗死体积,缓解脑组织的损伤;分子钓靶试验获得9个候选靶蛋白,分子对接试验进一步验证HH-A与血红蛋白之间具有很高的亲和力。研究表明,HH-A可能通过血红蛋白发挥抗缺氧作用,并且可以提高缺氧耐受性,减轻脑缺血缺氧损伤。

藏族药二十五味珍珠丸对缺血性脑卒中大鼠的保护作用及其机制研究

研究二十五味珍珠丸对缺血性脑卒中大鼠的保护作用。将90只4周龄的SPF级SD雄性大鼠随机平均分成6组(n=15):假手术组、模型组、尼莫地平组(12 mg·kg^(-1))、二十五味珍珠丸高剂量组(400 mg·kg^(-1))、二十五味珍珠丸中剂量组(200 mg·kg^(-1))、二十五味珍珠丸低剂量组(100 mg·kg^(-1))。模型组、尼莫地平组、二十五味珍珠丸组采用改良的线栓法制作永久性大脑中动脉闭塞模型(permanent middle cerebral artery occlusion model,PMCAO),假手术组不插入线栓。造模手术前尼莫地平组和二十五味珍珠丸组每天灌胃给药1次,连续24 d,并于造模前1 h给药1次,假手术组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃。测定存活大鼠的神经行为学评分;采用TTC法检测大鼠脑梗死体积;采用HE法观察大鼠脑组织病理学;采用ELISA检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)表达水平;采用RT-PCR检测大鼠脑组织中Notch 1、Jagged 1、Hes 1、Bcl-2 mRNA的表达;采用Western blot检测大鼠脑组织中凋亡相关因子caspase-3蛋白的表达;采用免疫荧光法检测大鼠脑组织血管内皮生长因子(VEGF)、CD34阳性细胞表达水平。二十五味珍珠丸低、中、高剂量组及尼莫地平组可显著降低永久性大脑中动脉闭塞大鼠神经行为学评分及脑梗死体积,减少神经细胞形态学改变,降低大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6表达,提高SOD、CAT活力,降低MDA水平。并且上调Notch 1、Jagged 1、Hes 1及Bcl-2 mRNA表达水平,降低caspase-3蛋白表达水平。同时治疗组中VEGF、CD34阳性细胞数增加,差异均有统计学意义。二十五味珍珠丸对缺血性脑卒中大鼠具有保护作用,其机制可能与抗炎、抗氧化、促进神经细胞增殖、抑制神经细胞凋亡及促进血管新生有关。