永生化肝细胞系研究进展

衰老是体外培养的哺乳动物细胞的一般特性。从动物或人的组织细胞取材培养，体外经过第一次传代后的具有增殖能力的细胞群体称为细胞系。一些细胞系在体外有一定寿命，只能有限期传代，一般不超过50代，称为有限细胞系；另一类体外培养的细胞经过自发的或受外界因素的影响从增殖衰老危机中逃离，从而具有无限增殖能力、可以无限传代的细胞系称为永生化细胞系。

永生化人肝细胞HepZJ的临床前急性毒性评价

背景:肝细胞移植、肝脏组织工程与生物人工肝的研究为肝衰竭患者带来福音,然而截至目前仍未发现十分合适的种子细胞。课题组前期自行构建人永生化肝细胞系HepZJ作为新的种子细胞,并进行了临床前安全性评价研究。目的:对新型永生化人肝细胞系HepZJ进行急性毒性研究,为HepZJ应用于临床可能发生的毒副反应以及设计安全剂量提供参考依据。方法:在HepZJ细胞急性毒性研究中,将低、中、高(5×10~6,5×10~7,8.25×10~7)3个剂量组的HepZJ细胞悬液和空白对照溶液经尾静脉单次注射进入SD大鼠体内,观察大鼠的临床症状和体质量变化,注射结束后第1天以及第14天剖检进行血液学相关检验、大体病理和免疫组化检查,综合分析该细胞系的毒副反应和安全剂量。结果与结论:在HepZJ细胞急性毒性研究中,高剂量组大鼠注射结束时出现1只死亡,与对照组比较,血常规、凝血功能和血清生化部分指标差异有显著性意义(P <0.05);14 d后各项检查差异无显著性意义(P> 0.05)。低剂量组和中剂量组大鼠与对照组在临床症状、体质量变化、血液指标和大体病理形态上差异均无显著性意义。结果表明,永生化人肝细胞系HepZJ单次注射安全剂量为5×10~7/只,无明显毒副反应,剂量过大时可出现明显毒副反应,包括炎症应激、凝血障碍和肝功能损伤等,甚至死亡。因此,只有准确控制HepZJ的使用剂量,才能保证该细胞的临床应用安全性。

SV40LT抗原介导的人源性肝细胞系的构建

目的 :建立人源性永生化肝细胞系 ,为生物人工肝和肝细胞移植等提供合适的细胞源。方法 :利用 SV4 0 L Tag基因和真核表达载体 pc DNA3.1(- )经脂质体转染至来源于 2 5岁男性脑死亡者供肝的原代培养细胞 ,使其永生化 ,进一步鉴定其形态学特征和生物学功能。结果 :经 G4 1870 0～ 30 0μg/ ml筛选 ,4 2天后获一抗 G4 18永生化肝细胞系。该细胞系呈单层贴壁、上皮细胞样形态生长 ,体外培养可无限传代 ,具有分泌 AL B、ALT、AST及 LDH的功能 ,超微结构观察发现 ,转染肝细胞具有原代培养肝细胞的大多数典型特征 ,如较大的细胞核、胞浆内含有丰富的糖原颗粒、大量的线粒体和粗面内质网等。经 RT- PCR和 Western blot检测 ,转染肝细胞的 ALB m RNA阳性和细胞色素 P4 5 0 2 E1阳性。结论 :新建人源性肝细胞系与原代培养肝细胞具有类似的形态学特征和生物学功能。

生物人工肝用肝细胞源的研究进展

生物人工肝支持系统是目前公认的治疗因各种原因所致暴发型肝衰竭最有前途的方法,已在动物实验及临床应用中取得了确切疗效。肝细胞作为生物人工肝的主要生物成分,在该系统中扮演举足轻重的角色,本文就近年来作为生物人工肝用肝细胞的研究进展作了综述。

新型永生化人肝细胞系HepZJ的安全性研究

目的对新型永生化人肝细胞系Hep ZJ进行安全性研究。方法获取Hep ZJ培养上清液,通过PCR联合琼脂糖凝胶电泳法进行支原体检测,通过显色基质法进行内毒素检测;将Hep ZJ细胞悬液经尾iv进入SD大鼠后观察其生存情况并于不同时间点进行剖检,通实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法分析该细胞系的生物分布;将Hep ZJ细胞悬液sc进入BALB/c-nu裸鼠后分析其致瘤性。结果 Hep ZJ支原体检测电泳图未见阳性条带;内毒素检测浓度<2 EU/m L;SD大鼠尾iv Hep ZJ后生存情况良好,血液、肺脏、脾脏在不同时间点出现不同程度的GAPDH-Human和TERT-Human基因表达,血液中12 h后、肺脏和脾脏中1周后基本被清除,剖检过程中未见肿块形成;裸鼠sc Hep ZJ后无硬性肿物形成。结论新型永生化人肝细胞系Hep ZJ无支原体、细菌污染,进入体内后无明显副反应及致瘤性,具备应用安全性。

诱导性多潜能干细胞来源的肝细胞研究进展

诱导性多潜能干细胞（inducedpluripotentstemcells，iPSCs）是一类由各种体细胞经特定的转录因子重新编程而来，与胚胎干细胞（embryonicstemcells，ESCs）在多能性、基因表达谱、表观遗传状态等方面相类似的干细胞^[1-4]。目前在肝脏疾病研究中所用的原代肝细胞^⑸、胚胎及成体干细胞分化而来的肝细胞^[6-8]、肿瘤源性肝细胞系和永生化肝细胞系19。”等细胞源还存在来源有限、伦理学争论、免疫排斥反应、致瘤性等诸多难以解决的问题。