汉滩病毒重组核蛋白的克隆构建和活性初探

目的制备新型高效的基因工程重组抗原,用于汉滩病毒的快速诊断和分型诊断。方法聚合酶链反应(PCR)扩增得到汉滩病毒S基因的截短片段,将该片段克隆入原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达,将包涵体进行胶上回收,Western blotting分析其抗原性。结果纯化得到相对分子质量约为46×103的重组蛋白,可与肾病综合征出血热(HFRS)阳性血清发生反应,健康人血清为阴性对照。结论研究得到的重组核蛋白在HFRS的血清学诊断中具有一定的应用价值。

汉滩病毒感染神经元细胞模型的建立

目的 利用体外培养的昆明小鼠胚胎脑皮质神经元 ,感染汉滩病毒 (Hantaanvirus .HT NV) ,建立病毒感染的神经元细胞模型 ,供探讨病毒感染神经元后细胞的变化及损伤机制之用。方法 将孕 16～ 19d的昆明种小鼠胚胎皮质神经元正常培养存活后 ,感染汉滩病毒A9株造成细胞损伤模型。使用间接免疫荧光方法检测神经元荧光抗体阳性情况 ;利用MTT比色试验检测细胞存活情况 ;通过免疫组化方法观察神经细胞生长的情况。结果 病毒感染的神经元在继续培养一周时 ,间接免疫荧光检测反应阳性 ;MTT比色试验显示病毒感染组神经元活性明显下降 ;神经元特异性烯醇化酶(Neuronspeciaficenblase .HSE)免疫组化显示病毒感染组神经元胞体面积和突起长度均低于阴性对照组。结论 HTNV对神经元存在直接作用 ,使细胞在病毒感染后出现损伤性变化 。