离子色谱法测定酒石酸沃尼妙林中酒石酸的含量

建立离子色谱-抑制电导检测法测定化学对照品中酒石酸盐的含量。以酒石酸沃尼妙林对照品为例,采用Dionex IonPac^(TM) AS19(4×250 mm)阴离子交换色谱柱和Dionex IonPac^(TM) AG18(4×50 mm)保护柱,以22 mmol/L氢氧化钾溶液为流动相,流速为1.0 mL/min等度洗脱,抑制电导检测器检测,测定酒石酸盐中酒石酸的含量。结果表明,该方法在1.0~50μg/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.999),定量限为0.5μg/mL,酒石酸沃尼妙林在3个水平的加样回收率分别为98.79%、98.91%与96.50%,平均回收率为98.07%(RSD=2.20%,n=9)。用此方法测定3个厂家共5批样品,酒石酸沃尼妙林中酒石酸含量的数值与理论值基本一致。本文建立的离子色谱法准确、灵敏,可用于酒石酸盐成盐比例与含量的测定。

盐酸沃尼妙林的全合成研究

以异丁醛为起始原料,经氨加成、硫粉氧化关环、双键还原、开环四步反应自制得到重要中间体1-氨基-2-甲基丙-2-硫醇盐酸盐(二甲基半胱胺盐酸盐),收率72.2%。再将L-缬氨酸在D-氨基酰化酶的作用下转为D-缬氨酸,收率46%。D-缬氨酸经成盐、胺化得到中间体D-缬氨酸邓盐,最后苯磺酰化截短侧耳素与1-氨基-2-甲基丙-2-硫醇盐酸盐发生亲核反应,然后与氨基保护的缬氨酸进行酰胺化反应,最后脱掉保护基,用盐酸处理,采用溶媒结晶的方法提纯,即得到盐酸沃尼妙林,总收率88.2%,产物结构经核磁氢谱、碳谱进行表征。本研究概括了盐酸沃尼妙林的全合成工艺路线,该法大大降低了生产成本,已适用于工业化生产。

沃尼妙林的合成进展

简要介绍了沃尼妙林的药物学、抗菌机理以及抗菌活性及毒性研究。重点阐述了沃尼妙林的3种合成方法,分析了合成方法中存在的问题,为其合成研究提供了参考。

沃尼妙林的研究进展

简要介绍了沃尼妙林的合成与发展,阐述了沃尼妙林的药物学、药理学以及毒理学特征,分析了沃尼妙林应用中存在的问题和未来研究趋势,以便兽医药科技工作者全面了解沃尼妙林,进而用以指导临床应用。

液相色谱-串联质谱法测定鸡组织中沃尼妙林残留

建立了鸡组织中沃尼妙林残留的液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)检测方法。样品用乙腈提取后,过Strata-X-C固相萃取小柱净化。以乙腈-0.1%甲酸水溶液(35:65,V/V)为流动相,经LunaC18色谱柱分离,采用电喷雾电离,多反应监测(MRM)正离子模式对沃尼妙林进行定性与定量分析。采用基质匹配法,对鸡皮肤、肌肉、肾脏和肝脏中沃尼妙林的含量进行标准校正,在5(7.5)～500μg/kg范围内线性良好(r>0.998),在鸡肝脏中的检出限(LOD)及定量限(LOQ)分别为4.0和7.5μg/kg;其它3种组织中的LOD及LOQ分别为2.5和5.0μg/kg。在5(7.5),50及500μg/kg添加水平下,4中组织中沃尼妙林的平均回收率为78.5%～104.0%。日内相对标准偏差(RSD)为1.2%～9.8%,日间相对标准偏差为3.7%～13.2%。

超高压液相色谱-串联质谱法测定肉类中沃尼妙林和泰妙菌素的残留量

建立了固相萃取-高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定肉类中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的分析方法。样品用乙腈提取,OasisMCX SPE小柱净化,经C18色谱柱分离,以电喷雾离子源(ESI)在正离子多反应监测(MRM)模式下进行测定,外标法定量。沃尼妙林和泰妙菌素的检出限均为0.04μg/kg,定量下限均为0.1μg/kg,在0.1～50.0μg/L内线性关系良好,相关系数r均大于0.99。在0.1～10.0μg/kg的加标水平内的回收率为80%～94%,RSD为4.5%～8.2%。该方法实用、准确、灵敏,适用于肉类中沃尼妙林和泰妙菌素残留量的测定。

盐酸沃尼妙林预混剂的研制及其对猪增生性肠的炎疗效观察

以盐酸沃尼妙林为原料,利用流化床制粒包衣技术成功制备微丸型盐酸沃尼妙林预混剂,用HPLC测定制剂中主药含量。结果表明,制得的产品粒度均匀、流动性良好、含量稳定。选用猪增生性肠炎的自然发病猪为试验对象,以延胡索酸泰妙菌素疗效为对照。结果显示,试验组的高中低不同剂量组(中剂量为推荐剂量)与对照组对猪增生性肠炎治愈率分别为91.0%、82.0%、66.7%和75.3%,有效率分别为96.7%、88.7%、76.7%和83.6%,相同推荐剂量的微丸型盐酸沃尼妙林预混剂组的治愈率和有效率均高于泰妙菌素预混剂组(P<0.05)。

沃尼妙林在电喷雾质谱中的行为研究

采用电喷雾质谱研究沃尼妙林在正负离子模式下电离的碎裂行为。在正离子模式下进行一级质谱全扫描时,主要得到[M+H]+m/z565.7的分子离子峰,负离子模式主要得到[M-H]-m/z563.5的分子离子峰,正离子的响应值远高于负离子。以[M+H]+为母离子进行二级质谱扫描,在适当的碰撞能下,主要得到m/z263.2、285.3、303.3三个碎片离子峰,其中m/z263.2的丰度明显高于另外2个碎片离子。并分析了沃尼妙林的碎裂机理,为进一步研究其构效关系、药物分析及残留检测等提供依据。

固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中沃尼妙林和泰妙菌素

本试验旨在建立一种高效快速测定饲料中沃尼妙林和泰妙菌素的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱方法。用甲醇提取饲料中的沃尼妙林和泰妙菌素,经过Oasis MCX固相萃取柱净化后,由C18色谱柱分离,流动相为水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱,以电喷雾离子源(ESI)正离子扫描方式,在多反应监测(MRM)模式下进行测定,外标法定量。结果表明:本试验建立的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法对饲料中沃尼妙林和泰妙菌素的检测限分别为25.0和5.0 ng/g。沃尼妙林和泰妙菌素浓度在0.01~5.00μg/m L范围内线性关系良好,相关系数(R2)均大于0.99。在3个添加水平(2.5、25.0、125.0 mg/kg)下,沃尼妙林的回收率为85.17%~94.55%,相对标准偏差(RSD)为2.56%~7.65%,泰妙菌素的回收率为84.69%~99.36%,RSD为1.57%~4.95%。结果表明,本试验建立的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法操作简单、准确度高,可应用于饲料中沃尼妙林和泰妙菌素的快速定量测定。

沃尼妙林注射液的研制

以含量测定为指标,通过均匀设计试验进行处方筛选,同时优化制备工艺;用高效液相色谱(HPLC)法对沃尼妙林注射液的含量进行检测;通过经典恒温加速试验,进行初步的稳定性试验研究。结果,优选得到的注射剂的工艺处方组成稳定。HPLC法的回收率为99.59%,检测限为0.030 4μg/mL,定量限为0.085 2μg/mL,回归方程y=1E+06x-25 120,相关系数r2=0.999 7。结果表明,研发的沃尼妙林注射液较稳定,适合产业化生产。

盐酸沃尼妙林包衣颗粒预混剂的制备及评价

为了改善盐酸沃尼妙林的适口性、降低刺激性以及提高稳定性,采用流化床制粒、包衣技术制备盐酸沃尼妙林包衣颗粒预混剂,正交试验法进行工艺参数的筛选,通过包衣效果试验和稳定性试验进行考察,筛选出最佳生产工艺。在此优化工艺条件下制得的盐酸沃尼妙林包衣颗粒预混剂临床适口性好、质量稳定。本品处方合理,制备工艺简单,为大规模生产提供了依据。

盐酸沃尼妙林的工艺研究

以截短侧耳素为起始原料,首先与二甲基半胱胺盐酸盐进行相转移催化反应,然后与氨基保护的缬氨酸进行酰胺化反应,最后脱掉保护基,用盐酸处理,即得到盐酸沃尼妙林,收率54.9%,产物经红外光谱和核磁氢谱进行了确证。本方法更加适合于工业化生产。

盐酸沃尼妙林预混剂对猪气喘病的临床疗效试验

进行了盐酸沃尼妙林预混剂对猪气喘病的疗效试验。结果显示:以盐酸沃尼妙林预混剂300 mg/kg和400 mg/kg两种剂量混饲给药,对猪气喘病均有显著效果。盐酸沃尼妙林预混剂可有效控制猪体内的肺炎支原体病原,促进肺炎支原体所致肺组织病变的好转,甚至临床治愈,从而改善气喘病猪的症状。

静态顶空气相色谱-质谱法测定盐酸沃尼妙林中有机溶剂残留量

建立了测定盐酸沃尼妙林中丙酮、乙酸乙酯、甲基叔丁基醚残留的静态顶空气相色谱-质谱联用方法。将样品和参照品溶于水,在顶空瓶中加热进样,对于不同溶剂,该方法的回收率范围为85.38%～110.15%,相对标准偏差为1.98%～3.64%。丙酮、乙酸乙酯、甲基叔丁基醚残留的最低检出限分别为0.02、0.01、0.002μg/g。通过对实际样品的检测,证明该方法简单、灵敏、可靠,适用于盐酸沃尼妙林中有机溶剂残留的分析。

固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定禽畜和水产品中沃尼妙林和泰妙菌素

建立了固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定禽畜和水产品中沃尼妙林、泰妙菌素残留量的分析方法。匀浆样品用乙腈水提取,经盐析和乙腈饱和正己烷除脂后过Oasis MCX SPE小柱净化,采用LC-MS/MS电喷雾电离（ESI）和多反应监测模式（MRM）检测,外标法定量。沃尼妙林和泰妙菌素的检出限均为1.0μg/kg,在1.0～100μg/kg范围内线性关系良好,相关系数r均大于0.99。在1.0～50.0μg/kg的加标水平内的回收率为80.9%～104.3%,RSD为4.7%～7.8%。

超高效液相色谱-串联质谱快速检测猪肉中的沃尼妙林残留

建立了检测猪肉样品中新型兽药盐酸沃尼妙林残留的快速超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）确证方法。样品使用乙腈提取,在提取过程中同时加入正己烷去除脂质杂质,离心后取乙腈提取液,浓缩至干,用1 mL 0.1%甲酸水∶乙腈（60∶40,V∶V）复溶上机。以反相C18柱作为分离柱,0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水为流动相,进行梯度洗脱。方法的检测限为10μg/kg,定量限为20μg/kg;在三个浓度水平（20、50、100μg/kg）下进行添加实验,平均回收率均大于92.60%,批内相对标准偏差为1.31%~6.80%,批间相对标准偏差为3.02%~4.60%。此方法简便迅速且稳定有效,适合快速检测猪肌肉中的沃尼妙林残留。

盐酸沃尼妙林软膏剂的制备及抗金黄色葡萄球菌效果研究

为研究制备盐酸沃尼妙林软膏剂及其体外透皮释药性和抗金黄色葡菌球菌感染的效果,采用乳化法分别制备W/O型和O/W型盐酸沃尼妙林软膏剂,并用高效液相色谱法测定2种软膏剂中盐酸沃尼妙林体外透皮释药率。制备的W/O型和O/W型盐酸沃尼妙林软膏剂质量均稳定,W/O型和O/W型盐酸沃尼妙林软膏剂10h的体外透皮释药率分别为30%±0.42%和18.45%±0.69%;W/O型与O/W型盐酸沃尼妙林软膏剂对金黄色葡萄球菌引起的小鼠皮下感染均有治疗效果,但W/O型软膏剂治疗效果更显著。

UPLC/Q-TOF MS鉴定沃尼妙林在大鼠体内的代谢产物

利用超高效液相色谱/四级杆-飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS)分析鉴定了VLM在大鼠体内的代谢产物,并讨论了VLM在大鼠体内的代谢途径。按20 mg/kg体重的剂量,给Sprague-Dawley大鼠口服灌食沃尼妙林(VLM),分别采集给药前及给药后的尿液样品。采用UPLC/Q-TOF MS对样品进行分析,代谢物数据经MetaboLynx XS软件处理后,根据常见代谢途径的准确质量数变化对代谢产物进行筛选,利用代谢物的MS/MS信息鉴定了五种代谢产物,并确定VLM代谢途径包括母核羟基化和侧链硫醚键氧化等。研究结果表明,VLM在大鼠体内代谢迅速,母核的羟基化是主要的代谢途径。

沃尼妙林对脂多糖诱导急性肺损伤小鼠的保护作用

为了研究预先服用沃尼妙林对急性肺损伤(ALI)的作用,试验采用脂多糖(LPS)诱导建立了小鼠炎症ALI模型;制备支气管肺泡灌洗液(BALF)以检测蛋白浓度、细胞因子水平以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;收集肺组织测定湿干重(W/D)比率、髓过氧化物酶(MPO)活性,观察组织学的变化。结果表明:预先服用沃尼妙林显著降低了肺组织的W/D比率、蛋白浓度和白细胞数,组织学分析表明减弱了组织损伤;沃尼妙林使BALF中SOD的水平显著升高,减弱了肺脏中MPO的活性,抑制了肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)等炎性细胞因子的产生。说明了沃尼妙林对LPS诱导的ALI小鼠具有保护作用。

血浆中沃尼妙林HPLC-ESI-MS/MS方法的建立

为了研究血浆中沃尼妙林的检测方法,试验采用液液萃取进行HPLC-ESI-MS/MS分析。结果表明:线性范围为5～500ng/mL(r=0.9997);定量限为5ng/mL,回收率均在90%以上;批内、批间变异系数均小于15%。说明试验建立的检测方法既简便经济,又高效灵敏,且能满足沃尼妙林血药浓度检测和药代动力学研究的要求。