汉防己甲素干预HIF-1α/PD-1/PD-L1轴抑制口腔鳞癌侵袭潜能的机制研究

目的探讨汉防己甲素(tetrandrine,TET)对口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞侵袭潜能的影响及其相关机制。方法将OSCC细胞随机分为4组:对照组(不加药物处理)、低剂量组(10μmol/L TET)、中剂量组(20μmol/L TET)、高剂量组(30μmol/L TET)。采用MTT法、划痕实验和Transwell实验分别测定各组细胞的活力、迁移及侵袭能力。对OSCC细胞分别转染缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、程序性细胞死亡蛋白1(programmed cell death protein 1,PD-1)及程序性细胞死亡蛋白1配体(programmed cell death ligand 1,PD-L1)模拟物及抑制剂,均连续转染24 h。采用RT-qPCR检测正常口腔上皮细胞、OSCC细胞以及转染HIF-1α、PD-1、PD-L1模拟物及抑制剂OSCC细胞中HIF-1α、PD-1、PD-L1 mRNA表达水平。通过Western blot检测各组细胞中纤维连接蛋白(Fibronectin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、HIF-1α、PD-1以及PD-L1蛋白表达水平。结果与对照组相比,低、中、高剂量组细胞活力、迁移及侵袭能力均被显著抑制(P<0.05),HIF-1α、PD-1、PD-L1 mRNA显著上调(P<0.05),Fibronectin、Vimentin、HIF-1α、PD-1、PD-L1蛋白水平随剂量增加逐渐下降(P<0.05),E-cadherin蛋白水平随剂量增加逐渐上升(P<0.05)。转染HIF-1α模拟物细胞的HIF-1α相对表达量及穿膜细胞数高于转染HIF-1α抑制剂细胞(P<0.05),转染PD-1模拟物细胞的PD-1相对表达量及穿膜细胞数高于转染PD-1抑制剂细胞(P<0.05),转染PD-L1模拟物细胞的PD-L1相对表达量及穿膜细胞数高于转染PD-L1抑制剂细胞(P<0.05)。结论TET可能通过抑制HIF-1α/PD-1/PD-L1轴,从而抑制OSCC细胞活力、迁移及侵袭能力,有望作为辅助治疗OSCC的新药。

汉防己甲素对胶原诱导的关节炎大鼠关节腔液中与外周血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的调节

目的观察汉防己甲素对胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠关节腔和外周血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,探讨汉防己甲素治疗CIA的相关机制。方法以胶原诱导的关节炎Wistar大鼠为动物模型,将大鼠分成正常组、模型组和汉防己甲素组。正常组、模型组注射0.9%氯化钠溶液,汉防己甲素组按80 mg/kg后腿肌肉注射,1次/d,30 d处死动物,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清和膝关节腔液中IL-1β、IL-6、TNF-α含量。结果与正常对照组相比,CIA模型组大鼠关节腔液和血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量升高(P<0.01);经过汉防己甲素治疗后,关节腔液和血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量降低,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.01),而与正常组比较,差异无显著性。结论汉防己甲素可以通过调节细胞因子变化而达到治疗CIA,这也可能是汉防己甲素治疗类风湿关节炎的机制之一。

汉防己甲素联合5-FU聚乳酸微球对兔PVR IL-1β和TNF-α表达的影响

目的:探讨汉防己甲素(tetrandrine,Tet)联合5-FU聚乳酸微球对兔增生性玻璃体视网膜病变(proliferati vevitreoretinopathy,PVR)IL-1β和TNF-α表达的影响。方法:随机分为A,B,C3组,建立兔眼外伤性PVR模型,向玻璃体中后部注入药物,A组注入含有Tet联合5-氟尿嘧啶(5-FU)聚乳酸微球的BSS悬浮液0.2mL,B组注入含有5-FU聚乳酸微球的BSS悬浮液0.2mL,C组注入25mg无药物聚乳酸微球的BSS悬浮液0.2mL,术后每天观察眼底变化,必要时行B超检查直到注药后第28d。分别于术后7,14,28d等3个时间点抽取各术眼玻璃体液0.2mL,酶联免疫吸附法(ELISA)检测玻璃体液中TNF-α,IL-2的含量。结果:Tet联合5-FU聚乳酸微球组与5-FU聚乳酸微球组及空白微球组相比,其玻璃体液中TNF-α,IL-2等炎性因子的含量也显著低于其他两组,方差分析P<0.01,差异有统计学意义。结论:Tet在眼内能够降低炎性因子TNF-α和IL-1β的表达,说明Tet可能通过在PVR炎症期发挥抗炎作用,抑制眼内炎症因子的释放,减弱炎症因子对炎性细胞的激活和趋化,从而起到降低PVR发生率的协同作用。

汉防己甲素对肾小球硬化大鼠肾脏转化生长因子β_1的影响

目的 :探讨汉防己甲素对肾小球细胞外基质 (ECM )和肾脏转化生长因子 β1 (TGF - β1 )表达改变的影响。方法 :用阿霉素加单侧肾切除制备肾小球硬化动物模型 ,随机分为正常组、肾小球硬化模型组、汉防己甲素组和络活喜组 ,用Northern印迹杂交观察肾TGF - β1 mRNA表达。结果 :两治疗组TGF - β1 mR NA表达均明显下调 ,肾小球ECM也明显减少。结果 :汉防己甲素通过下调TGF - β1 mRNA表达而减少肾小球ECM沉积 ,从而延缓肾小球硬化 ,该药的这一作用与西药络活喜类同。

汉防己甲素通过促进HIF-1α降解增强p53缺陷型非小细胞肺癌的放疗敏感性

目的:探讨汉防己甲素(tetrandrine,TET)增强非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)放疗敏感性的作用机制。方法:通过CCK-8法检测H1299和Calu-1细胞活力,并结合克隆形成实验检测在常规或缺氧条件下,TET对NSCLC放疗敏感性的影响。研究TET对NSCLC中由辐射和缺氧诱导的缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,并敲低HIF-1α基因进一步验证。通过逆转录聚合酶链反应(reverse tran⁃scription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、环己酰亚胺(cycloheximide,CHX)追踪及免疫沉淀法检测TET对HIF-1α降解的影响,并探讨p53在TET放疗增敏中的作用。结果:TET可显著增强p53缺陷型NSCLC细胞的放疗敏感性,而对p53野生型的细胞作用不明显。辐射和缺氧暴露后,TET明显抑制HIF-1α及VEGF的表达。TET可通过蛋白泛素化降解系统加速HIF-1α的降解。野生型p53基因转染到H1299细胞中可减弱TET抑制HIF-1α表达的作用。结论:TET通过促进HIF-1α降解抑制HIF-1α通路,使p53缺陷型NSCLC细胞对辐射敏感,而p53在TET诱导的HIF-1α降解中发挥抑制作用。

siRNA干扰即刻早期基因Egr-1对汉防己甲素诱导的胰腺癌细胞自噬、凋亡的作用研究

本实验将胰腺癌细胞Pa Tu8988分别转染无关干扰对照组(si RNA-Scramble)和干扰即刻早期基因Egr-1组(si RNA-Egr-1),再用不同浓度的汉防己甲素处理24 h后,CCK-8法检测不同浓度的汉防己甲素对细胞活力的影响;Western blot检测细胞自噬和凋亡相关蛋白表达水平的改变.结果表明:(1)低浓度的汉防己甲素能显著激活Pa Tu8988细胞自噬,但对增殖和凋亡无明显影响;(2)与对照组相比,转染了si RNA-Egr-1组自噬相关蛋白Be-clin-1表达量显著下降,LC3II/LC3I比值下调;凋亡相关蛋白Bcl2/Bax的比值降低.上述结果表明,干扰即刻早期基因Egr-1的表达可以有效抑制低浓度汉防己甲素引起的胰腺癌细胞Pa Tu8988自噬,促进细胞凋亡.

汉防己甲素对增生性瘢痕成纤维细胞MMP-1 mRNA表达的影响

目的观察汉防己甲素对增生性瘢痕来源的成纤维细胞的MMP-1mRNA表达的影响。方法培养增生性瘢痕来源的成纤维细胞,然后分别按终浓度为1、5、10mg/L加入汉防己甲素,继续培养24h,提取细胞内的RNA,经RT-PCR获得cDNA,再用MMP-1的特异性引物,通过PCR扩增,得到MMP-1的mRNA,并以β-actin为内参照物,进行琼脂糖凝胶电泳,最后用Band-scan扫描系统测定各产物密度值,用凝胶自动成像仪拍照。结果在汉防己甲素的作用下,成纤维细胞的MMP-1mRNA表达增加。结论汉防己甲素可使增生性瘢痕来源的成纤维细胞的MMP-1的mRNA转录增加,从而增加了MMP-1的合成,因而可能对增生性瘢痕具有预防和治疗作用。

汉防己甲素对口腔癌小鼠血清TGF-β1和PDGF水平的影响及相关机制研究

目的探究汉防己甲素对口腔癌小鼠血清转化生长因子-β1(TGF-β1)和血小板衍生生长因子(PDGF)水平的影响及相关机制。方法以30只雄性C57BL/6小鼠为研究对象,通过在小鼠腋窝皮下注射20μL的人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞悬液建立小鼠人口腔癌异种移植瘤模型,将小鼠根据实验目的分为模型组和汉防己甲素治疗组,各15只。通过小鼠酶联免疫吸附试验试剂盒检测其血清TGF-β1和PDGF水平。通过聚合酶链式反应检测小鼠移植瘤组织TGF-β1和PDGF的mRNA表达。通过免疫组织化学染色评估肿瘤组织的血管密度和血管周细胞覆盖率。通过TUNEL和免疫染色分析肿瘤细胞的凋亡、活力。测量肿瘤的最大直径和最大横向直径并计算体积。通过蛋白印迹分析小鼠肿瘤组织Erk1/2、Akt、Smad 2和Smad 3的蛋白表达。结果治疗组较模型组血清TGF-β1和PDGF水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗组较模型组肿瘤组织中TGF-β1和PDGF mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗组较模型组的血管密度和血管周细胞覆盖率降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗组较模型组细胞凋亡升高,细胞活力降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。第1周两组小鼠肿瘤体积比较差异无统计学意义(P>0.05),第2周和第4周,治疗组较模型组体积减小,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗组较模型组Erk1/2、Akt、Smad 2和Smad 3的蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论汉防己甲素通过PDGF/TGF-β1/Smad2/3信号通路下调口腔癌小鼠血清TGF-β1和PDGF水平,抑制异种移植肿瘤新血管形成,促进肿瘤细胞的凋亡,从而起到抗癌作用。

汉防己甲素诱导自噬抑制破骨细胞的分化

背景:已有研究表明汉防己甲素可以通过激活AMPK信号通路诱导细胞自噬从而抑制肿瘤细胞增殖,但目前汉防己甲素诱导破骨细胞自噬和分化的相关研究甚少。目的:探究汉防己甲素在不同浓度下对破骨细胞分化和自噬的影响,并分析诱导破骨细胞自噬能否起到抑制其分化的作用。方法:(1)第一部分:使用重组小鼠巨噬细胞集落刺激因子和核因子κB受体活化因子配体两种细胞因子对小鼠RAW264.7巨噬细胞进行诱导,使其向破骨细胞转化。细胞诱导及药物干预分组如下:空白对照组(完全培养基),阳性对照组(含两种细胞因子),低、中、高剂量汉防己甲素干预组(阳性对照组分别添加0.1,0.5,1.0μmol/L汉防己甲素)。抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察成熟破骨细胞数量变化;Western blot法检测组织蛋白酶K(CTSK)、自噬微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和自噬底物泛素结合蛋白(p62)的蛋白相对表达量;RT-PCR检测CTSK、LC3-Ⅱ和p62的mRNA相对表达量;丹酰尸胺(MDC)染色观察诱导过程中破骨细胞中自噬小体的数量变化。(2)第二部分:选取抑制破骨细分化效果最明显的汉防己甲素浓度(1.0μmol/L)进行回复性验证。各组处理如下:阳性对照组(含两种细胞因子),自噬抑制剂组(巴佛洛霉素处理),药物干预组(汉防己甲素干预),药物干预+自噬抑制剂组。抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察成熟破骨细胞数量变化;Western blot法检测CTSK的蛋白相对表达量。结果与结论:(1)一定浓度汉防己甲素能够对破骨细胞的分化起抑制作用,并且抑制作用随药物浓度升高而提升;(2)汉防己甲素在一定浓度下能够激发破骨细胞分化过程中自噬标志物的表达及减少自噬特异性底物累积,并在破骨细胞分化过程中可刺激自噬小体形成;(3)使用自噬抑制剂后,汉防己甲素抑制破骨细胞分化的作用受到显著影响;(4)综上,一定浓度的汉防己甲素能够通过激活自噬抑制破骨细胞的分化。

汉防己甲素对兔PRK术后房水TGF-β1的影响

目的 探讨汉避孕药已甲素抑制PRK术后角膜上及下雾状混浊形成的可能性.方法 健康新西兰大耳白兔60只,雌雄不限.随机分为汉防己甲素实验组（0.05%,0.1%,0.2%）,艾氟龙阳性对照组,生理盐水阴性对照组.于PRK术后1周,2周,1个月,2个月用ELISA法检测兔房水TGF-β1的表达.结果 PRK术后1周兔房水中TGF-β1含量开始升高,于术后2个月仍处于较高水平;汉防己甲素各浓度组房水TGF-β1含量均低于艾氟龙和生理盐水组,差异有显著性意义（P〈0.01）.结论 汉防己甲素可能是通过下调PRK术后TGF-β1的表达而发挥其对角膜上及下雾状混浊的抑制作用.

多抗甲素对小鼠IL-1生长及反应性的影响

本文探讨我国新近开发的抗生素多抗甲素对小鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素1(IL-1)生成及淋巴细胞对IL-1反应性的影响,结果发现: 1.在0.01—100μg/ml的浓度范围内,多抗甲素在体外能提高C57BL/3小鼠腹腔巨噬细胞在大肠杆菌脂多糖(LPS)作用下分泌IL-1的能力。

多抗甲素对人类单核细细IL-1生成及淋巴细胞IL-1反应性的促进作用

新抗生素多抗甲素对免疫功能有明显的促进作用,其作用机理包括促进白细胞介素2(IL-2)的分泌及反应性。最近我们又发现多抗甲素在体外和体内均能促进小鼠腹腔巨噬细胞分泌白细胞介素1(IL-1)。

汉防己甲素及1,6—二磷酸果糖对缺血在体大鼠脑纹状体外游离氨基酸的影响

本文应用在体微灌流技术和氨基酸自动分析系统研究了汉防已甲索(Tet)及1,6—二磷酸果糖单用及合用对缺血大鼠脑致状体神经细胞外游离氨基酸的影响。结果表明:Tet15mg/kg、MK801 2.0mg/kg和Tet

汉防己甲素对放射性肺炎的干预作用及对转化生长因子-β1和白细胞介素-6的影响

目的探讨汉防己甲素对放射性肺炎的干预作用及对转化生长因子-β1(TGF-β1)和白细胞介素-6(IL-6)的影响。方法选择2017年6月至2020年12月南京市胸科医院收治的75例放射性肺炎患者作为研究对象。按照随机数字表法分为对照组(37例)和试验组(38例),对照组进行常规治疗,试验组在常规治疗的基础上口服汉防己甲素,两组均连续治疗2周。对比治疗前后的肺活量(VC)、第1秒用力呼气量(FEV_(1)),血清TGF-β1、IL-6水平。结果治疗后,试验组总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗后两组VC、FEV_(1)高于治疗前,TGF-β1、IL-6低于治疗前,且试验组VC、FEV_(1)高于对照组,TGF-β1、IL-6低于对照组(P<0.05)。两组均未出现明显药物相关不良反应。结论汉防己甲素具有改善放射性肺炎症状,降低放疗引起的炎症反应。

汉防己甲素调控Chk1基因对宫颈癌细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响

目的研究汉防己甲素对宫颈癌细胞增殖、凋亡和放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法以不同浓度(0.01μg/ml、0.10μg/ml、1.00μg/ml、5.00μg/ml、10.00μg/ml)汉防己甲素处理Hela细胞,MTT法检测细胞增殖;5.00μg/ml汉防己甲素处理Hela细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率,qRT-PCR和western blot检测Chk1的表达,克隆形成实验检测各组细胞放射敏感性。转染Chk1 siRNA至Hela细胞,检测细胞增殖、凋亡和放射敏感性。转染pcDNA-Chk1至Hela细胞,并用5.00μg/ml汉防己甲素处理48 h,检测细胞增殖、凋亡和放射敏感性。结果汉防己甲素能明显抑制Hela细胞的增殖,且呈浓度依赖性;与对照相比,5.00μg/ml汉防己甲素可明显提高细胞凋亡率,增强Hela细胞放射敏感性,抑制Chk1的表达(P<0.05)。沉默Chk1基因可显著抑制Hela细胞的增殖,促进细胞凋亡,增强放射敏感性(P<0.05)。过表达Chk1逆转了汉防己甲素对Hela细胞增殖、凋亡和放射敏感性的影响。结论汉防己甲素可抑制Hela细胞的增殖,促进细胞凋亡,增强细胞放射敏感性,其机制可能与调控Chk1的表达有关,将可为宫颈癌的治疗提供新依据。

汉防己甲素联合大剂量乙酰半胱氨酸治疗对矽肺患者血清sIL-2R、IL-6、TNF-α水平的影响

目的探讨汉防己甲素联合大剂量乙酰半胱氨酸(NAC)治疗对矽肺患者血清可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)、IL-6、TNF-α水平的影响及临床意义.方法选取我院60例矽肺患者为研究对象,根据不同的治疗方案,分为对照组(30例)和治疗组(30例),对照组予以基础治疗,治疗组在对照组基础上予以汉防己甲素联合大剂量NAC治疗.观察两组患者治疗前后肺活量(FVC)、第1秒用力呼气量(FEV_(1))及血清sIL-2R、IL-6、TNF-α水平变化.结果治疗后治疗组FVC、FEV_(1)均高于对照组(P<0.05),血清sIL-2R、IL-6、TNF-α水平均低于对照组(P<0.05).结论汉防己甲素联合大剂量NAC能明显改善矽肺患者肺功能,其作用机制可能与其降低血清sIL-2R、IL-6、TNF-α含量有关.

汉防己甲素预防K562细胞获得性耐药机制的研究

本研究从MDR1基因转录调控和细胞凋亡两方面探讨汉防己甲素(TTD)预防K562细胞阿霉素(ADM)诱导性多药耐药(MDR)产生的作用机制。本实验分3组,第1组为K562细胞空白对照组;第2组用ADM作用K562细胞24小时诱导细胞耐药;第3组采用TTD预处理K562细胞24小时后,再用ADM诱导耐药。采用RT-PCR检测各组细胞转录因子c-Jun、YB-1及Survivin的mRNA表达水平;Western blot法检测c-Jun、YB-1的核内蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞的凋亡程度。结果表明,0.6μg/ml阿霉素作用后K562细胞MDR1基因转录上调;与空白对照组(第1组)相比,ADM诱导的耐药细胞组(第2组)c-Jun mRNA和蛋白表达减低(p均<0.05),YB-1 mRNA和蛋白表达明显上调(p均<0.05);Survivin mRNA表达无明显差异(p>0.05);细胞凋亡率(8.31%)比空白对照组(0.75%)稍有增加;TTD预处理后再用ADM诱导组(第3组)与ADM作用组相比,c-Jun mRNA和蛋白表达增加(p均<0.05);YB-1 mRNA和蛋白表达下调(p均<0.05);Survivin mRNA表达明显减少(p<0.05),细胞凋亡率(97.2%)明显增加。结论:TTD预防白血病细胞耐药形成的机制可能与其下调YB-1基因和蛋白的表达、上调c-Jun基因和蛋白的表达,从而下调MDR1基因表达有关,另外,TTD与ADM联合作用还能抑制Survivin的表达,增加白血病细胞的凋亡。

汉防己甲素延缓肾小球硬化机理的实验研究

目的探讨汉防己甲素对肾小球硬化大鼠肾脏转化生长因子(TGF_β1)基因表达的影响。方法27只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、肾小球硬化模型组、汉防己甲素组和氨氯地平组 ,用单侧肾切除加2次注射阿霉素制备肾小球硬化动物模型 ,用Northern印迹杂交 ,观察肾皮质TGF_β1 mRNA表达。结果汉防己甲素使肾小球硬化大鼠肾皮质TGF_β1 mRNA表达较模型组明显下调 ,肾小球细胞外基质较模型组明显减少。结论汉防己甲素通过下调TGF_β1表达而减少肾小球ECM沉积 ,从而延缓肾小球硬化。

汉防己甲素对尘肺病患者疗效探究

目的探究汉防己甲素对尘肺病患者的疗效。方法选择62例中重度肺功能损伤的尘肺合并感染患者随机分为对照组和实验组,两组戒烟、氧疗、营养支持、肺功能康复等基础治疗措施相同。对照组给予常规基础治疗(抗感染、止咳化痰平喘);实验组在上述常规治疗的基础上给予汉防己甲素口服治疗,单疗程3个月,设计疗程12个月。结果实验组患者治疗3个月后肺功能与对照组比较有明显差异;实验组患者12个月后肺功能虽下降,但下降速率较对照组减慢;实验组急性加重次数较对照组减少;实验组患者痰液中IL-1、TNF-α水平明显低于对照组,有显著性差异。结论在常规疗法的基础上联用汉防己甲素治疗尘肺病,早期可明显改善尘肺患者肺功能,长期可降低肺功能下降速率,减少尘肺病急性感染加重次数,减少患者痰液中免疫调节因子IL-1、TNF-α的含量。

汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞相关因子分泌的影响

目的观察翼状胬肉组织块分泌的相关因子变化,了解汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对翼状胬肉病变的作用。方法收集初发翼状胬肉(实验组)和正常球结膜组织块(对照组)体外培养上清液,ELISA检测上清液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的含量及10-5mol.L-1Tet作用48h实验组中各因子含量的变化。结果实验组上清液中VEGF含量较对照组高(P<0.01);加入Tet作用48h后明显下降(P<0.01),与对照组上清液中VEGF含量无差异(P>0.05)。2组上清液中IL-1β的含量相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论VEGF在翼状胬肉新生血管形成中发挥着重要作用。汉防己甲素对翼状胬肉组织中VEGF的分泌有明显抑制作用,有良好的应用前景,但IL-1β在翼状胬肉中的作用仍需进一步研究。