白藜芦醇对小鼠永久性局灶脑缺血损伤后血脑屏障的影响

目的:探讨白藜芦醇对小鼠永久性局灶脑缺血后血脑屏障损伤的影响.方法:采用线段血管内栓塞大脑中动脉(MCAO)获得小鼠脑缺血模型,静脉注射Evans b lue,观察白藜芦醇对缺血24 h后脑组织中Evans b lue外渗范围和含量的影响,同时应用RT-PCR技术检测缺血脑组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA水平.结果:白藜芦醇减轻了Evans b lue外渗范围[(101±15)mm3vs(149±17)mm3,P<0.01]和含量[(8.6±2.9)%vs(18.6±3.8)%,P<0.01],并能够抑制MMP-9的表达[(0.693±0.008)vs(1.537±0.037),P<0.01].结论:白藜芦醇可以抑制MMP-9活性,减轻血脑屏障的损害,其神经保护作用与此有关.

红毛五加叶水提取物对大鼠局灶性脑缺血损伤的预防作用

目的:研究红毛五加叶水提取物(acanthopanax giraldii leaves extract,AGLE)对大鼠局灶性脑缺血损伤的预防作用。方法 :将138只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、银杏叶片组(0.04 g/kg)及AGLE高、中、低剂量组(20、10、5 g/kg),每组23只,采用插线法阻塞大鼠大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)制备局灶性脑缺血模型;采用氯化三苯基四氮唑(2.3.5-Triphenytetrya-zolium chloride,TTC)染色法测定脑梗死范围;Longa法观测大鼠神经功能缺失评分;光镜下观察缺血侧大脑皮层病理学改变;分光光度法和硝酸还原酶法分别测定脑组织一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性及一氧化氮(nitric oxide,NO)含量。结果:模型组大鼠行为指标评分、脑梗死范围、NOS活性及NO含量均高于假手术组(P<0.01);缺血侧大脑皮层出现神经元结构不清,神经细胞肿胀,核固缩、溶解、破裂或消失等病理改变。与模型组比较,AGLE各剂量组大鼠行为指标评分、脑梗死范围、NOS活性及NO含量均降低(P<0.01)。与银杏叶片组比较,AGLE低剂量组改善大鼠行为指标评分更明显(P<0.01)。AGLE各剂量组脑梗死范围、NOS活性及NO含量与银杏叶片组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:AGLE对大鼠局灶性脑缺血损伤具有预防作用,其作用机制可能与降低脑组织中NOS活性及NO含量有关。

二甲双胍对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠神经保护作用机制研究

目的探讨二甲双胍对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠神经保护作用的机制。方法选择30只8周龄健康雄性SPF级SD大鼠为研究对象,按随机数字表法分为假手术组、大脑中动脉闭塞(MCAO)组及二甲双胍组(MCAO+Met组),每组各10只。在构建大鼠MCAO模型前3周,MCAO+Met组行10 mg/kg二甲双胍腹腔注射,假手术组及MCAO组不作任何药物处理,随后参考Longa线栓法制备大鼠MCAO模型,假手术组除不插入线栓,余下操作同MCAO组、MCAO+Met组。依据造模成功标准,在造模成功24 h后采用改良神经功能评分(mNSS)评定神经功能缺损程度;采用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定大鼠脑梗死体积;采用蛋白质印迹法测定磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达水平;采用酶联免疫吸附试验测定白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。比较3组大鼠mNSS评分、脑梗死体积百分数、PI3K、AKT、VEGF蛋白表达、IL-6、IL-1β及TNF-α水平。结果与假手术组比较,MCAO组及MCAO+Met组mNSS评分均更高,差异均有统计学意义(P<0.05);与MCAO组比较,MCAO+Met组mNSS评分更低,差异有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,MCAO组及MCAO+Met组脑梗死体积百分数均更高,差异均有统计学意义(P<0.05);与MCAO组比较,MCAO+Met组脑梗死体积百分数更低,差异有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,MCAO组及MCAO+Met组PI3K、AKT及VEGF蛋白表达水平均更低,差异均有统计学意义(P<0.05);与MCAO组比较,MCAO+Met组脑梗死体积PI3K、AKT及VEGF蛋白表达水平均更高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,MCAO组及MCAO+Met组IL-6、IL-1β及TNF-α水平均更高,差异均有统计学意义(P<0.05);与MCAO组比较,MCAO+Met组IL-6、IL-1β及TNF-α水平均更低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论局灶性脑缺血再灌注损伤应用二甲双胍有利于神经保护,其作用机制可能与激活PI3K/AKT/VEGF通路减轻炎症反应有关。

基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白通路探究丙泊酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能改善机制

目的:基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)通路探究丙泊酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能的改善机制。方法:采用改良线栓法缺血2 h,再灌注24 h建立大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型,将造模成功大鼠随机分为模型组和丙泊酚低(1 mg/ml)、中(2.5 mg/ml)、高剂量(5 mg/ml)组,各12只,另设含有12只大鼠的假手术组。分组后即开始给药,1次/d,共4周,末次给药12 h后,采用改良神经功能评分(mNSS)法进行神经缺损评分;采用TTC染色法检测脑梗死面积;HE、Nissl染色进行神经元细胞及尼氏小体形态学观察;Tunel法进行神经元细胞凋亡检测;Elisa法检测脑组织cAMP、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)含量;免疫荧光法检测脑组织环磷酸腺苷(cAMP)、p-PKA、p-CREB阳性细胞数及其蛋白共表达阳性细胞数;Western blot法检测脑组织PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量。结果:模型组大鼠比较假手术组大鼠的mNSS评分、脑梗死面积百分比显著增加(均P<0.05),HE染色和Nissl染色可见明显的神经元细胞损伤和尼氏小体破坏,脑组织cAMP、BDNF、NGF含量和PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量显著下降,模型组大鼠比较假手术组大鼠的cAMP、p-PKA、p-CREB阳性细胞数和蛋白共表达阳性细胞数也明显下降(均P<0.05)。与模型组比较,丙泊酚给药组大鼠mNSS评分、脑梗死面积百分比显著降低(均P<0.05),HE染色和Nissl染色可见神经元细胞损伤和尼氏小体破坏有不同程度改善,脑组织cAMP、BDNF、NGF含量和PKA、p-PKA、CREB、p-CREB蛋白表达量显著升高(均P<0.05),cAMP、p-PKA、p-CREB阳性细胞数及其蛋白共表达阳性细胞数均显著升高(均P<0.05)。结论:丙泊酚可能通过cAMP/PKA/CREB通路改善CIRI大鼠神经功能。

电针对局灶性脑缺血大鼠JAK2/STAT3通路、血管内皮生长因子的影响及其对神经保护作用机制的研究

目的观察电针“百会”“大椎”对局灶性脑缺血大鼠酪氨酸蛋白激酶2/信号转导和转录激活因子3(Janus kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)通路和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,探讨电针对局灶性脑缺血大鼠神经保护的作用机制。方法将36只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组,每组9只,采用Longa线栓法进行局灶性脑缺血模型复制,电针组模型复制4 h后予以电针治疗,共治疗7 d。比较各组大鼠模型复制后4 h和7 d的神经功能评分;Western blot法检测各组大鼠脑组织JAK2、磷酸化酪氨酸蛋白激酶2(phosphorylated Janus kinase 2,p-JAK2)、STAT3、磷酸化信号转导和转录激活因子3(phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3,p-STAT3)、VEGF蛋白表达水平;RT-PCR法检测各组大鼠脑组织JAK2、STAT3、VEGF mRNA表达水平。结果模型复制后4 h,电针组、模型组大鼠神经功能评分显著高于假手术组和正常组(P<0.05);与假手术组比较,模型组JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、VEGF蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),蛋白表达水平显著升高(P<0.05);JAK2、STAT3、VEGF mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,电针组7 d后神经功能评分显著降低(P<0.05);STAT3、VEGF、p-STAT3、JAK2、p-JAK2蛋白表达水平显著升高(P<0.05);JAK2、STAT3、VEGF mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。结论电针可能通过激活JAK2/STAT3通路、促进下游VEGF的表达发挥对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用。

补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠海马神经可塑性蛋白表达的影响

目的采用多模态磁共振成像观察补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠海马组织结构、血流灌注的影响,结合神经可塑性蛋白及糖代谢相关转运蛋白表达变化分析其影响海马神经可塑性的作用机制。方法制备右侧大脑中动脉栓塞致局灶性脑缺血大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、假手术+补阳还五汤组、模型组、模型+补阳还五汤组,假手术组和模型组予生理盐水灌胃30 d,假手术+补阳还五汤组和模型+补阳还五汤组予补阳还五汤灌胃30 d。T2 mapping成像观察海马组织结构,动脉自旋标记成像检测海马血流灌注情况,Western blot检测海马组织神经可塑性相关蛋白突触素(SYN)、生长相关蛋白-43(GAP-43)、葡萄糖转运蛋白(GLUT)和单羧酸转运蛋白(MCT)表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠右侧和左侧海马T2弛豫时间均显著增加(P<0.01,P<0.001),右侧海马血流量显著降低(P<0.05),右侧海马组织SYN、GAP-43、MCT4、MCT2蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.001),双侧海马组织GLUT1、GLUT3蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001);与模型组比较,模型+补阳还五汤组大鼠右侧海马T2弛豫时间显著减少(P<0.05),右侧海马血流量显著升高(P<0.05),双侧海马组织SYN、GAP-43、GLUT1、GLUT3蛋白表达均显著升高(P<0.01,P<0.001),右侧海马组织MCT4、MCT2蛋白表达显著升高(P<0.01,P<0.001)。结论补阳还五汤减轻局灶性脑缺血大鼠海马损伤可能与改善其血流灌注、上调神经可塑性相关蛋白、促进海马轴突再生和突触重塑、调节神经细胞能量代谢有关。

中药干预神经递质治疗局灶性脑缺血研究进展

神经递质调控是研究局灶性脑缺血损伤机制的重要内容,近年来研究发现局灶性脑缺血损伤发生后神经递质发生变化,与钙超载、炎症反应、氧化应激等病理过程相互关联,相互影响,通过神经、内分泌、免疫等多种途径干预局灶性脑缺血损伤的发生、发展、预后。中医药历史悠久,源远流长,中药及其复方具有多成分、多靶点、不良反应小等特点,适用于局灶性脑缺血损伤复杂多样的病理机制,被广泛用于神经系统疾病的治疗。近年来研究发现中药可以调控神经递质及受体的传递,对于局灶性脑缺血的治疗具有重要的意义,其内在机制也成为研究热点。文章以神经递质的分类为主线,系统梳理了不同分类的神经递质与局灶性脑缺血损伤的相关性,分析了中药对其的影响,为局灶性脑缺血后神经递质变化的相关研究提供思路,对中医药防治缺血性脑损伤的前景进行展望。

基于MyD88/ERK通路及NF-κB核移位探讨大黄素对局灶性脑缺血大鼠的作用及机制

目的基于髓样分化因子88(MyD88)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路及核因子κB(NF-κB)核移位探讨大黄素对局灶性脑缺血大鼠的作用及机制。方法将SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、大黄素组,每组6只,采用大脑中动脉栓塞法建立大脑中动脉短暂性闭塞模型(tMCAO)。大黄素组大鼠于造模前72、48、24 h,分别给予40 mg·kg-1大黄素灌胃给药,共3次。造模结束后24 h,对大鼠进行神经功能评分;采用TTC染色法检测脑组织梗死灶面积;HE染色法观察脑组织形态变化;RT-qPCR法检测脑组织中MyD88、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平;Western Blot法检测脑组织中MyD88、ERK、p-ERK、TNF-α蛋白表达水平;免疫荧光法检测脑组织中NF-κB蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分显著升高(P<0.01),脑梗死面积显著增加(P<0.01);缺血半暗带皮质区中出现细胞坏死,细胞形态异常,胞核破碎萎缩,细胞数量明显降低;脑组织中MyD88、TNF-αmRNA表达水平显著升高(P<0.01,P<0.001),MyD88、p-ERK/ERK、TNF-α蛋白表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001),NF-κB入核细胞数占比显著升高(P<0.001)。与模型组比较,大黄素组大鼠的神经功能评分明显降低(P<0.05),脑梗死面积明显缩小(P<0.05);缺血半暗带皮质区的神经元数量及形态得到一定程度恢复;脑组织中MyD88、TNF-αmRNA表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),MyD88、p-ERK/ERK、TNF-α蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),NF-κB入核细胞数占比显著降低(P<0.001)。结论大黄素对局灶性脑缺血大鼠具有预防保护作用,可能与其抑制MyD88活化、ERK磷酸化及NF-κB核移位,进而下调炎症级联反应及TNF-α等促炎因子分泌,从而发挥抗炎作用有关。

西格列汀对局灶性脑缺血再灌注小鼠血-脑脊液屏障通透性的影响及抗凋亡作用

目的研究西格列汀(SIT)在非糖尿病的小鼠脑缺血再灌注(I/R)时的神经保护作用。方法采用大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,脑缺血60 min后实施再灌注。SIT按低剂量(40 mg·kg^(-1))、高剂量(80 mg·kg^(-1))在手术前口服给药3d,术后再次给药。术后24 h检测小鼠神经功能、梗死体积和脑水肿,通过Western blot评估Bcl-2和Akt的蛋白表达,RT-qPCR评估Bax和Bcl-2的转录水平。SIT对血-脑脊液屏障(BCFB)通透性的影响通过伊文思蓝渗出和Claudin-5的蛋白表达来测量。结果本研究结果表明,SIT可减轻CD-1小鼠大脑中动脉栓塞再灌注24h后的肢体功能障碍,减少脑梗死体积,减轻脑水肿。SIT显著增加Bcl-2和磷酸化Akt的蛋白表达水平,下调Bax、上调Bcl-2的基因表达。减少小鼠脑组织伊文思蓝渗出并增加Claudin-5的蛋白表达水平(^(均)P<0.05)。结论SIT在非糖尿病小鼠的脑I/R急性期,降低神经功能缺损评分、减少脑梗死体积、保护BCFB,具有脑保护作用,机制可能与抗凋亡有关。这些发现为急性缺血性脑血管病的治疗提供新的策略。

TREM2通过激活Th17细胞调节神经免疫炎症并保护局灶性脑缺血再灌注损伤

目的:探讨髓细胞触发受体2(TREM2)调节局灶性脑缺血再灌注损伤和神经免疫炎症的作用和机制。方法:对小鼠的大脑行中动脉闭塞术(MCAO)以建立局灶性缺血再灌注损伤模型,分为假手术组(sham组)和MCAO组(n=6)。小干扰RNA(siRNA)构建TREM2的沉默质粒(TREM2 siRNA组),构建TREM2过表达质粒(pcDNA-TREM2组),以及各自的阴性对照(CON siRNA)组和pcDNA组分别感染MCAO小鼠。采用IL-17抑制剂苏金单抗(SEC)联合pcDNA-TREM2处理MCAO组(MCAO+pcDNA-TREM2+SEC组)。qPCR和Western blot检测TNF-α、IL-1β、IL-17和TREM2表达;免疫荧光法检测脑部TREM2定位;TTC染色评价脑损伤程度;流式细胞术检测Th17细胞比例。结果:TREM2表达于小胶质细胞,且MCAO组TREM2表达均增加(P<0.05)。沉默TREM2诱导神经元细胞凋亡(F=206.971,P=0.001)、梗死体积和神经功能障碍评分升高(均P<0.05),TNF-α和IL-1β的mRNA水平升高,IL-10降低(均P<0.05)。过表达TREM2导致TNF-α、IL-1β表达降低,而IL-10和IL-17表达及Th17阳性细胞比例升高(均P<0.05)。与MCAO+pcDNA-TREM2组比较,MCAO+pcDNA-TREM2+SEC组的Th17细胞比例降低、神经元百分比降低,脑损伤程度增加,TNF-α、IL-1β表达升高,IL-10和IL-17表达降低(均P<0.05)。结论:过表达TREM2可通过激活Th17细胞并抑制神经炎症从而保护局灶性脑缺血再灌注损伤。

新生儿脑白质损伤时空分布规律的病灶概率映射研究

目的采用基于T1WI的病灶映射方法刻画新生儿局灶性脑白质损伤(punctate white matter lesions,PWML)的好发区域并探究其时空分布规律。材料与方法回顾性纳入PWML新生儿94例,其中轻度损伤60例(早产/足月:24/36),重度损伤34例(早产/足月:20/14)。基于T1WI手动标记病灶,与约翰霍普金斯大学新生儿T1WI模板配准后叠加图谱,最终生成PWML概率映射图并计算病灶在不同区域的分布概率。对轻重度PWML组间以及不同分组内早产与足月儿各脑叶病灶体积进行比较。结果轻度PWML的分布均以颞顶叶为主(病灶体积于颞顶叶>额叶>枕叶,P<0.008),尤其是丘脑后辐射、角回及缘上回;早产儿损伤范围较足月儿增加,且向额叶延伸。重度PWML主要分布于额颞顶叶(病灶体积于额颞顶叶>枕叶,P<0.008),早产与足月损伤分布范围较为一致,共同累及的区域包括丘脑后辐射、角回及上放射冠。结论基于T1WI的病灶概率映射于脑区水平细化了不同程度PWML病灶的时空分布特征,为深入理解PWML的病理生理机制及预后评估提供了解剖基础。

JAK1/STAT1信号通路在白藜芦醇减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用机制

目的探究白藜芦醇(Res)基于Janus激酶(JAK)1/信号转导与转录激活子(STAT)1信号通路减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法采用大脑中动脉栓塞(MCAO)法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,并将大鼠随机分为假手术(Sham)组、脑缺血再灌注(I/R)组、Res低剂量组(10 mg/kg)、Res中剂量组(30 mg/kg)和Res高剂量组(60 mg/kg)各8只,观察各组神经功能缺失评分、脑梗死体积、脑水肿率,并以RT-聚合酶链反应(PCR)检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3 mRNA表达水平,以Western印迹检测Bcl-2、Bax、caspase-3和JAK1、STAT1、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达水平。结果I/R组神经功能缺失评分显著高于Sham组,脑梗死体积、脑水肿率显著大于Sham组,阳性神经元数量显著多于Sham组,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著低于Sham组,Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平显著高于Sham组,p-JAK1、p-STAT1蛋白表达水平显著高于Sham组(均P<0.05);予以10、30、60 mg/kg剂量Res处理后,Res低剂量组与I/R组相比无明显变化(P>0.05),Res中、高剂量组神经功能缺失评分显著低于I/R组,脑梗死体积、脑水肿率显著小于I/R组,阳性神经元数量显著少于I/R组,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著高于I/R组,Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平显著低于I/R组,p-JAK1、p-STAT1蛋白表达水平显著低于I/R组(均P<0.05),各组JAK1、STAT1蛋白表达水平相比无明显变化(P>0.05)。结论Res处理可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,其机制可能是通过抑制JAK1/STAT1信号通路,降低其磷酸化水平,进而影响凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3表达有关。

栀子提取物对局灶性脑缺血损伤模型大鼠凝血功能及脑血管内皮功能的影响

目的:观察栀子提取物(GE)对局灶性脑缺血损伤模型大鼠凝血功能及脑血管内皮功能的影响。方法:采集新鲜干燥栀子,制备GE。将48只SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(model组)、GE高剂量组(GE-H组)、GE低剂量组(GE-L组),每组12只。构建大鼠局灶性脑缺血损伤模型,术后采用Longa神经学评分对符合局灶性脑缺血损伤标准大鼠进行实验。采用Longa神经学评分标准比较用药前后神经功能改善情况;采用断尾法及玻片法检测大鼠凝血时间(CT)和出血时间(BT);凝血酶活性荧光检测凝血酶时间(TT)及凝血酶含量,观察大鼠凝血因子Ⅹa含量,判断大鼠凝血功能变化情况;检测大鼠大脑动脉环(Willis)一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、血管壁血栓素A_(2)(TXA_(2))、血浆前列环素I_(2)(PGI_(2))、内皮组织纤维溶酶原激活物(t-PAT)及其抑制剂(PAI)活性,判断大鼠脑血管内皮功能变化情况;苏木精-伊红(HE)染色法检测各组大鼠脑部损伤情况。结果:sham组大鼠脑组织正常,与sham组比较,model组CT、BT、TT缩短,t-PAT、PGI_(2)、NO、eNOS降低,凝血酶生成及内源性、外源性凝血因子Ⅹa生成、PAI、TXA_(2)升高(P<0.05),且大鼠脑组织出现局灶性脑缺血损伤。与model组比较,GE-H组和GE-L组CT、BT、TT延长,t-PAT、PGI_(2)、NO、eNOS升高,凝血酶生成及内源性、外源性凝血因子Ⅹa生成、PAI、TXA_(2)降低(P<0.05),脑组织损伤情况较model组明显好转。与sham组比较,model组治疗后Longa神经学评分升高;与model组比较,GE-H组和GE-L组Longa神经学评分降低(P<0.05)。结论:GE作用可延长CT、BT、TT,降低凝血酶和凝血因子含量,增强NO、eNOS活性,提高t-PAT、PGI_(2)表达同时抑制PAI、TXA_(2)表达,可改善局灶性脑缺血损伤凝血功能,恢复脑血管内皮功能。

永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型大鼠脑内突触相关蛋白表达的免疫组织化学观察

目的观察永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型大鼠脑缺血发作后2 d、7 d脑内突触相关蛋白表达的变化。方法制作大鼠永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型。缺血动物术后随机分为缺血2 d组、缺血7 d组,另设假手术组。在术后2 d、7 d 2个时间点采用HE染色观察动物神经病理学改变,同时采用免疫组织化学法观察动物的缺血侧脑组织突触素-I(synapsin-I)、突触后致密蛋白95(PSD-95)、α-突触核蛋白(α-synuclein)表达情况。结果与假手术组相比,缺血后,模型动物神经元大量变性坏死,数目减少,排列散乱。缺血后2 d,synapsin-I在CA1区、CA3区、皮层表达显著减少(P<0.05或P<0.01),PSD-95在CA1区、皮层表达显著减少(P<0.05或P<0.01),α-synuclein在CA1区神经元产生显著积聚(P<0.01);缺血后7 d,synapsin-I在CA1区、皮层表达仍显著降低(P<0.01),PSD-95在CA1区、皮层表达显著减少(P<0.05或P<0.01),α-synuclein在CA1、CA3、皮层表达显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论 pMCAO模型大鼠在脑缺血发生后,神经突触有关蛋白的表达显著改变,并随缺血后不同时间点表达情况不同,这可能与神经元突触重塑有关。突触相关蛋白的表达与缺血损伤程度密切相关。

当归补血汤对大鼠永久性局灶性脑缺血后脑源性促红细胞生成素的影响

目的:观察当归补血汤对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用及对脑源性促红细胞生成素(erythropoie-tin,EPO)表达的影响。方法:将动物随机分为假手术组、模型组和给药组,采用改良线栓法建立大鼠永久性局灶性脑缺血模型,按缺血时间每组分为4h、1d和7d亚组,给药组灌胃当归补血汤。在缺血相应时间后取材,行甲苯胺蓝染色,观察组织病理变化;行TTC染色,计算脑梗死体积百分比;行Fluoro-Jade B(FJB)染色,计算半暗带阳性细胞数;行EPO免疫荧光染色,计算半暗带阳性细胞数。结果:与模型组相比,当归补血汤可以减轻缺血脑组织的病理改变,降低缺血7d亚组脑梗死体积百分比(P<0.05),减少缺血1d、7d亚组半暗带FJB阳性细胞数(P<0.05,P<0.01);给药组缺血1d、7d亚组半暗带EPO阳性细胞数明显多于模型组(P<0.01)。结论:当归补血汤对永久性局灶性脑缺血大鼠具有一定的保护作用,可能与增强脑缺血后脑源性EPO表达有关。

甲磺酸胺银杏内酯B对大鼠永久性局灶性脑缺血治疗时间窗的研究

采用大鼠永久性中动脉闭塞模型,研究甲磺酸胺银杏内酯B(代号:XQ-1H)对永久性局灶性脑缺血的治疗时间窗。通过观察中动脉闭塞造模后0.5,1,2,3hXQ-1H治疗给药(iv)对大鼠神经症状、脑含水量、脑梗死体积、组织形态学的影响,发现XQ-1H0.5h及1h治疗给药能使永久性局灶性脑缺血大鼠的神经行为明显改善,显著降低脑梗死率和含水量。通过测定脑组织内丙二醛(MDA)、乳酸(LD)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活力,显示XQ-1H0.5h及1h治疗给药,可以降低MDA及LD含量、升高SOD活力。结果表明,XQ-1H0.5及1h治疗给药对永久性局灶性脑缺血具有很好的保护作用。

产气柯林斯菌联合丁酸梭菌干预局灶性缺血性脑卒中小鼠的实验研究

目的:探讨产气柯林斯菌及丁酸梭菌联合干预局灶性缺血性脑卒中小鼠模型的疗效。方法:48只无特定病原体(SPF)级8~10周龄C57BL/6J雄性小鼠,通过颈外动脉插线法建立局灶性缺血性脑卒中小鼠模型,随机分为对照组(12只)、生理盐水组(9只)、产气柯林斯菌悬液组(9只)、丁酸梭菌悬液组(9只)、混合菌悬液组(9只),生理盐水组、产气柯林斯菌悬液组、丁酸梭菌悬液组、混合菌悬液组每日分别给予生理盐水、产气柯林斯菌悬液、丁酸梭菌悬液、混合菌悬液灌胃1次,灌胃容积为0.1~0.2 mL/10 g,最大容积不超过0.8 mL。分别于建模成功后2 h、1周、2周观察各组美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分及测定小鼠的脑卒中病灶体积,同时检测血清白细胞介素(IL)-1β及IL-6的含量并分析其与脑卒中病灶体积的相关性。结果:与对照组及生理盐水组比较,建模成功后2周,产气柯林斯菌悬液组、丁酸梭菌悬液组、混合菌悬液组NIHSS评分及IL-1β、IL-6水平均降低(P<0.05);与对照组及生理盐水组比较,在建模成功后1周,混合菌悬液组小鼠脑卒中病灶体积就已开始减小(P<0.05),建模成功后2周,产气柯林斯菌悬液组、丁酸梭菌悬液组、混合菌悬液组小鼠脑卒中病灶体积均减小(P<0.05)。IL-1β、IL-6浓度与小鼠脑卒中病灶体积呈正相关(r值分别为0.547,0.795,P<0.001)。结论:产气柯林斯菌及丁酸梭菌联合干预后可保护局灶性缺血性脑卒中小鼠的神经功能、缓解小鼠脑部炎症、减小小鼠脑卒中病灶体积。

电针联合康复训练对局灶性脑缺血大鼠NLRP3炎症通路的影响

目的观察电针联合康复训练对局灶性脑缺血大鼠NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3)炎症通路的影响,探讨电针联合康复训练抑制大鼠脑缺血炎症反应的作用机制。方法采用线栓法制备大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将45只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、康复训练组、电针联合康复训练组,每组9只。假手术组和模型组不予治疗,电针组电针大鼠“百会”“大椎”穴,康复训练组进行导向性跑台训练,电针联合康复训练组同时予以电针和康复训练干预。比较模型复制完成4 h、7 d后大鼠神经功能评分;苏木精-伊红染色观察缺血侧皮质病理学变化;酶联免疫吸附法检测缺血侧皮质白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)水平;免疫荧光法检测缺血侧皮质中NLRP3、Caspase-1阳性表达水平;析因分析NLRP3、Caspase-1阳性表达水平和IL-1β、IL-18水平的交互性作用。结果模型复制后4 h,各组大鼠的神经功能得分均显著高于假手术组(P<0.05);与模型组比较,电针训练组、康复组、电针联合康复训练组7 d后评分均显著降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,电针组、康复训练组、电针联合康复训练组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达水平显著降低(P<0.05);与电针组比较,电针联合康复训练组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达水平显著降低(P<0.05);与康复训练组比较,电针联合康复训练组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达水平均显著降低(P<0.05)。析因分析提示,电针与康复训练对缺血侧NLRP3通路相关因子的表达具有协同交互作用(P<0.05)。NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18均受正向的协同交互作用影响,导致各自水平较之单因素影响而下降更显著。结论电针联合康复训练可通过抑制NLRP3炎症通路,增强抗炎能力,改善神经细胞炎症损伤,达到神经保护作用。

丹参酮ⅡA对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :观察丹参酮ⅡA对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,以水溶性的丹参酮ⅡA纳米制剂灌胃给药 ,观测其对脑缺血大鼠的神经行为、脑梗塞范围和脑含水量以及脑组织SOD活力、MDA含量和NO水平的影响。结果 :丹参酮ⅡA(2 5mg/kg)能使脑缺血大鼠的神经行为明显改善 ,脑梗塞范围和脑含水量显著降低 ;丹参酮ⅡA亦能拮抗脑缺血再灌注引起的SOD活力的下降及MDA含量的升高 ,并使脑组织NO水平显著下降。结论 :丹参酮ⅡA对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有很好的保护作用。

局灶性脑缺血再灌注损伤后c-fos表达及高压氧的治疗作用

目的 探讨高压氧 (HBO)对大鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤 (IR)的影响。方法 应用鼠脑中动脉 (MCA)栓塞方法 ,造成局灶性脑缺血模型 ,利用免疫组织化学和病理组织学方法 ,观察了MCA阻塞 1h ,再灌注 4、11、2 3、71h脑血管渗漏面积、神经元坏死程度、中性白细胞浸润及c -fos癌基因表达的变化 ,应用HBO分别治疗 1、2、3、5次后观察各时间点上述指标的变化。结果 ①常压纯氧组和IR组相比血管渗漏面积范围、神经元损伤程度无明显差异 ;而HBO组和IR组相比血管渗漏面积和神经元损伤数目在再灌注 71h(治疗 5次后 )分别减少了 12 2 8% (视交叉平面 )和每 5个高倍 (× 4 0 0 )视野 11 36个 (视前区 )、8 94个 (纹状体内侧区 )、14 2 5个 (皮层区 ) ,两组间存在显著性差异 (P <0 0 5 )。②中性白细胞在MCA阻塞后 5h出现 ,2 4h达高峰 ,以后逐渐减少。HBO治疗后 5h即开始降低 (P <0 0 5 )。 12～ 2 4h明显降低 ,峰值减少幅度最大 (P <0 0 1)。吸 10 0 %纯氧组与IR组相比无显著差异。③缺血后c-fos原癌基因在梗死区皮层、纹状体、视前区均有明显表达 ,持续 12～ 2 4h后开始减弱 ,72h基本消失。HBO治疗后 ,各时间点c -fos癌基因在上述区域的表达均明显减弱。结论 HBO可明确缩小大鼠急性局灶性IR损伤的血管渗?