永生化hBMSCs复合异种骨异位成骨

目的为解决组织工程中种子细胞数量不足及为组织工程种子细胞研究提供标准细胞,建立永生化hBMSCs(MSCxj)系,进一步探讨MSCxj的异位成骨能力。方法取冻存复苏后生长良好的第35代和第128代MSCxj,扩增培养至2109个,分别与牛松质骨复合培养,作为A、B组(n=12),C组为单纯牛松质骨(n=12)。成骨诱导培养48h和18d时行扫描电镜观察细胞在材料上的生长情况。于18只4～6周龄裸鼠背部两侧皮下各作一3mm小切口,将3组共36个标本采用组内随机、组间两两配对分别植入切口内。处死动物前分别行四环素荧光标记。于术后4、8、12周各组分别取4个标本行HE、丽春红三色、四环素荧光染色、鼠抗人骨钙素单克隆抗体免疫组织化学染色观察,并行形态学定量分析。结果细胞-异种骨复合培养48h,扫描电镜观察见A、B组细胞贴附生长良好;18d可见大量合成的丝状细胞外基质及细小颗粒样分泌物,并覆盖细胞。裸鼠皮下埋植实验:HE、丽春红三色、四环素荧光染色观察示,术后4周A、B组标本成骨不明显,8周A、B组标本周边及异种骨内部孔隙有类骨基质沉积,12周A、B组标本成骨增加,A、B组间成骨情况比较无明显差异;C组各时间点均未见骨质形成。鼠抗人骨钙素单克隆抗体免疫组织化学染色显示,A、B组8周及12周骨陷窝内骨钙素染色呈阳性。形态学定量分析显示,术后8周A、B组骨长入率分别为5.64%±2.68%和4.92%±2.95%,术后12周分别为13.94%±2.21%和14.34%±3.46%,两组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);组内术后12周骨长入率均高于术后8周,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MSCxj与原代培养hBMSCs一样具有良好的异位成骨能力,可作为骨组织工程的种子细胞进行相关实验及临床研究。