天麻提取物改善永久性脑缺血模型大鼠神经功能俢复的研究

目的:参照STAIR技术标准,进行天麻提取物(GE2-1)促永久性脑缺血(pMCAO)模型大鼠神经功能俢复的研究。方法:线栓法复制大鼠pMCAO模型,分别于术后连续给予GE2-1至28 d,于造模后7,14,21,28 d,以行为学变化、脑组织病理改变(HE染色)和神经元损伤程度(Nissl染色)为主要观察指标,评价GE2-1改善缺血性脑卒中预后的作用,为其药效学成药性提供实验依据。结果:GE2-1干预14 d后能明显改善pMCAO模型大鼠的神经功能缺失症状,降低行为学评分,并能增加pMCAO模型大鼠脑组织的神经细胞尼氏体数量、减轻脑组织缺血病理损伤程度;在急性期给予GE2-1也未见其出血风险。结论:GE2-1可促进pMCAO模型大鼠恢复期神经功能的修复,具有改善缺血性脑卒中预后的作用。

Wistar大鼠永久性局灶性大脑中动脉阻断脑缺血新模型的建立

在Ｗｉｓｔａｒ大鼠用改良的开颅方法两点阻断大脑中动脉，建立一个新的永久性局灶性脑缺血模型（ＰＭＣＡＯ）。通过大鼠脑梗塞后神经功能状况的观察，明胶－墨汁灌注、ＴＴＣ染色计算机图像分析及病理形态学的方法对模型进行研究评价。Ｗｉｓｔａｒ大鼠大脑中动脉阻断后２４ ｈ，神经功能为２级；模型组梗塞面积稳定，占对侧面积５７±５％，其梗塞灶位于脑皮质和纹状体外侧；病理形态学表现为典型的缺血性改变。结果表明，用本方法阻断大脑中动脉，阻断确切，梗塞灶的大小、位置恒定。这一模型为局灶性脑缺血机制的研究以及治疗药物的疗效观察提供了一个可重复、稳定可靠的动物模型。

永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型大鼠脑内突触相关蛋白表达的免疫组织化学观察

目的观察永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型大鼠脑缺血发作后2 d、7 d脑内突触相关蛋白表达的变化。方法制作大鼠永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型。缺血动物术后随机分为缺血2 d组、缺血7 d组,另设假手术组。在术后2 d、7 d 2个时间点采用HE染色观察动物神经病理学改变,同时采用免疫组织化学法观察动物的缺血侧脑组织突触素-I(synapsin-I)、突触后致密蛋白95(PSD-95)、α-突触核蛋白(α-synuclein)表达情况。结果与假手术组相比,缺血后,模型动物神经元大量变性坏死,数目减少,排列散乱。缺血后2 d,synapsin-I在CA1区、CA3区、皮层表达显著减少(P<0.05或P<0.01),PSD-95在CA1区、皮层表达显著减少(P<0.05或P<0.01),α-synuclein在CA1区神经元产生显著积聚(P<0.01);缺血后7 d,synapsin-I在CA1区、皮层表达仍显著降低(P<0.01),PSD-95在CA1区、皮层表达显著减少(P<0.05或P<0.01),α-synuclein在CA1、CA3、皮层表达显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论 pMCAO模型大鼠在脑缺血发生后,神经突触有关蛋白的表达显著改变,并随缺血后不同时间点表达情况不同,这可能与神经元突触重塑有关。突触相关蛋白的表达与缺血损伤程度密切相关。

改良永久性线栓法制作大鼠大脑中动脉梗阻模型的探讨

目的 研究改良线栓法制作大脑中动脉梗阻(MCAO)大鼠模型。方法将20只SD大鼠分为Zea Longa组(A组)、改良线栓法组(B组),并对其造模手术时间、梗死体积、神经功能缺损评分进行比较。结果改良永久性线栓法制作大鼠MCAO模型所用时间与Zea Longa线栓法所需时间比较差异具有统计学意义(P<0.05),梗死体积、神经功能缺损评分两者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论改良永久性线栓法能减少造模时间,提示其梗死体积、神经功能缺损评分,差异无统计学意义(P>0.05),均提示其造模成功。

1.5T磁共振成像可有效监测缺血性脑卒中大鼠模型不同时期的颅脑病变动态

目的评估临床医用1.5T磁共振成像技术在不同时间点(6 h、3 d、5 d、7 d、14 d)对急性缺血性脑卒中大鼠模型颅脑病变成像的可行性及其影像学特征变化。方法随机选择健康雄性SD大鼠10只(10~12周龄),通过线拴法建立永久性SD大鼠的大脑中动脉阻塞模型,使用医用1.5T MR成像仪在不同时间点(6 h、3 d、5 d、7 d、14 d)对大脑中动脉阻塞模型大鼠进行T1WI、T2WI、T2 FLAIR、DWI成像扫描,观察不同分期梗死大鼠脑磁共振图像形态及信号强度变化。结果1.5T MR成像仪所作DWI图像可以用于诊断大鼠超急性期脑梗死,并直观表现梗死程度和范围;模型鼠脑梗死病灶在不同分期呈现不同的影像学改变,随着时期进展,常规核磁序列呈现的大鼠梗死病灶信号强度及病灶形态有所改变。结论临床医用1.5T磁共振成像技术能够有效监测不同时间点缺血性脑卒中大鼠模型的颅脑病变动态变化,特别是DWI序列在超急性期梗死诊断中表现出色,为进一步的临床研究和治疗决策提供了有价值的影像学依据。

大鼠永久性脑缺血后脑内Nestin的表达变化

目的 研究永久性脑缺血大鼠脑内巢蛋白(neuro epithelial stem cell prote,Nestin)的表达变化,探讨脑缺血后神经干细胞的增生、迁移和分化规律。方法 采用微创开颅法复制大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,分为正常对照组、假手术组和脑缺血组;假手术组和脑缺血组又分为术后1d、2d、3d、1周、2周、3周和4周共7个亚组,抗Nestin抗体和抗Nestin/胶纸原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)抗体分别进行免疫组化单标和免疫荧光双标染色。结果 正常对照组和假手术组仅在部分血管内皮、侧脑室室管膜下区(subventricular zone,SVZ)及第三脑室周围见极少量的Nestin阳性表达,阳性细胞呈椭圆形或不规则形,体积小,突起短少。脑缺血后Nestin阳性细胞明显增多,体积变大,呈多突起的星形,且大部分阳性细胞与星形胶质细胞的标志物GFAP共表达;增生的阳性细胞从缺血侧SVZ梯度式迁往梗死灶边缘,于缺血后3d达到增生高峰,之后增生能力逐渐下降,缺血后2周,缺血侧SVZ的Nestin阳性细胞数及吸光度值已回落到正常水平;缺血4周后,梗死灶周围的阳性细胞也基本消失。结论 大鼠永久性脑缺血后激活了SVZ的Nestin阳性细胞一过性增生、迁往梗死灶周围并分化为星形胶质细胞,可能对缺血损伤后的脑组织起到修复作用。

β-1,3-半乳糖基转移酶2对脑缺血损伤模型小鼠脑损伤的作用及其机制

目的探讨β-1,3-半乳糖基转移酶2(B3galt2)对脑缺血损伤模型小鼠脑损伤的作用及其机制。方法将成年雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(Sham组)、大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型组、MCAO模型+慢病毒载体对照组(LV-GFP组)、MCAO模型+慢病毒载体过表达B3galt2组(LV-B3galt2组),每组6只。各组小鼠于脑缺血24 h后进行神经功能缺损评分和旋转棒实验,采用2,3,5-三氨基苯甲四氮唑染色测定脑梗死体积,采用尼氏染色法观察各组小鼠脑缺血半影区神经元数量,检测各组小鼠脑组织中氧化应激相关因子水平。结果与Sham组比较,MCAO模型组小鼠脑梗死体积增大,神经功能缺损明显(P<0.05),脑缺血区神经元数量明显减少,活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)水平明显升高(均P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)水平明显降低(均P<0.05);与MCAO模型组比较,LV-B3galt2组小鼠脑梗死体积减小,神经功能明显改善(P<0.05),脑缺血区神经元数量明显增加,ROS和MDA水平明显降低(均P<0.05),SOD和GSH水平明显升高(均P<0.05)。结论B3galt2过表达可以减轻脑缺血损伤模型小鼠脑损伤,其作用机制可能是通过抑制氧化应激反应实现的。

精胺后处理上调线粒体自噬保护脑缺血/再灌注损伤小鼠模型的分子机制研究

目的 探讨精胺后处理保护脑缺血/再灌注损伤(I/RI)小鼠模型的疗效及其分子机制。方法 60只6~8 w龄C57BL小鼠随机分为6组(每组10只):(1)对照(Control)组;(2)假手术(Sham)组;(3)模型(MCAO)组;(4)模型+精胺治疗(MCAO+Spm)组;(5)MCAO+Spm+Adv shRNA-Drp-1组;(6)MCAO+Spm+Adv shRNA-NT组。构建大脑中动脉闭塞(MCAO)小鼠模型。TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)染色脑切片测定脑梗死体积。尼氏(Nissl)染色脑组织切片测定神经元死亡情况。ELISA测定活性氧自由基(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。腺病毒转染敲低脑组织动态相关蛋白-1 (Drp-1)。Western blot测定脑组织Drp-1、B淋巴细胞瘤基因-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)、PTEN诱导激酶1(PINK1)和自噬相关蛋白(Parkin-1)的表达情况。结果 与Sham组相比,MCAO组脑梗死体积所占百分比升高(P<0.05),Nissl阳性细胞所占百分比降低(P<0.05),ROS和MDA水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),Drp-1、Bax、PINK1和Parkin-1的表达水平升高(P <0.05),Bcl-2表达水平降低(P<0.05)。与MCAO组相比,MCAO+Spm组脑梗死体积所占百分比降低(P<0.05),Nissl阳性细胞所占百分比增多(P <0.05),ROS和MDA水平降低(P <0.05),SOD水平升高(P <0.05),Drp-1、Bcl-2、PINK1和Parkin-1的表达水平升高(P<0.05),Bax的表达水平降低(P<0.05)。与MCAO+Spm组相比,MCAO+Spm+Adv shRNA-Drp-1组Drp-1和Bax表达水平降低,Bcl-2、PINK1和Parkin-1的表达水平升高(P <0.05)。结论 Spm后处理通过Drp-1上调线粒体自噬发挥保护I/RI损伤小鼠模型的功效。

大鼠永久性脑缺血后白细胞介素-1β表达的研究

目的 探讨大鼠永久局灶性脑缺血后皮质白细胞介素-1β(IL-1β)基因的表达变化规律及其机制。方法 采用RT-PCR方法观察大鼠大脑中动脉(WCA)线栓闭塞后不同时相MCA供血区皮质及对侧皮质IL-1β基因的表达，同时用ELISA法测定相同时相IL-1β蛋白的含量。结果 缺血侧IL-1β mRNA在各缺血时间点皆有表达，缺血1h即有明显表达(0.34±0．05)，此后表达逐渐增强，缺血24h达高峰，密度比值为1．23±0．15。对应时相IL-1β值(pg／g)，缺血3h明显提高(384．1±57．7)，缺血48h达高峰(802.3±61．7)，缺血5d仍在高水平(753．9±46．5)。结论 局灶性脑缺血时IL-1βmRNA表达一过性增高，IL-1β蛋白量平行延后增高，且持续时间较长，说明IL-1β参与脑缺血损害不仅仅局限于急性期。

间充质干细胞外泌体对缺血性脑卒中大鼠神经功能恢复的影响

目的探讨间充质干细胞外泌体(MSCs-EXO)对缺血性脑卒中大鼠神经功能恢复的影响。方法大鼠骨髓间充质干细胞原代培养,超速离心法提取其MSCs-EXO,大脑中动脉夹闭模型(MCAO)法制作大鼠缺血性脑卒中模型,MSCs-EXO经鼻给药,设为MSCs-EXO组,通过改良神经功能缺损评分(mNSS)和错步试验评估其神经功能恢复情况,并与未治疗模型组(MCAO组)做对比。PKH26标记MSCs-EXO并结合免疫荧光染色观察其在缺血半暗带(IP)中的分布,荧光定量PCR及Western blot检测IP区域脑组织中PTEN的表达水平,并与正常大鼠及MCAO组大鼠进行对比。结果MSCs-EXO治疗组的神经功能恢复高于MCAO组,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色显示标记外泌体可以进入IP区域神经细胞,荧光定量PCR及Western blot检测显示MSCs-EXO治疗组及MCAO组中PTEN水平均较正常升高,但MSCs-EXO治疗组的PTEN水平低于MCAO组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MSCs-EXO能够促进缺血性脑卒中大鼠的神经功能恢复,这可能与其下调IP区域PTEN表达水平相关。

短暂性和永久性局灶脑缺血大鼠大脑皮层中钠-钙交换体亚型mRNA及蛋白表达的变化

目的：研究大鼠短暂性和永久性局灶脑缺血模型中大脑皮层钠-钙交换体亚型mRNA和蛋白表达的变化。方法大脑中动脉阻断（MCAO）造成短暂性和永久性局灶脑缺血；用RT—PCR的方法检测大脑皮层中三种钠钙交换体亚型NCX1，NCX2和NCX3mRNA表达的变化；用western blot的方法检测大脑皮层中NCX1蛋白的表达变化。结果：大脑中动脉阻断2小时再灌2小时、6小时时NCX1mRNA分别降低42．1％和27．8％，

大鼠自体血栓结合线栓阻塞大脑中动脉制备脑缺血模型的建立与评价

目的建立和评价大鼠自体血栓结合线栓阻塞大脑中动脉(MCA)制备的脑缺血动物模型。方法大鼠随机分为假手术组(10只)、线栓组(12只)、血栓结合线栓组(12只)。线栓组大鼠用尼龙栓线阻塞MCA制备大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。血栓结合线栓组由颈外动脉插入改良的内置尼龙套线聚乙烯导管,插管成功后栓线退出一定长度,血液在导管内自凝后拔出套线,经导管推入凝血酶,血栓形成后再次插入套线,根据套线标记的长度向前推进血栓,使之阻塞大鼠MCA制备MCAO模型。术后6h,观察大鼠神经症状评分;测定脑组织含水量、脑梗死面积,观察大鼠脑组织病理变化。结果线栓组和血栓结合线栓组均较假手术组大鼠的神经症状评分增高,脑组织含水量增加,脑梗死面积增大(P均<0.01),脑组织出现明显的病理损伤;与线栓组比较,血栓结合线栓组大鼠的神经症状评分、脑组织含水量、脑梗死面积及脑组织病理损伤差异均无显著性(P均>0.05)。结论自体血栓结合线栓阻塞大鼠MCA可引起神经功能损害、脑组织水肿,造成脑组织明显的病理损伤,该法制备的MCAO模型可使血栓阻塞在期望血管(MCA)并可进行脑缺血/再灌注研究,防止血栓模型制备过程中及区域动脉溶栓治疗后再出血等,具有阻塞位置确切、梗死范围恒定、模型易于操作及可重复性好等特点。

小鼠局灶性脑缺血模型行为学指标相关性研究

目的探讨小鼠局灶性脑缺血模型神经功能指标间的相关性。方法采用线栓法制备局灶永久性小鼠脑缺血模型,选取不同的神经功能行为学指标并测定梗死质量百分率,对模型损伤程度进行评分,获得指标间的相关系数;选取葛根素、依达拉奉验证上述指标是否可用于药物筛选的研究。结果术后脑缺血小鼠神经行为学与神经综合功能评分、爬板试验和转角试验相关;脑梗死质量百分比与神经综合功能评分、爬板试验相关,与转角试验不具相关性。葛根素、依达拉奉均明显降低所选指标分值,抑制小鼠的脑缺血损伤。结论以上指标可用于评估药物对小鼠脑缺血损伤的影响研究。

大鼠局灶性脑缺血模型的有效制备

目的比较三种不同手术方法制作大鼠永久性脑缺血模型的效果,包括死亡率、神经功能评分、脑梗死体积、手术效率。方法将采用不同手术方法制备脑缺血模型的大鼠随机分为三组。1组在术中分别结扎颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、枕动脉、翼腭动脉,并且用动脉夹对颈内动脉(ICA)进行临时夹闭;2组在术中分别结扎颈总动脉、颈外动脉,暴露枕动脉和翼腭动脉但不结扎,用丝线悬挂颈内动脉而不是用动脉夹夹闭,线栓在显微镜直视下插入颈内动脉越过翼腭动脉起始点至大脑中动脉分叉处;3组只暴露颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉,结扎颈总动脉、颈外动脉,丝线悬挂颈内动脉,显微镜下将线栓盲插至颈内动脉大脑中动脉分叉处。分别检测三组模型的死亡率、神经功能评分、梗死体积、手术时间。结果第3组制作动物模型的方法所花费时间平均为17.5 min,死亡率较低,神经功能评分及梗死体积稳定。结论采用第3组手术方法可以缩短手术时间,提高手术效率,能够高效地制作出更加稳定的可用于临床实验的大鼠脑缺血模型。

改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型

目的建立一种简便可靠、创伤较小的大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型。方法对Zea Longa线栓法进行适当改进,制作SD大鼠右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)2 h后再灌注(R)模型(MCAO/R组,n=25)。于建模前后不同时间点,评估SD大鼠的神经功能;建模后14 d处死所有大鼠,取脑组织进行病理组织学检查。设立假手术组(n=5)作为对照,进行对比分析以观察模型的可靠性。结果MCAO/R组25只大鼠中,2例(8%)于拔栓线时突发死亡,迅速开颅取脑发现颅底脑池内有大量血块;2例于术后第2天死亡,1例于术后第7天死亡,总死亡率为20%。成功建立MCAO/R模型20例,并在为期14 d的观察过程中神经功能逐渐改善;术中栓线插入长度与大鼠体质量呈线性相关(P=3.86×10-9);组织病理学观察显示,MCAO/R组大鼠的右侧额顶叶和尾壳核区域脑组织缺血性损伤改变,神经元皱缩,呈不规则形态;胞浆嗜酸性,胞核深染或消失,细胞间质疏松。结论本实验采用改良线栓法制备的大鼠MCAO/R模型,简便易行、创伤小且稳定性好,是用于研究局灶性脑缺血/再灌注损伤较为理想的动物模型。

栓线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的研究

目的：建立一种可靠、实用的局部脑缺血再灌注模型。方法：用尼龙线栓塞大脑中动脉（ＭＣＡ）制做局部脑缺血再灌注模型。观察大鼠脑缺血不同时间再灌注的成功率、神经经病学评分、丙二醛（ＭＤＡ）含量、脑水肿及病理学变化。结果：ＭＣＡ闭塞２４ｈ后，大鼠出现脑水肿、脂质过氧化和不同程度的神经损伤症状；光镜下见额顶叶皮质及基底节区梗塞。早期再灌注可明显改善神经损伤症状，减轻脑水肿，而脂质过氧化及病理损害加重。改进实验方法后，大鼠脑缺血不同时间再灌注的成功率明显提高。

大鼠短暂性局灶性脑缺血模型改进的制作方法

目的 :改进大鼠短暂性 ( <2 h)局灶性脑缺血模型的制作方法。方法 :采用雄性 SD大鼠 2 4只 ,实验组分别用线栓法致大脑中动脉 ( MCA)缺血 15、3 0、60 min,每组 6只 ;假手术对照组 6只。所有实验动物均采用乙醚麻醉 ,在手术过程中用 5 - 0丝线结扎颈外动脉 ,在结扎的近侧剪断颈外动脉或其分支——枕动脉 ,自颈外动脉或枕动脉断端将 4 - 0外科单丝尼龙线经颈总动脉分叉部插入颈内动脉直至大脑中动脉起始处。假手术对照组线栓插入颅内但不达大脑中动脉起始处。术后即观察动物行走时是否转圈。结果 :所有实验组动物都及时观察到转圈的表现 ,符合实验的入组标准。假手术对照组动物术后未观察到转圈的表现。结论 :短暂性局灶性脑缺血模型制作方法经改进更易于制作、可操作性更强 。

建立大鼠可逆性大脑中动脉闭塞的局灶脑缺血模型

通过应用４－０单股尼龙外科线沿颈内动脉进入颅内阻断大鼠大脑中动脉血流，制成大鼠短暂性局灶脑缺血模型。大鼠大脑中动脉阻塞后，均出现各种神经病学征象。氯化三苯四氮唑染色能清楚地显示梗塞范围。光镜和电镜观察大鼠短暂性局灶脑缺血后的病理变化，结果显示细胞超微结构的病理损害在电镜下可被观察。该实验表明此模型是比较理想的短暂性局灶脑缺血模型。

葛根素注射液对急性脑缺血模型大鼠脑细胞损伤的保护作用

目的:探讨葛根素注射液对急性脑缺血模型大鼠脑细胞损伤的保护作用。方法:采用闭夹大脑中动脉造成局部脑缺血模型,对实验标本作HE染色后观察其脑组织的病理学改变。结果:葛根素干预组死亡神经元数明显少于单纯缺血组(P<0.05),同时脑水肿程度明显较轻。结论:葛根素对大鼠急性脑缺血损伤有保护作用。

线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型的改进

目的对常规线栓法制作大鼠脑缺血模型进行改进,以提高模型动物的长期存活率。方法将60只体质量250～270 g的SD雄性大鼠随机分成3组,每组20只;对照组采用常规手术方法,术中显露并结扎翼腭动脉,术后自主进食;灌胃组手术方法同对照组,但术后辅助灌胃;改良组不结扎翼腭动脉,但仔细分离颈部动脉与迷走神经,尽量避免操作时牵拉迷走神经,术后辅助灌胃。在模型制作前、后,连续称量各组大鼠的体质量,并行神经功能缺损评分;在造模后3、14、28 d,分别计算各组大鼠的存活率;造模后28 d,计算各组大鼠的脑梗死体积。结果①改良组模型制作的平均时间为19.5 min,低于对照组和灌胃组,差异有统计学意义,P<0.05;②造模后第3天,改良组大鼠的存活率均高于对照组和灌胃组,差异有统计学意义,P<0.05;造模后第28天,改良组大鼠的存活率高于对照组,差异有统计学意义,P<0.05;③造模后3组大鼠的体质量均下降,从造模后第7天开始,各组存活大鼠的体质量均开始回升,在第7、14、21、28天,改良组大鼠的体质量均高于对照组和灌胃组,差异有统计学意义,P<0.05;④造模后3组大鼠的神经功能缺损评分和脑梗死体积的比较,差异均无统计学意义。结论改进的脑缺血模型制作方法,可缩短制作时间,使大鼠体质量恢复较快,能有效地提高大鼠脑缺血造模后的存活率。