壮药汗衣台对鸭乙型肝炎的治疗作用

目的:探讨壮药汗衣台对鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus,DHBV)感染诱导的鸭乙型肝炎模型中肝功能、病毒复制、免疫调控及肝组织炎症方面的作用.方法:本研究采用DHBV阳性血清腹腔注射感染广西1日龄麻鸭诱导鸭乙型肝炎模型.于用药前(T0),用药7 d(T7),14 d(T14)及停药3d(P3)于颈静脉抽血,分别检测鸭血清中的谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、白介素-2(interleukin-2,IL-2)、DHBV DNA及肝组织病理.结果:模型组感染病毒1-2 wk,鸭血清ALT、AST与IL-2水平明显升高(P=0.028,0.036;P=0.005,0.04;P=0.045),病毒载量表达平稳,鸭肝组织病理检测显示重度脂肪样变性;拉米组治疗1-2 wk,鸭血清ALT、IL-2水平明显下降(P=0.001,0.042;P=0.023),但对AST水平无明显影响,病毒载量被显著抑制,停药3 d无反跳(P=0.034;P=0.007;P=0.013),肝组织病理提示中度以上脂肪变性;汗高组治疗1-2 wk,鸭血清ALT、AST和IL-2水平均明显降低(P=0.047,0.035;P=0.007,0.003;P=0.026,0.049),对病毒的抑制疗效与拉米组相似(P=0.025;P=0.012;P=0.011),肝组织病理显示中度脂肪变性;汗常组治疗1-2 wk,鸭血清ALT、AST及IL-2水平均明显降低(P=0.015;P=0.038;P=0.024,0.004),但在T14时,ALT、AST水平均出现回升,病毒载量呈缓慢下降趋势,肝组织病理提示中度以上脂肪变性.结论:汗衣台剂量依赖性的降低转氨酶、抑制DHBV DNA复制、减少IL-2分泌,从而保护肝细胞、减轻肝脂肪变性、降低免疫过强所导致的急性肝损伤.

壮药汗衣台配伍组方体外抗乙型肝炎病毒的疗效

目的:检测乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)抗原和HBV DNA,比较壮药汗衣台的复方制剂与单味药在抗乙型肝炎病毒方面的疗效.方法:根据壮族民间常用的经验组方,不同浓度汗衣台及其配伍药分别与体外培养的2215细胞共同孵育,以XTT方法检测他们对2215细胞的毒性作用,选择各种药物对细胞无明显毒害的浓度进行组配;3d更换一次含药培养液,9d后收集上清液;用ELISA法测定上清液中乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)和乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)含量,荧光定量PCR法检测上清液中HBV-DNA的分泌.结果:复方组对HBsAg抗原的抑制作用稍高于单药组,但统计学上无显著意义;中低浓度的复方制剂F3-F5抑制HBeAg以及HBV-DNA分泌的作用明显强于相对应浓度的汗衣台单药组(P=0.002-0.009;P=0.038-0.05),而且抑制HBV-DNA分泌的疗效明显优于高浓度的复方制剂F1-F2(P=0.048-0.015).结论:组方配伍后,中低浓度的复方制剂抗病毒的综合疗效优于相对应浓度汗衣台单味药及高浓度复方制剂,各种药物成分相互影响、协同作用,不仅可以降低单个药物浓度,而且可以产生叠加增效作用.

壮药汗衣台体外抗乙型肝炎病毒的疗效

目的:研究汗衣台体外抗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的疗效.方法:不同浓度汗衣台与体外培养的2.2.15细胞共同孵育,以XTT方法检测其对2.2.15细胞的不良反应,以此决定汗衣台的安全浓度范围;3d更换一次含药培养液,9d后收集上清液;用ELISA法测定上清液中HBsAg和HBeAg含量,荧光定量PCR法检测上清液中HBV DNA的分泌.结果:各浓度汗衣台对HBsAg、HBeAg均有明显抑制作用,抑制率呈剂量依赖性:500-800μg/mL汗衣台对HBsAg的抑制明显高于同浓度的拉米夫定(P=0.002-0.000)及干扰素(P=0.006-0.003),100-800μg/mL浓度汗衣台对HBeAg的抑制明显高于同浓度拉米夫定(P=0.002-0.000)及干扰素(P=0.003-0.002),差异均有显著性.各浓度汗衣台对HBV DNA抑制亦呈剂量依赖性,500-800μg/mL浓度汗衣台短期内抑制HBV DNA分泌的疗效优于同浓度干扰素(P=0.018-0.031),但不如拉米夫定.结论:壮药汗衣台具有一定的体外抗HBV作用.

壮药汗衣台抗HBV有效成分分析及对HBVDNA、HBVcccDNA的影响

目的:了解汗衣台抗HBV有效成分及对HepG2.2.15细胞HBVcccDNA和HBVDNA的影响。方法:对汗衣台分离提取及HPLC-ESI-MS/MS测定,发现6种含量较高的有效成分:古伦宾、异古伦宾、掌叶防己碱、蝙蝠葛碱、非洲防己碱、药根碱。予各有效成分标准品不同浓度作用于2.2.15细胞,孵育9天,取上清ELISA法测定HBsAg和HBeAg含量;荧光定量PCR法检测HBVDNA;提取细胞总DNA并以PSAD酶消化后选择性荧光定量PCR法检测HBVcccDNA;后两者抑制率做相关性分析。结果:全部浓度的异古伦宾(10~160μmol/L)、非洲防己碱(10~160μmol/L)、蝙蝠葛碱(0.25~10μmol/L)、药根碱(20~320μmol/L)以及40~160μmol/L浓度的古伦宾、50~400μmol/L掌叶防己碱对HBsAg有明显抑制作用,40~160μmol/L浓度非洲防己碱、5μmol/L蝙蝠葛碱、80~320μmol/L药根碱及200~400μmol/L的掌叶防己碱对HBeAg有明显抑制作用;全部浓度的异古伦宾、药根碱,20~160μmol/L的古伦宾、160μmol/L非洲防己碱及400μmol/L浓度掌叶防己碱、5~10μmol/L蝙蝠葛碱对HBVDNA具有抑制作用,抑制率均不高;所有有效成分在较低浓度以上对HBVcccDNA均具有抑制作用,抑制率普遍较高,呈剂量依赖性,160μmol/L的非洲防己碱抑制率39.55%超过干扰素21.44%,200μmol/L的掌叶防己碱抑制率29.55%超过干扰素及拉米夫定24.6%;HBVDNA与HBVcccDNA相关性比较情况复杂,趋势一致但程度差异较大。结论:汗衣台6种主要成分均具有不同程度的抗HBV作用,均可视为抗HBV的有效成分。6种有效成分不同程度抑制HBVDNA复制,对HBVcccDNA的抑制呈剂量依赖性;上清HBVDNA检测并不能完全代表细胞内HBVcccDNA情况。

壮药汗衣台有效成分古伦宾、非洲防己碱对HBV启动子的影响

目的:通过汗衣台抗HBV有效成分古伦宾、非洲防己碱对4种HBV启动子的影响研究,进一步探讨汗衣台抑制HBV病毒复制的可能机制。方法:采用CCK8法检测古伦宾、非洲防己碱对Hep G2细胞的增殖毒性,以确定它们的安全浓度;人工合成法、基因扩增法分别构建经典型和突变型的4种HBV启动子(S1p,S2p,Cp,Xp)调控的含荧光素酶报告基因的表达重组质粒(p Cp-Luc,p S1p-Luc,p S2p-Luc,p Xp-Luc),脂质体转染Hep G2细胞8h后,分别加入不同安全浓度的古伦宾、非洲防己碱进行干预处理,于24h、48h结束干预后进行双荧光素酶检测。结果:古伦宾对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为中度(16.4%)、轻度(10.0%)、重度(20.2%,p=0.298)、明显抑制(8.9%,p=0.047);非洲防己碱对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为中度(16.8%)、中度(17.7%)、重度(25.2%,p=0.199)、明显抑制(8.6%,p=0.05);阳性对照干扰素组对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为中度(15.1%)、重度(22.3%)、重度(24.0%)和中度抑制(6.2%);拉米夫定对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为重度(20.7%)、中度(13.4%)、中度(12.1%)和明显抑制(9.9%,p=0.046)。基因扩增法构建的4个HBV启动子S1p,S2p,Cp,Xp分别有1,1,4,4个突变点,突变后的启动子转录效率提高1.3倍~2.2倍(48 h组),但是,药物的抑制效率没有按相应比例提高,从这一角度来看,古伦宾、非洲防己碱、干扰素和拉米夫定对突变启动子的抑制作用除对Xp有明显提高外(2.3倍~3.5倍),对其余突变启动子均无明显变化甚至抑制作用下调(1/10~2/5)。结论:汗衣台抗HBV有效成分古伦宾、非洲防己碱对经典型和突变型的4种HBV启动子Cp,S1p,S2p,Xp均有不同程度的抑制作用,与干扰素和拉米夫定类似。四种药物对Xp尤其是突变型Xp有明显抑制作用,其中以干扰素最显著,提示汗衣台除了通过抑制启动子活性抗HBV以外,可能还通过抑制Xp启动子活性,继而下调X蛋白的表达,从而对HBV相关性肝癌的发生有预防作用。