热沉淀纯化对促凋亡铁蛋白纳米粒活性的影响

目的设计促凋亡铁蛋白纳米粒BAK-HFn,并探究热沉淀纯化对其活性的影响。方法设计与构建促凋亡活性蛋白纳米粒BAK-HFn,验证其成功可溶表达,采用热沉淀纯化以及非热沉淀纯化两种方式对其进行纯化,并用动态光散射法测定纯化后纳米粒的粒径,采用CCK-8法检测纯化后BAK-HFn对肿瘤细胞C6的细胞毒性。结果用热沉淀纯化后的BAK-HFn蛋白几乎不抑制C6细胞的生长,而非热沉淀纯化法获得的BAK-HFn蛋白促凋亡的活性明显提高。结论热沉淀纯化会使经过BAK修饰的促凋亡铁蛋白纳米粒降低甚至丧失活性。

用茶末及废茶枝叶提取高纯茶多酚的研究

本文研究了以茶末和废枝叶为原料提取茶多酚的工艺。工艺流程为:(1)原料经微沸水浸提后加入碳酸氢铵调pH至中偏酸性后用硫酸锌沉淀纯化;(2)然后用硫酸解析溶解沉淀,加入乙酸乙酯进行萃取,分相后,水相(硫酸锌溶液)循环供沉淀纯化用,有机相(乙酸乙酯+茶多酚)真空分离、干燥制取高纯茶多酚,萃取剂乙酸乙酯回收循环使用;茶末、废茶枝叶和碳酸氢铵、硫酸进行茶多酚的浸提和纯化后,以有机多元复肥形式回收综合利用。茶多酚的综合提取率大于13%,质量达到GTP-l(大于95%)要求。

转基因玉米中植酸酶蛋白免疫亲和纯化体系的建立

为深入研究转基因玉米所表达的植酸酶蛋白的酶学性质,评价重组蛋白的致敏性和饲用安全性,必须获得高纯度植酸酶蛋白。利用识别4个不同表位的单克隆抗体制备了植酸酶蛋白亲和层析体系。结果显示,通过80%硫酸铵沉淀植酸酶蛋白粗提液初步浓缩目的蛋白后,再经过透析去除高浓度盐离子,进而通过免疫亲和层析可获得在SDS-PAGE胶上条带单一的植酸酶蛋白,比活可达470.99 U/mg。同时,将上述免疫亲和层析法对植酸酶的纯化效果与离子交换层析方法进行了对比,结果表明免疫亲和层析法具有稳定、快速和纯化产物比活高等优势,所获得的目的蛋白满足各种检测要求,优于离子交换层析方法。