NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中过表达的研究

为研究NGAL (neutrophilgelatinase associatedlipocalin)基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况 ,以永生化食管上皮细胞系SHEE和食管癌细胞系SHEEC互为对照 ,用cDNA微列阵进行筛选 ,用RNA印迹和RT PCR进行鉴定 ,cDNA克隆测序后与GenBank进行BLAST分析比较 .结果表明NGAL基因在SHEEC中出现显著差异过表达 ,其cDNA序列与小鼠 2 4p3、大鼠NRL (neu relatedlipocalin)、人中性粒细胞NGAL和卵巢癌NGAL具有较高的相似性 .这提示NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中可能发挥着重要作用 。

RNA干扰人永生化食管上皮恶变细胞中核干细胞因子对PI3K/AKT表达的影响

目的:研究抑制人永生化食管上皮恶变细胞(SHEEC)中核干细胞因子(NS)对PI3K/AKT信号转导通路中相关分子表达的影响。方法:将干扰试剂(NS-RNAi)转染至SHEEC中以抑制NS的表达,以SHEEC组、阴性对照组(NC组)和MOCK组为对照,采用RT-PCR和Western blot方法检测干扰后PI3K/AKT通路中相关因子mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:NS-RNAi成功转染至SHEEC中。抑制SHEEC中NS的表达后PI3K和AKT mRNA的相对表达量为(0.460±0.207)和(0.492±0.233),与SHEEC组、NC组和MOCK组比较,差异有统计学意义(P均<0.05);干扰NS表达后PI3K和AKT蛋白的相对表达量为(0.353±0.361)和(0.312±0.068),与SHEEC组、NC组和MOCK组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论:抑制SHEEC中NS表达后PI3K/AKT信号通路中相关因子的表达均明显下降,PI3K/AKT信号通路可能是NS发挥作用的一种非依赖P53作用的信号途径。

永生化食管上皮恶变细胞中核干细胞因子、细胞周期蛋白B1和PTEN的表达

目的观察核干细胞因子(nucleostemin,NS)、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)及抑癌基因PTEN mRNA和蛋白的表达情况。方法正常食管上皮细胞(shantou human embryonic esophageal epithelial cell line,SHEE)和永生化食管上皮恶变细胞(shantou human embryonic esophageal carcinoma epithelial cell line,SHEEC)连续传代培养,取对数生长期SHEE和SHEEC细胞,采用RT-PCR及Western blot方法检测细胞中NS、Cyclin B1及PTEN mRNA和蛋白的表达并做相关性分析,MTT法检测抑制NS表达后的细胞增殖活性。结果以SHEE细胞中NS、Cyclin B1和PTEN mRNA的表达量为1,SHEEC细胞中对应的相对表达量分别为(2.047±0.507)、(2.214±0.213)及(0.668±0.188),两组比较差异均有统计学意义(P<0.05);SHEE及SHEEC细胞中NS、Cyclin B1及PTEN蛋白表达量分别为(1.142±0.113),(3.161±0.108)、(1.585±0.056),(2.173±0.058)及(1.894±0.341),(1.162±0.524),两组比较差异均有统计学意义(P<0.05);NS mRNA和蛋白与Cyclin B1 mRNA和蛋白的表达呈正相关(r=0.832,P<0.01;r=0.991,P<0.05),与PTEN mRNA和蛋白的表达呈负相关(r=-0.924,P<0.01;r=-0.769,P<0.05);MTT检测结果显示,NS RNA干扰(RNA interference,RNAi)组与空白对照组和阴性对照组在干扰后12 h细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05),而在干扰后24、36、48 h差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SHEEC细胞中NS、Cyclin B1 mRNA和蛋白的表达量均高于SHEE,而PTEN的表达量低于SHEE,NS可能对细胞恶变有影响。