CpG-ODN2006、LPS及白介素对SLE、RA患者EBV永生化B淋巴细胞抗体产生的初步研究

目的:不依赖抗原情况下,分别用TLRs的激动剂及细胞因子单独和联合应用,对不同人群永生化B细胞体外刺激及诱导抗体产生,观察在疾病状态下B细胞活化状态,为寻找自身免疫病更敏感的新指标奠定基础。方法:用EpsteinBarr病毒(EBV)攻击SLE、RA患者B细胞,使之成为永生化的B淋巴母细胞系,体外用CpG-ODN2006、LPS及细胞因子与细胞共培养,免疫散射比浊法测定刺激后不同时段的总IgG水平,进行重复测量设计的方差分析。结果:刺激后细胞上清抗体分泌量增高10倍左右;SLE和RA患者抗体分泌量高于正常人;刺激后18d抗体分泌效应差异最为明显;CpG-ODN2006&IL-4&IL-6三者联合的刺激最好;经诱导后的抗体,均未检测到疾病特异性的血清学指标。结论:在疾病状态下,体外给予刺激后,B细胞活化状态更高,但未诱导出疾病特异的自身抗体。

遗传眼病永生化细胞系建立方法

目的通过遗传眼病患者的外周血或皮肤组织建立永生化细胞系,以保存其遗传资源。方法永生化B淋巴细胞系的建立:抽取患者静脉血,分离淋巴细胞,以EB病毒体外转化B淋巴细胞为类淋巴母细胞,利用环孢霉素A抑制T淋巴细胞RNA聚合酶Ⅱ活性,防止已转化B淋巴细胞因受到T淋巴细胞的攻击而退化,培养后建立永生化B淋巴细胞系;皮肤成纤维细胞原代培养:利用DispaseⅡ酶处理离体皮肤组织以分离表皮组织,将其余组织剪碎后贴瓶培养,成纤维细胞可从组织块爬出,生长成为细胞系。结果永生化B淋巴细胞系:共完成标本17例,成功建系15例,成功率88.2%;经过转化后B淋巴细胞悬浮生长,胞浆丰富、形态各异,聚集成团,可无限传代用于实验研究。皮肤成纤维细胞原代培养:共完成标本5例,成功建系3例,成功率60.0%;皮肤成纤维细胞贴壁生长,呈典型纺锤形,中间饱满,两边细长,50代以内增殖旺盛可用于实验研究。结论通过遗传眼病患者的外周血和皮肤组织可建立永生化B淋巴细胞系和皮肤成纤维细胞系以保存其全部遗传信息,为进一步研究相关遗传性眼病奠定物质基础。

姜黄素对人淋巴细胞低密度脂蛋白受体表达影响的研究

目的建立一种简便的直接检测人类低密度脂蛋白受体(lowdensitylipoproteinrecepor,LDL-R)活性并筛选降脂中药的细胞模型:人B淋巴细胞永生化细胞系研究不同浓度姜黄素对人类LDL-R在人淋巴细胞中表达的影响,在细胞和受体水平上探讨姜黄素的作用机制。方法EBV转化技术建立的人B淋巴细胞永生化细胞系;以荧光试剂标记配体法,利用流式细胞仪技术和激光扫描共聚焦显微镜技术研究姜黄素对人淋巴细胞LDL-R表达的影响。结果姜黄素在5-50μmol·L-1内可以增强人淋巴细胞LDL-R的表达,并且具有明显的量效关系。结论利用荧光试剂标记配体法检测人淋巴细胞LDL-R活性是一个简单有效的方法;姜黄素是一个非常强的LDL-R基因表达促进剂。

Quick search of differentially expressed genes of EB virus resulting immortal human B cells by suppression subtractive hybridization

AIM:To clone and identify genes differentially expressed in the EB virus transformed human B cell.METHODS:Suppression subtractive hybridization was used to construct the library which contains the differentiately expressed cDNAs in EB virus transformed human B cell.Then the isolated genes were cloned and sequenced and identifed by RT PCR.Nucleic acid homology searches were performed using the BLAST program.RESULTS:By this technique,4 differentiately expressed gene cDNA fragments of EB virus transformed human B cell were obtained.CONCLUSION:SSH is an effective method to isolate differentiately expressed genes.