白芨外泌体的分离及对体外人永生化角质形成细胞(Hacat)的凋亡保护研究

探索鲜白芨(Bletilla striata)外泌体对体外人永生化角质形成细胞(Hacat)的生物活性,为其在护肤品上的开发提供数据。聚乙二醇(PEG)沉淀法提取白芨外泌体,透射电镜鉴定,BCA法测蛋白浓度;细胞计数试剂(Cell Counting Kit-8,CCK8)法检测Hacat细胞存活率,流式双染检测凋亡,蛋白印迹法检测凋亡相关通路蛋白。白芨外泌体呈茶杯状具双层膜,平均粒径69.63 nm,每克鲜白芨含外泌体浓度为5.24E+8 Particles,内含蛋白19.53μg;白芨外泌体(≥5μg/mL)可显著提高体外Hacat细胞存活率(P<0.05);10μg/mL白芨外泌体处理48h,可显著降低H_(2)O_(2)氧化造模引起的Hacat细胞早凋亡、晚凋亡和总凋亡的细胞比例(P<0.01),同时,模型组caspase-9和caspase-3表达显著上升,外泌体处理能显著降低其表达,而Bcl-2表达在组间无差异(P<0.05)。PEG沉淀法分离的白芨外泌体,可促进体外Hacat生长,抑制H_(2)O_(2)引起的细胞凋亡且与蛋白caspase-9和caspase-3相关。

枸杞籽油对中波紫外线诱导人永生化角质形成细胞光损伤的防护作用

明确枸杞籽油对中波紫外线(ultraviolet B,UVB)诱导人永生化角质形成细胞(human immortalized keratinocytes,HaCaT)光损伤的防护作用,进一步提高枸杞籽油的利用率。采用GB 5009.168—2016、GB 5009.83—2016、DB64/T 1514—2017、《保健食品中功效成分检测方法》和GB 5009.82—2016(第一法)提供的方法分别测定枸杞籽油主要活性成分脂肪酸、β-胡萝卜素、玉米黄质、叶黄素、谷甾醇以及维生素E的含量,利用HaCaT细胞构建UVB光损伤模型,检测枸杞籽油对UVB诱导的光损伤HaCaT细胞存活率、凋亡率、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、凋亡相关细胞因子和炎症因子的影响。结果表明,与模型组相比,枸杞籽油可明显提高UVB光损伤HaCaT细胞的存活率(P<0.05),促进抗凋亡因子B淋巴细胞瘤/白血病-2 mRNA的表达(P<0.01),抑制细胞内ROS的生成(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.01),抑制细胞凋亡相关因子Bcl-2相关X蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9和p53 mRNA的表达(P<0.01),减少炎症因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β和白细胞介素-6的蛋白含量及mRNA表达(P<0.05)。结果表明枸杞籽油可通过调控细胞凋亡及减轻炎症反应来缓解UVB所致HaCaT细胞光损伤。

紫铆花素对人黑色素瘤细胞A375与人永生化角质形成细胞HaCaT共培养细胞生物学活性的影响

目的探讨紫铆花素对人黑色素瘤细胞A375与人永生化角质形成细胞HaCaT共培养细胞生物学活性的影响。方法建立A375细胞与HaCaT细胞的共培养细胞体系,实验分为对照组(等体积培养液),紫铆花素低、中、高剂量组(以下简称低、中、高剂量组,0.5,1.0,5.0μg/L)。采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;采用流式细胞仪检测细胞的周期分布和线粒体膜电位;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测干细胞因子(SCF)和其受体c-Kit,以及小眼畸形相关转录因子(MITF)的mRNA表达水平;采用Western blot法检测细胞酪氨酸酶相关蛋白1,2(TRP-1,TRP-2)及SCF,c-Kit,MITF的蛋白表达水平。结果与对照组比较,中、高剂量组细胞的增殖率均显著升高(P<0.01);与对照组比较,各剂量组G0/G1期细胞比例均显著降低,S期和G_(2)/M期细胞比例均显著升高(P<0.01),高线粒体膜电位细胞比例均显著升高(P<0.05或P<0.01),SCF,c-Kit,MITF的mRNA表达水平及SCF,c-Kit,MITF,TRP-1,TRP-2的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论紫铆花素可能通过调节SCF,cKit,MITF的表达而影响A375细胞与HaCaT细胞共培养细胞的增殖、细胞周期和线粒体膜电位等细胞生物学活性。

重楼皂苷Ⅰ对紫外损伤的人永生化角质形成细胞(HaCaT)的保护作用研究

【目的】研究重楼皂苷Ⅰ(polyphyllinⅠ,PPⅠ)对急性中波紫外线(medium wave ultraviolet rays,UVB)损伤的人永生化角质形成细胞(HaCaT)的保护作用及分子机制,为滇重楼在日化用品中的应用提供理论依据。【方法】采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度PPⅠ处理HaCaT的存活率,筛选出无毒性PPⅠ浓度;将HaCaT细胞随机分为4组:空白对照组、UVB处理组(21.6 mJ/cm^(2))、0.250μmol/L PPⅠ+UVB处理组和0.500μmol/L PPⅠ+UVB处理组,采用结晶紫染色法探究2种浓度PPⅠ对UVB处理后HaCaT细胞增殖的影响;采用蛋白质免疫印迹法检测HaCaT细胞凋亡蛋白多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP1)、cleaved-PARP1、乙酰基-赖氨酸、K68位点的线粒体超氧化物歧化酶重组蛋白(mitochondrial recombinant superoxide dismutase 2,K68-SOD2)和沉默调节3蛋白(sirtuin3,SIRT3)的表达。【结果】与空白对照组相比,UVB组的HaCaT细胞存活率显著下降,cleaved-PARP1和K68-SOD2表达显著增加,而SIRT3表达显著降低,造模成功。与UVB组相比,PPⅠ各剂量处理组可提高UVB照射后HaCaT细胞的存活率,增加SIRT3的表达,降低K68-SOD2的乙酰化水平,进而减少凋亡蛋白cleaved-PARP1的表达,降低细胞的凋亡水平。【结论】PPⅠ可能通过增强SIRT3活性使SOD2去乙酰化,以增强SOD2活性,减轻UVB照射HaCaT细胞引起的氧化应激和凋亡,从而对HaCaT细胞起到保护作用。

麻黄碱对IL-17诱导的人永生化角质形成细胞HaCaT分泌CCL20的影响

目的观察麻黄碱对IL-17诱导的人永生化角质形成细胞HaCaT分泌CCL20的影响。方法将HaCaT细胞随机分为6组。A组加不含药物的培养液,B组加含20 ng/m L IL-17的培养液,C、D、E分别加含20 ng/m L IL-17联合800、1 200、1 600μg/m L麻黄碱的培养液,F组加含20 ng/m L IL-17联合50μg/m L MTX的培养液。培养36h后,采用ELISA法测定细胞上清液CCL20,采用RT-PCR法测定细胞中的CCL20 mRNA。结果 A、B、C、D、E、F组HaCaT细胞上清液CCL20水平分别为(97.72±1.86)、(159.43±7.09)、(147.05±2.25)、(138.60±8.04)、(126.66±7.04)、(114.39±3.90)pg/m L,HaCaT细胞CCL20 mRNA相对表达量分别为0.91±0.08、7.22±0.32、4.95±0.33、2.79±0.19、1.79±0.49、1.80±0.47;B、C、D、E、F组均高于A组(P均<0.05),D、E、F组均低于B组(P均<0.05),C、D组均低于F组(P均<0.05)。结论麻黄碱能有效抑制IL-17诱导的HaCaT细胞分泌CCL20,为麻黄治疗银屑病提供一定的理论依据。

中波紫外线辐射对原代及永生化角质形成细胞损伤能力的比较研究

目的 : 观察原代角质形成细胞和永生化HaCaT角质形成细胞对中波紫外线照射的反应差异。方法 : 采用不同剂量中波紫外线 (UVB)照射上述两种细胞 ,评估UVB对细胞作用的时间及剂量效应 ,以倒置光学显微镜观察细胞受损程度 ,MTT法检测细胞活性。结果 : UVB照射后 ,细胞损伤程度均随照射剂量加大而加重 ;另经 2 4h、4 8h及 72h孵育后 ,对两种细胞进行不同时间段的细胞活性 (MTT)比值比较(72h 2 4h ,72h 4 8h) :分别为原代角质形成细胞 (1.16和 1.6 3)和HaCaT细胞 (0 .96和 0 .91)。MTT结果显示低剂量紫外线照射时 ,细胞损伤恢复可发生在照射后 4 8h;高剂量紫外线照射后 ,两种细胞的损伤程度均随孵育时间延长而加重。结论 : 原代角质形成细胞抵抗紫外线照射损伤的能力较强 ,而HaCaT细胞相对较易受损。

芦荟大黄素对人永生化角质形成细胞增殖和凋亡作用研究

目的研究芦荟大黄素（AE）对人永生化角质形成细胞（HaCaT）的生长抑制效应和诱导细胞凋亡能力，探讨其治疗银屑病的可能机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测芦荟大黄素对HaCaT细胞增殖的抑制作用，倒置显微镜观察细胞形态学变化，流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡。结果芦荟大黄素质量浓度在20～80μg／mL范围内可抑制HaCaT细胞增殖且呈剂量依赖性；镜下观察到细胞稀疏，生长减慢，细胞形态拉长，细胞被阻滞于S期而凋亡。结论芦荟大黄素能抑制HaCaT细胞的增殖、诱导HaCaT细胞的凋亡。可用于治疗银屑病。

亚砷酸钠对人永生化角质形成细胞株恶性转化的影响

背景:有研究发现亚砷酸钠可以引起Ha Ca T细胞的恶性转化,并具有致瘤性,但关于低浓度亚砷酸钠是否引起Ha Ca T细胞发生恶性转化的研究不多。目的:分析亚砷酸钠对Ha Ca T细胞恶性转化的影响。方法:将HaC a T细胞加入不同浓度的亚砷酸钠进行培养,MTT测定亚硫酸钠对Ha Ca T细胞形态和增殖能力的影响,流式细胞术测定亚硫酸钠对Ha CaT细胞周期的影响,软琼脂集落形成实验测定亚硫酸钠对Ha CaT细胞克隆形成能力的影响。结果与结论:15 mol/L亚砷酸钠对HaC aT细胞生长没有影响,但10和50 mol/L亚砷酸钠抑制HaC aT细胞生长。2HaC aT细胞经0.1 mol/L亚砷酸钠处理后,传代培养至第20代时,HaC aT细胞的形态没有明显改变,第25代时,细胞体积增大,有多个核仁,有不断增殖趋势。3与原代细胞相比,经0.1 mol/L亚砷酸钠处理后传至第15及25代Ha CaT细胞S期细胞和G2/M期细胞所占比例增加,增殖能力增强,克隆形成率增加,且第25代HaC aT细胞的增殖能力和克隆形成率高于第15代。4实验结果说明,高浓度亚砷酸钠降低HaC aT细胞的活力,低浓度亚硫酸钠对HaC aT人永生化皮肤角质形成细胞的细胞形态、细胞周期、增殖能力以及克隆形成能力均有一定的影响,随着传代的增加,人永生角质形成细胞增殖能力和克隆形成能力不断增强。

白疕合剂对体外培养人永生化角质形成细胞分泌血管内皮生长因子及其受体2表达的影响

目的观察中药白疕合剂干预人永生化角质形成细胞(HaC aT细胞)后,对其血管内皮生长因子(VEGF)的分泌量及其受体2(VEGFR-2)基因和蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养HaC aT细胞建立银屑病实验模型。SD大鼠随机分为空白血清组、阿维A组和白疕合剂低、中、高剂量组,并单设空白对照组。给药后制备血清,干预HaC aT细胞模型。ELISA检测VEGF分泌量,RT-PCR检测VEGFR-2基因表达,Western blot检测VEGFR-2蛋白表达。结果与空白对照组比较,白疕合剂低、中、高剂量组干预HaC a T细胞后,VEGF分泌量及VEGFR-2基因和蛋白表达均明显抑制,且呈浓度依赖性。结论白疕合剂可能通过抑制VEGF分泌量、降低VEGFR-2基因和蛋白表达以达到治疗银屑病的作用。

白三烯B4对人永生化角质形成细胞的影响

目的探讨白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)对人永生化角质形成细胞(immortal keratinocytes,HaCaT细胞)的影响。方法将中波紫外线(ultraviolet B,UVB)和LTB4分别或共同作用于HaCaT细胞,观察端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、细胞增殖指数(proliferation index,PI)及白三烯B4受体(leukotriene B4 receptor,BLT)的变化。分别采用流式细胞仪检测HaCaT细胞周期的变化,RT-PCR检测hTERT mRNA水平,同时采用免疫荧光结合激光共聚焦显微镜和Western-blot法检测BLT的表达。结果HaCaT细胞存在BLT表达,表达分布于胞膜和胞浆;UVB单次照射HaCaT细胞,BLT的表达升高(P<0.05),PI降低;LTB4使HaCaT细胞hTERT表达上调、PI增高,但BLT表达与空白对照组相似;UVB+LTB4共同作用于HaCaT细胞后,其PI下降,BLT、hTERT mRNA与空白对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论HaCaT细胞可表达BLT蛋白,LTB4能促进HaCaT细胞增殖,UVB照射可能促进HaCaT细胞BLT的表达。

中药单体及有效成分对人永生化角质形成细胞作用的实验研究进展

中医药治疗银屑病具有独特的疗效,中药单体及有效成分干预人永生化角质形成(HaCaT)细胞的增殖及凋亡,调控信号转导通路及调节细胞免疫功能等方面取得一定成效。该文通过阅读近10年国内外具有代表性的文献,分析中药作用于HaCaT细胞的单体有效成分。常用中药单体包括柴胡皂苷、重楼皂苷Ⅰ、白芍总苷、紫草素、苦参碱、丹皮酚、姜黄素、熊果酸等。从中药单体对HaCaT细胞研究进展概括出发,阐述其相应的作用机制,以求为中药单体治疗银屑病的相关研究提供参考。

探究2型单纯疱疹病毒(HSV-2)对人永生化角质形成细胞株(HaCaT)分泌白细胞介素(IL)-19、IL-20的影响

目的:分析2型单纯疱疹病毒对人永生化角质形成细胞株分泌白细胞介素(IL)-19、IL-20的影响,为临床探讨角质形成细胞对2型单纯疱疹病毒感染初期的免疫防御机制提供依据。方法:应用2型单纯疱疹病毒感染人永生化角质形成细胞,并对感染后24、48、72h的IL-19、IL-20mRNA(信使RNA)的表达量使用荧光实时定量PCR进行检测,分析HSV-2对HaCaT细胞分泌白细胞介素(IL)-19、IL-20的影响。结果:实验组HSV-2对HaCaT细胞分泌IL-19、IL-20mRNA表达量显著高于对照组,P<0.05。结论:角质形成细胞经2型单纯疱疹病毒感染后可分泌IL-19、IL-20,并参与2型单纯疱疹病毒感染初期的免疫防御反应。

周期性拉伸应力与人永生化角质形成细胞的黏附和铺展

背景:皮肤组织所处的力学环境以及上皮细胞的铺展状态与伤口愈合和瘢痕形成过程关系密切。目的:分析胞外力学刺激对细胞铺展的作用,并检测细胞的增殖状态进一步分析铺展形态对细胞增殖等生理活动的影响。方法:通过FX-4000柔性基底加载系统对人永生化角质形成细胞(HaCaT)进行周期性拉伸应力正弦波加载,加载程式0.2 Hz,10%拉伸幅度。在0,24,48 h对细胞的铺展形态进行对比,利用流式细胞仪检测分析细胞的增殖,并利用免疫荧光染色方法对比分析纽蛋白在细胞内的分布。结果与结论:HaCaT细胞在加载24 h后分裂期细胞较多,铺展形态无明显变化;加载48 h后HaCaT细胞形态发生较为明显的变化,分裂期细胞较静态对照组略有减少;拉伸应力作用下纽蛋白的分布由细胞核周围的膜区域向细胞边缘集中。结果表明:适度的力学加载能够在保持细胞铺展和黏附状态下,促进细胞增殖;周期性持续拉伸应力的作用时间是HaCaT细胞铺展形态和与基底黏附位点的重要影响因素。

驱虫斑鸠菊中紫铆素对人永生化角质形成细胞株HaCaT增殖及细胞分泌因子的影响

目的:研究驱虫斑鸠菊(VW)中紫铆素对人永生化角质形成细胞株HaCaT的增殖及细胞分泌因子的影响,初步探讨VW中紫铆素治疗白癜风的机制。方法:采用MTT法测定0(空白对照)、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 μg/mL紫铆素作用于HaCaT细胞48 h后的细胞存活率;采用酶联免疫吸附法测定0.5、1.0、5.0 μg/mL紫铆素作用于HaCaT细胞48 h后培养液中细胞分泌因子内皮素1(ET-1)、ET-3、黑素细胞刺激素(MSH)、干细胞因子(SCF)、碱性纤维细胞生长因子(bFGF)的含量。结果:与空白对照比较,0.1~5.0 μg/mL紫铆素作用48 h后细胞存活率均有不同程度升高,而10.0 μg/mL紫铆素作用后细胞存活率降低;0.5、1.0、5.0 μg/mL紫铆素作用48 h后培养液中ET-1、SCF、bFGF含量均显著增加(P<0.01),1.0、5.0 μg/mL紫铆素作用48 h后培养液中ET-3、MSH含量显著增加(P<0.01)。结论:紫铆素可促进HaCaT细胞的增殖,其作用机制可能与促进细胞分泌因子ET-1、ET-3、MSH、SCF、bFGF的分泌有关。

糖蛋白基因表达对人永生化角质形成细胞株活性的影响及机制

目的探讨糖蛋白(GP)基因表达对人永生化角质形成细胞株活性的影响及相关机制。方法体外培养HaCaT人永生化表皮细胞,设计并合成3组GP130siRNA序列,转染HaCaT细胞,从mRNA和蛋白质水平筛选并验证最佳siRNA序列和浓度。分别于转染HaCaT细胞24h、48h时,使用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术检测细胞增殖和增殖周期;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、Western印迹检测白细胞介素(IL)-6mRNA和蛋白表达。结果培养24h时siRNA1组、siRNA-nc组、空白对照组HaCaT细胞增殖率之间差异无统计学意义(P>0.05);培养48h时siRNA1组HaCaT细胞增殖率明显低于siRNA-nc组、空白对照组(P<0.05)。培养24h时G1期、S期、G2期的HaCaT细胞水平在siRNA1组、siRNA-nc组、空白对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);培养48h时siRNA1组G1期HaCaT细胞数量明显高于siRNA-nc组、空白对照组,S期和G2期细胞数量明显低于siRNA-nc组、空白对照组(P<0.01);培养48h时siRNA1组G1期细胞数量明显高于培养24h时,G2期细胞数量明显低于培养24h时(P<0.01)。培养24h时siRNA1组、siRNA-nc组、空白对照组IL-6mRNA及蛋白表达水平之间差异无统计学意义(P>0.05);培养48h时siRNA1组IL-6mRNA及蛋白表达水平明显低于siRNA-nc组、空白对照组(P<0.01);培养48h时siRNA1组IL-6mRNA及蛋白表达水平明显低于培养24h时(P<0.01)。结论下调GP130基因表达可抑制HaCaT细胞增殖,影响细胞增殖周期;其机制可能通过抑制IL-6表达,经Janus激酶(JAK)-信号转导与转录激活子(STAT)3信号通路调控HaCaT细胞增殖。

核因子E2相关因子2对人永生化角质形成细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)对过氧化氢(H2O2)诱导的人永生化角质形成细胞(HaCaT)氧化损伤的保护作用。方法用慢病毒转染方式使HaCaT过表达Nrf2(Nrf2/HaCaT),并用MTT法和抗Ki67免疫荧光染色法检测其增殖活性。实验分为Nrf2/HaCaT组和HaCaT组,每组5个样本。应用200μmol/L H2O2处理两组细胞24 h以诱导氧化损伤,并用MTT法检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤情况,TUNEL染色检测细胞凋亡,ELISA法和比色法检测氧化应激相关指标Nrf2、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS),以及炎症相关因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、核因子κB(NF-κB)P65的含量。结果Nrf2/HaCaT细胞增殖活性显著高于HaCaT(P<0.05)。经H2O2诱导后,Nrf2/HaCaT活性较HaCaT高(P<0.05),LDH释放及凋亡率较HaCaT低(P<0.05),其上清液中的抗氧化物Nrf2、GSH和SOD水平较HaCaT高(P<0.05),而氧化产物ROS、MDA以及炎症因子IL-6、TNF-α和NF-κB P65水平较HaCaT低(P<0.05)。结论Nrf2过表达可促进HaCaT增殖及减轻H2O2诱导的细胞氧化和炎性损伤。

土大黄提取物对人永生化表皮角质形成细胞(HaCaT)增殖的影响

目的土大黄根醇提物化学组分分析及其对人永生化表皮角质形成细胞(HaCaT细胞)增值的影响。方法利用D101大孔树脂、HPLC对土大黄根70%乙醇提取物(原粗提取物)进行分离纯化、主要化学组分分析,同时观察对HaCaT细胞增殖的作用。结果通过D101大孔树脂处理得到了30%、50%、70%、90%乙醇洗脱部位的出膏率分别为5.4%、14.8%、11%、0.72%。HPLC检测得知,30%洗脱部位占0.151%,成分为大黄素;50%洗脱部位占1.952%,成分为芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚;70%洗脱部位占21.409%,成分为芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚;90%洗脱部位占1.927%,成分为大黄酸、大黄素、大黄素甲醚;土大黄根70%乙醇提取物(原粗提取物)占1.591%,成分为芦荟大黄素和大黄酸;对HaCaT细胞增殖的抑制作用由强到弱依次为90%乙醇洗脱部位、70%乙醇洗脱部位、50%乙醇洗脱部位、70%乙醇提取物(原粗提取物)、30%乙醇洗脱部位,抑制率分别为17.55%、16.66%、10.99%、10.25%和7.86%。结论土大黄根醇提物70%乙醇洗脱部位是最佳富集部位(21.409%)、也是最佳洗脱部位。土大黄根70%乙醇提取物(原粗提取物)及其不同洗脱部位均对HaCaT细胞增殖具有一定的抑制作用,其作用可能与土大黄所含的蒽醌类成分有关,提示土大黄具有治疗银屑病的作用。

不同来源成纤维细胞对角质形成细胞再上皮化影响

目的比较人牙龈及皮肤来源成纤维细胞条件培养基对永生化角质形成细胞再上皮化作用的差异,分析成纤维细胞促进再上皮化作用的关键因子,探究牙龈来源成纤维细胞在创伤修复中的可能应用。方法分别制备人牙龈成纤维细胞(hGFs)和人真皮成纤维细胞(hDFs)条件培养基(CM),添加到人永生化角质形成细胞(Human keratinocyte cells,HaCaT)中,采用CCK-8、EdU染色检测HaCaT细胞增殖能力;细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力;通过ABplex多因子检测及酶联免疫吸附法(ELISA)对hGFs、hDFs分泌的多种与创伤修复相关的生长因子、细胞因子和趋化因子进行定量分析。结果CCK-8、EdU染色、细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验结果表明:2种条件培养基均能显著提高HaCaT细胞的增殖及迁移能力(P<0.05),hGFs-CM对HaCaT细胞增殖和迁移能力的促进作用显著强于hDFs-CM(P<0.01);hGFs和hDFs分泌的因子有较大的差异,其中hGFs分泌的生长因子如肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)明显多于hDFs。结论人牙龈来源成纤维细胞较人皮肤来源成纤维细胞的条件培养基对角质形成细胞的增殖和迁移能力的有更强的促进作用,可能与其旁分泌产生的因子不同有关。

砷对人永生化角质形成细胞核转录因子红细胞系-2p45相关因子-2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1基因表达的影响

目的探讨不同剂量亚砷酸钠对人永生化角质形成细胞(human keratinocytes cell,Ha Ca T)Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)和核转录因了红细胞系-2 p45相关因子-2(Nrf2)基因表达的影响。方法将Ha Ca T细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、1.30、3.25、6.50μmol/L的亚砷酸钠培养基中培养24、48、72 h。采用流式细胞仪检测Ha Ca T细胞凋亡率,采用实时荧光定量(real-time quantitative PCR)检测Ha Ca T细胞中Nrf2、Keap1 m RNA的表达水平。结果与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞的凋亡率降低,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48、72 h后Ha Ca T细胞的凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24、48、72 h和3.25μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均增高,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒72 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞Nrf2 m RNA的表达水平均呈下降趋势。与对照组相比,1.30、3.25μmol/L亚砷酸钠染毒72 h和3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48 h后Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。随着亚砷酸钠染毒时间的延长,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈波动性上升,3.25μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈逐渐上升趋势,6.50μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈先上升后下降;随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,24、72 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈下降趋势,而48 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈上升趋势。结论亚砷酸钠可抑制Ha Ca T细胞的生长,诱导凋亡和角化的发生,其机制可能与Nrf2和Keap1基因的表达有关。

白介素22调控角质形成细胞表达角蛋白17的研究

目的:研究白介素(IL)-22对培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)表达角蛋白(K)17的影响。方法:对体外培养的HaCaT细胞分别给予不同浓度的IL-22(0～100μg/L)作用24 h,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测K17mRNA表达水平,以酶联免疫吸附测定技术(ELISA法)、蛋白质免疫印记法(Western blot)及免疫荧光染色法检测K17蛋白表达水平的变化。结果:HaCaT细胞经12.5、25.0、50.0、100.0μg/L的IL-22作用后,均出现不同程度的K17表达。与空白对照组的HaCaT细胞相比,12.5μg/L组的mRNA及蛋白表达无明显差异,而25.0、50.0、100.0μg/L组的mRNA及蛋白表达则明显上升(P<0.05),并且随着IL-22浓度增高,K17mRNA及蛋白表达量增多。免疫荧光染色图片显示,随着IL-22浓度的增高,HaCaT细胞胞质中K17蛋白荧光染色增强。结论:IL-22可以剂量依赖方式诱导HaCaT细胞表达K17。