磺基水杨酸沉淀蛋白法测定人血白蛋白铝含量

目的建立人血白蛋白铝含量测定的一种新方法。方法利用磺基水杨酸沉淀蛋白质,采用原子吸收分光光度法,在309.3 nm波长处检测人血白蛋白铝含量。结果在本实验条件下,铝含量在1.0-30.0μg/L范围内线性关系良好;精密度实验中铝含量RSD值为3.4%;铝含量平均回收率96.4%,RSD值为3.7%;溶液稳定性检测中,供试品溶液放置0,2,4,8 h后分别进样记录吸收值,RSD值为3.1%。结论磺基水杨酸沉淀蛋白法测定人血白蛋白铝含量检测结果准确,消除了蛋白质对人血白蛋白铝含量测定的影响,可用于人血白蛋白铝含量的测定。

蛋白-单宁沉淀法测定葡萄籽中单宁含量

采用单宁-蛋白沉淀法测定葡萄籽超微粉中的单宁含量,分别从机器精密度,线性范围,方法检出限,方法精密度,加标回收率等方面进行比较,以研究葡萄籽超微粉中单宁含量的测定方法。结果表明:机器精密度1.144%,线性范围50～250μg/mL(R2=0.9966),方法检出限0.339μg/mL,平行性精密度0.2454%,重复性精密度0.2159%,加标回收率为97.47%～101.49%。该方法可用于葡萄籽超微粉中单宁含量的测定。

不同蛋白沉淀方法对尿蛋白双向电泳结果的影响

目的观察不同蛋白沉淀方法对尿液蛋白双向电泳结果的影响。方法采用丙酮沉淀法、乙腈(ACN)/0.1%三氟乙酸(TFA)沉淀法及三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法沉淀尿液标本中的蛋白质,采用固相pH梯度干胶条(IPG)对沉淀蛋白进行双向电泳,观察双向电泳的蛋白质点数及质量。结果采用TCA/丙酮沉淀法沉淀后,尿液标本双向电泳蛋白质点数较丙酮沉淀法、ACN/0.1%TFA沉淀法多,蛋白质谱较清晰。结论TCA/丙酮沉淀法能够提高尿液标本双向电泳蛋白的检出敏感度,提高检测效果。

高效液相色谱法测定犬血浆中美洛昔康含量及其在生物等效性研究上的应用

建立沉淀蛋白法结合高效液相色谱法灵敏检测犬血浆中美洛昔康含量的分析方法,并将此方法成功应用于美洛昔康在犬体内的药动学和生物等效性研究。血浆样品采用乙腈沉淀蛋白处理后,采用Agilent SB C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱进行分离,以乙腈-1%甲酸水(80∶20,V∶V)为流动相进行梯度洗脱,检测波长为355 nm。应用该方法测定18只比格犬随机交叉进行颈部皮下注射0.2 mg/kg·bw的国产制剂和进口制剂的美洛昔康注射剂后的血药浓度,并计算药动学参数。结果显示:美洛昔康在0.050~3.2μg/mL的浓度范围内呈现良好线性关系(R^(2)≥0.999),回收率在98.7%~108.2%以内,批内、批间精密度均小于12%,样品稳定性良好,均满足分析检测要求。单剂量皮下注射美洛昔康注射液受试制剂AUC0-t、AUC0-∞、Cmax的90%CI为参比制剂相应参数的80.00%~125.00%范围内,受试制剂和参比制剂具有生物等效性。结果表明,建立的犬血浆中美洛昔康浓度测定方法准确、灵敏、选择性好、重现性高,可用于美洛昔康注射液在犬体内的生物等效性研究。

TCA/丙酮沉淀对尿液标本中微量蛋白效果分析

目的:探讨研究TCA/丙酮沉淀法在尿液蛋白提取中的效果。方法:采用丙酮沉淀法、ACN/0.1%TFA沉淀法、TCA/丙酮沉淀法三种不同方法沉淀尿液蛋白,并经对双向电泳(2-DE)图谱,对比三种方法对尿液蛋白2-DE结果的影响。结果:尿液样本经20%TCA/丙酮沉淀法沉淀后所得的蛋白点数及蛋白回收率分别为(392±14)%与(69.4±7.8)%,较ACN/0.1%TFA沉淀法与丙酮沉淀法的蛋白点数及蛋白回收率均有显著优势。TCA方法得到的双向电泳图谱背景清晰,蛋白点分辨率高。结论:TCA/丙酮沉淀法作为较为理想的蛋白沉淀提取方法,具有高效、简便的显著优势。

发酵乳中三氯蔗糖检测方法的改进

本文应用乙酸沉淀蛋白法进行分离与纯化,结合HPLC-DAD方法对发酵乳中三氯蔗糖的检测进行试验,分别从检出限、重复性和准确性方面分析,以建立一种快速高效、灵敏度高、准确性好,且节约成本的检测方法。在优化条件下,三氯蔗糖在0.02~0.80 mg·mL^(-1),线性关系良好,r=0.9996,回收率为88.0%~91.2%,RSD为0.79%,三氯蔗糖的检出限为0.0023 g·kg^(-1)。试验数据表明该方法高效、灵敏、准确度高,为发酵乳中三氯蔗糖的测定提供了准确可靠的技术支撑。

提取净化药物的新方法——酶消化法

在毒物分析中,药物的提取和净化是十分关键的问题。几十年来,人们多沿用经典的斯奥氏法和以后逐步发展起来的钨酸钠沉淀蛋白法、乙醇沉淀蛋白法、硫酸铵法、酸解法以及溶剂直接提取法等。这些方法虽然各有其独特之处。

超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中精氨酸及衍生物含量

建立了超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法同时测定使用艾普拉唑后人血浆中二甲基精氨酸（ADMA）、对称二甲基精氨酸（SDMA）、单甲基精氨酸（NMMA）、瓜氨酸（Cit）和L-精氨酸（L-Arg）的浓度。采用HILIC亲水相互作用色谱和非衍生化的蛋白沉淀法进行分离分析,色谱柱选取Waters Atlantic HILIC柱（2.1 mm×50 mm×3μm）,流动相由乙腈（含0.5%乙酸和0.025%三氟乙酸）-水（含0.5%乙酸和0.025%三氟乙酸）（85∶15,V/V）组成,流速0.25mL/min。采用多反应离子监测（MRM）模式,以电喷雾离子源（ESI）正离子方式检测。结果显示,ADMA、SDMA、NMMA、L-Arg和Cit的线性关系良好,相关系数r均大于0.994 0;ADMA、SDMA和NMMA的线性范围为0.1~5mmol/L,L-Arg和Cit的线性范围为10~250mmol/L;5种氨基酸的日内、日间精密度均小于15%,准确度在85%~115%之间。该方法快速、简便、灵敏,可为相关疾病的临床诊断提供一种高效的检测手段。

呱仑酸钠血药浓度HPLC测定方法研究

目的 :建立水溶性药物呱仑酸钠血药浓度的高效液相色谱分析方法。方法 :以对二甲氨基苯甲醛为内标 ,在比较了固相萃取、离子对萃取及沉淀蛋白 -脱水法等 3种预处理方法的基础上 ,采用沉淀蛋白 -脱水法预处理兔血浆样品 ,分析柱为 μBondapakC18柱 (2 5 0mm× 4 6mm ,10 μm) ,流动相为 pH 7 0的 0 0 1mol·L-1磷酸盐缓冲液 -甲醇 (5 0∶5 0 ) ,流速1mL·min-1,在 2 93nm波长处检测 ,按内标法定量。结果 :血药浓度线性范围为 0 1～ 10 0mg·L-1(r=0 9997) ,最低检测浓度为 0 0 2mg·L-1(S/N >3) ,萃取回收率在 79 5 %～ 86 4% (n =5 ) ,分析方法回收率在 93 1%～ 95 5 % (n =5 ) ,日内和日间RSD分别为 1 2 %～ 1 8%和 1 9%～ 3 1% (n =5 )。结论 :本法简便、准确、精密度高、重现性好 。

寡核苷酸样品制备方法的研究进展

美国FDA已批准上市多种寡核苷酸用于治疗不同类型的疾病,例如治疗儿童及成人脊髓性肌肉萎缩症。寡核苷酸及其代谢物的定性和定量分析是药物开发和评估所必需的,良好的分析方法有利于控制药品质量。本文总结了寡核苷酸分析的第一步,即样品制备,特别是用于液相色谱、液相-质谱联用。需要特殊的样品制备技术需要在复杂的生物基质中确定反义寡核苷酸。本文讨论了寡核苷酸样品制备中所遇的问题及其解决方案。本文主要总结了蛋白沉淀法、酶消化法、液-液萃取法、固相萃取法及其他前瞻性技术,并突出了其与每种方法的应用相关的问题。最后,总结了实际使用的技术以及指引未来的研究方向。

高效液相色谱-串联质谱法同时检测人血清中帕利哌酮、齐拉西酮、喹硫平和氨磺必利质量浓度

目的建立同时测定人血清中帕利哌酮、齐拉西酮、喹硫平和氨磺必利质量浓度的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法。方法采用乙腈蛋白沉淀法对人血清样本进行前处理。采用HPLC-MS/MS法测定,色谱柱为Kinetex XB-C18柱(50 mm×3.0 mm,2.6μm),流动相为0.01%甲酸-水-乙腈(50∶37.5∶12.5,V/V/V),流速为0.4 mL/min,柱温为45℃,进样量为5μL;电喷雾电离正离子模式,多反应监测模式进行定量分析,以帕利哌酮-D4、齐拉西酮-D8、喹硫平-D8和氨磺必利-D5为质控内标。结果帕利哌酮的进样质量浓度线性范围为5.00~1000.00 ng/mL(R2=0.9973)、齐拉西酮、喹硫平、氨磺必利均为10.00~2000.00 ng/mL(R^(2)=0.9956,0.9971,0.9945),定量下限分别为5,10,10,10 ng/mL;日内和日间精密度试验结果的RSD均小于15%(n=15);平均提取回收率为92.06%~108.14%,RSD均低于5.00%(n=15);血清质控样品于常温避光放置1 h和24 h,以及-20℃冻存1 d和14 d后,含量均在85%~115%,RSD均小于15%(n=15)。基质效应的RSD均小于15%(n=9)。结论所建立的方法可同时测定人血清样本中帕利哌酮、齐拉西酮、喹硫平和氨磺必利的质量浓度,操作简便快捷,灵敏度高,专属性好,可用于治疗药物的血药浓度监测。

UPLC-MS/MS法测定人血浆中20(S)-原人参二醇的浓度

目的:建立测定人血浆中20(S)-原人参二醇(简称为"PPD")浓度的方法。方法:血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,以非那雄胺为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3,流动相为5 mmol/L碳酸氢铵溶液-乙腈(梯度洗脱),流速为0.4 mL/min,柱温为40℃,进样量为10μL;离子源为电喷雾离子源,以多反应监测模式(MRM)进行负离子扫描,用于定量分析的离子对分别为m/z 459.40→375.20(PPD)、m/z 371.30→315.30(内标)。同时将该法用于临床样品的测定。结果:PPD检测质量浓度的线性范围为0.25~30.00 ng/mL(r=0.9992),定量下限为0.25 ng/mL;批内、批间RSD均小于10%,相对误差(RE)为-14.61%~12.69%;提取方法和基质效应均不影响PPD的定量测定。人参皂苷CK片100 mg组、人参皂苷CK片200 mg组、人参皂苷CK片300 mg组类风湿性关节炎患者口服相应药物第84天时的平均cmax分别为18.06、30.03、27.00 ng/mL,中位tmax分别为12.0、6.0、12.0 h,平均AUC0-t分别为622.52、668.15、1155.97 ng·h/mL。结论:本研究成功建立了测定人血浆中PPD浓度的方法,且方法灵敏、准确、稳定,操作简便,血浆用量少,可用于临床样本的定量测定。

UPLC-MS/MS法用于大鼠血浆中20(S)-原人参二醇药动学研究

目的:建立沉淀蛋白法结合超高效液相色谱-三重四级杆质谱法灵敏检测大鼠血浆中20(S)-原人参二醇的分析方法。方法:血浆样品用0.05%甲酸/乙腈沉淀蛋白处理后,采用Waters ACQUITY BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱进行分离,以乙腈-水(80∶20)为流动相进行等度洗脱,在电喷雾负离子模式下,采用多反应监测模式进行定性定量分析。结果:20(S)-原人参二醇在1~2500 ng/mL浓度范围内呈现良好线性(r≥0.998),定量限为0.5 ng/mL;方法批内与批间精密度均小于15%,准确度RE在±12.2%以内;方法提取回收率在84.8%~94.1%;大鼠单次灌胃20(S)-原人参二醇样品后,血浆中20(S)-PPD的C_(max)、t_(max)、t_(1/2)和AUC_(0-∞)分别为3520 ng/mL、2 h、10.65 h和21760 ng·mL^(-1)·h^(-1)。结论:本方法准确度、灵敏度高,样品前处理方法简单、快速,可用于血浆样品中20(S)-原人参二醇的药动学研究。

UPLC-MS/MS法测定人血浆中的醋酸甲地孕酮

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定人血浆中醋酸甲地孕酮的浓度。方法:采用蛋白沉淀法预处理血浆样本,沉淀剂为甲醇。采用Waters BEH C_(18)色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相A为含0.1%甲酸和10 mmol·L^(-1)乙酸铵的水溶液,流动相B为甲醇,梯度洗脱,流速0.3 ml·min^(-1),柱温40℃,进样量1μl。结果:醋酸甲地孕酮的线性范围为1~400 ng·ml^(-1);定量下限为1 ng·ml^(-1);批内精密度RSD均≤6.50%,批间精密度RSD均≤5.86%;醋酸甲地孕酮的提取回收率≥90.93%。结论:所用方法简便快速、准确度高、灵敏度好,适用于测定人血浆中甲地孕酮的浓度。

血清低密度脂蛋白胆固醇直接测定与Friedewald公式计算结果比较

采用聚乙烯硫酸（ＰＶＳ）沉淀法测定血清低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ－Ｃ）值，同时应用Ｆｒｉｅｄｅｗａｌｄ公式计算ＬＤＬ－Ｃ含量，并对两法结果进行比较分析，提出当甘油三脂（ＴＧ）＜４．５２ｍｍｏｌ／Ｌ时，Ｆ公式计算法可代替ＰＶＳ法，当ＴＧ＞４．５２ｍｍｏｌ／Ｌ时，不宜用Ｆ公式计算ＬＤＬ－Ｃ的值。

UPLC-MS/MS法测定人血浆中的阿哌沙班

目的采用超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中的阿哌沙班。方法采用乙腈沉淀蛋白预处理血浆样品,WatersXbridgeC_(18)色谱柱(50mm×2.1mm,3.5μm)进行分离,以5%乙腈(A)和95%乙腈(B)的含0.1%甲酸水溶液作为流动相,梯度洗脱,流速0.4mL·min^(-1),柱温40℃,进样量2μL。采用电喷雾离子源,正离子多反应监测模式扫描,用于定量分析的离子对分别为m/z460.3→443.3(阿哌沙班)、m/z464.4→447.3(^(13)C阿哌沙班-d_(3)内标)。结果0.5~400ng·mL^(-1)阿哌沙班与峰面积的线性关系良好(r=0.9995),定量下限为0.5ng·mL^(-1),提取回收率≥99.22%,质控样品的批内、批间RSD均≤4.53%;全血样品和血浆样品的稳定性符合生物样品分析的要求。结论所用方法简便快速、准确度高、灵敏度好,适用于测定人血浆中阿哌沙班的浓度,可用于其在健康人体中的药动学及生物等效性研究。

死后5年检出钩吻生物碱一例

1986年3月,我们用三氯醋酸沉淀蛋白法,从一具死后5年尸体肝区腐败组织中检出了钩吻生物碱。死者陈××,男,农民。1981年3月21目突然死亡。检材系死者肝区腐败组织、泥土样。取检材30克,用三氯醋酸沉淀蛋白,乙醚二次提取,经装柱净化、水浴挥干后,残渣作薄层层析检验。层析后的检材与碘化铋钾反应,呈橙红色斑点,与已知样品钩吻碱一致。

青风藤的检验

青风藤为防己科植物。某巫医以治哮喘病为名,自制青风藤药液出售,造成七人中毒,其中一人死亡。服药后10分钟出现中毒症状,首先头部明显痒感,随继全身,心里难受,口舌麻木,语言困难,腹疼腹泻,呕吐。死者还出现呼吸困难。

人血中微量酒精的定性定量检验

关于人血中微量酒精的定量检验,我们结合办案作了初步探讨。据文献报导,乙醇在人血中的中毒量为0.15克/100毫升,致死量为0.35克/100毫升。根据酒精主要组分的气相色谱响应值在一定范围内与其百分浓度成比例关系,我们实验用三氯乙酸沉淀蛋白法从人血中提取酒精。

血中微量醋酸的检验

在刑事案件中,罪犯用注射食用醋精的手段毒害人命,国内尚未见有报道,国外也属少见。为了突破血中醋酸检验的难题,我们进行了初步研究。醋酸是挥发性有机强酸,可灼伤皮肤、口腔、食道,严重腐蚀胃、肠。轻度中毒引起腹部疼痛、恶心、呕吐、口渴、吞咽困难;严重中毒时,脉搏快弱,呼吸慢浅。