顺铂耐药宫颈癌细胞中沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1的表达及其对细胞增殖的影响

目的探讨顺铂(DDP)耐药宫颈癌细胞中沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)的表达及其对细胞增殖的影响。方法将宫颈癌HeLa和SiHa细胞分别分为耐药组和敏感组。敏感组细胞不做任何处理;耐药组细胞在培养过程中逐步增加培养液中顺铂的浓度,建立对对顺铂耐药的HeLa/DDP和SiHa/DDP细胞系。再将HeLa/DDP和SiHa/DDP细胞系分为HeLa/DDP-NC组、HeLa/DDP-siRNA组以及SiHa/DDP-NC组、SiHa/DDP-siRNA组,并分别转染相应的siRNA。检测耐药组和敏感组细胞SIRT1蛋白及mRNA表达水平;检测DDP-NC组与DDP-siRNA组细胞SIRT1蛋白及mRNA表达水平及增殖情况。结果耐药组HeLa及SiHa细胞SIRT1蛋白及mRNA表达水平均高于敏感组(均P<0.05)。DDP-NC组HeLa及SiHa细胞增殖水平高于DDP-siRNA组(均P<0.05)。结论顺铂耐药宫颈癌细胞SIRT1表达水平升高,抑制SIRT1表达可以抑制耐药细胞的增殖。

岩白菜素对大鼠心肌细胞的缺氧/复氧损伤保护作用的机制研究

目的 探究岩白菜素(Ber)减轻大鼠心肌细胞(H9C2)缺氧/复氧损伤(SI/R)的分子机制。方法 建立H9C2缺氧/复氧损伤模型,通过免疫印迹法检测关键分子的表达,通过末端标记法染色和乳酸脱氢酶释放量检测细胞损伤,通过二氯荧光素染色及丙二醛(MDA)检测细胞内活性氧(ROS)水平,通过分别给予EX-527和SR-18292抑制沉默交配型信息调控2同源物1(SIRT1)和过氧化物酶体增殖物受体共激活因子-1α(PGC-1α)。实验按干预方法不同分组,分别为Bey干预组(SI/R+Ber)、Bey+SIRT1抑制剂组(SI/R+Ber+EX-527)、对照组(SI/R+PBS)。SI/R+Ber组加入含有100μM的Ber培养基进行干预,SI/R+Ber+EX-527组加入含有100μM的Ber和50 nM EX-527的培养基进行干预。SI/R+PBS组为磷酸缓冲液(PBS)干预作为对照组。结果 与SI/R+PBS组相比,SI/R+Ber组Bcl-2的表达水平升高(P <0.001),Bax的表达水平显著降低(P <0.001),PGC-1α的表达水平明显升高(P <0.001);与SI/R+Ber组相比,SI/R+Ber+Ex-527组Bcl-2的表达水平降低(P <0.001),Bax的表达水平显著升高(P <0.001),PGC-1α的表达水平明显降低(P <0.001)。给予PGC-1α的抑制剂SR-18292后,与SI/R+Ber组相比,细胞活力显著降低(P <0.01);乳酸脱氢酶释放显著升高(P <0.001);MDA生成显著升高(P <0.01),大鼠心肌细胞的凋亡指数明显升高(P <0.01),ROS的产生明显升高(P <0.01),Bcl-2表达水平显著降低(P <0.001),Bax表达水平升高(P <0.01),SIRT1表达水平无明显变化(P> 0.05)。结论 Ber通过激活SIRT1/PGC-1α通路来减少ROS的产生,进而抑制SR/I损伤中的大鼠心肌细胞凋亡。

黄芪甲苷通过SIRT1/PGC-1α通路促进退变的髓核细胞增殖

目的探究黄芪甲苷对退变髓核细胞功能的影响及其作用机制。方法原代培养正常与退变髓核细胞并观察,免疫组化检测细胞中胶原蛋白Ⅱ(collagenⅡ)的表达;分别采用20、40、60、80μg/mL的黄芪甲苷处理细胞,通过CCK-8和MTT试剂盒检测细胞活力和增殖,流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blotting检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax和沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1(PGC-1α)的表达及其乙酰化和磷酸化水平;比色法检测丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、β-galactosidase和三磷酸腺苷(ATP)的含量。结果与正常髓核细胞相比,退变髓核组织中坏死细胞更多,且collagenⅡ表达降低;细胞经不同浓度黄芪甲苷处理后,40μg/mL黄芪甲苷不仅能显著提高退变髓核细胞活力,促进细胞增殖并抑制其凋亡,而且能上调细胞中SIRT1、PGC-1α的蛋白表达和PGC-1α磷酸化水平,下调PGC-1α乙酰化水平,增加SOD和ATP含量,降低MDA和β-galactosidase含量。结论黄芪甲苷可能通过激活SIRT1/PGC-1α信号通路促进髓核细胞的增殖和存活。

高糖培养对大鼠肾小管上皮细胞中SIRT1和PGC-1α水平及线粒体功能的影响

目的 探讨高糖培养肾小管上皮细胞中沉默配对型信息调节因子2同源物1(SIRT1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)表达水平及线粒体功能的影响。方法 取对数生长期的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E细胞)设立对照组(正常血糖水平,NG组)和高糖组(HG组),培养48 h后,采用流式细胞仪检测线粒体活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(ΔΨm),采用紫外分光光度法检测线粒体腺嘌呤核苷三磷酸(ATP),采用Western blot法检测PGC-1α、SIRT1和cleaved-Caspase-3蛋白的表达。结果 与NG组比较,HG组ROS和ATP明显增加、ΔΨm水平明显下降,PGC-1α、SIRT1蛋白表达降低,cleaved-Caspase-3蛋白表达明显增加,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论 高糖诱导可使大鼠近端肾小管上皮细胞线粒体功能障碍,其机制可能与高糖降低SIRT1和PGC-1α表达有关。

SIRT1信号通路对于骨代谢的调节作用

骨质疏松是一种以骨矿物含量下降、骨微细结构破坏为特征的骨骼疾病,其发病机制与骨骼系统衰老和能量代谢紊乱有关。沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(silent mating-type information regulator 2 homolog 1,SIRT1)是一类烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)依赖的去乙酰化酶,是生物体内细胞衰老、能量代谢和骨骼重塑3个重要生理过程的汇合点。SIRT1不仅能被单磷酸腺苷活化蛋白激酶[adenosine 5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]、c-Jun氨基末端激酶1(c-Jun N-terminal kinase 1,JNK1)和酪蛋白激酶2(casein kinase 2,CK2)等激酶激活,还能被白藜芦醇等小分子药物激活。这些激酶与药物均能影响骨代谢。且研究证实SIRT1信号通路也能直接调控骨代谢过程,但其中的具体调节机制尚不明确。该文就SIRT1的结构、功能和在骨代谢各个环节中的作用作一综述,并分析SIRT1信号通路作为骨质疏松治疗新靶点的潜力。

运脾和络方调控SIRT1-FoxO1通路改善2型糖尿病骨骼肌脂肪异位沉积的研究

目的:基于SIRT1-FoxO1信号通路,探讨运脾和络方改善骨骼肌脂肪异位沉积的可能作用机制。方法:建立ZDF 2型糖尿病大鼠模型,分为模型组与中药组,ZL大鼠为正常组,取骨骼肌组织,HE染色和油红O染色观察脂肪异位沉积情况;qRT-PCR检测SIRT1和FoxO1的mRNA表达;Western Blot检测SIRT1和FoxO1的蛋白表达。结果:HE染色与油红O染色提示:与正常组比较,模型组骨骼肌组织脂肪异位沉积明显;与模型组比较,中药组脂肪异位沉积改善明显。与正常组比较,模型组SIRT1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),FoxO1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,中药组SIRT1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),FoxO1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:运脾和络方可以上调骨骼肌组织中SIRT1的表达,增强对FoxO1的去乙酰化,降低骨骼肌组织FoxO1的表达,进而改善2型糖尿病骨骼肌的脂肪异位沉积。

血清PECAM-1、Sirt1水平与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系

目的探讨血清血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1)、沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(Sirt1)水平与颈动脉粥样硬化斑块(CAP)稳定性的关系。方法选取148例CAP患者,根据CAP稳定性分为不稳定组(n=81)和稳定组(n=67)。收集患者一般资料,酶联免疫吸附法测定血清PECAM-1、Sirt1,多因素Logistic回归分析CAP不稳定的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清PECAM-1、Sirt1水平对CAP不稳定的预测价值。结果不稳定组血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、PECAM-1水平高于稳定组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、Sirt1水平低于稳定组(P均<0.05)。LDL-C(OR=1.675,95%CI:1.190~2.356)、PECAM-1(OR=1.622,95%CI:1.291~2.039)为CAP不稳定的独立危险因素,Sirt1(OR=0.438,95%CI:0.301~0.638)为独立保护因素(P均<0.05)。PECAM-1+Sirt1预测CAP不稳定的曲线下面积明显大于PECAM-1、Sirt1单独预测(P均<0.05),敏感度、特异度为88.89%、88.06%。结论CAP不稳定患者血清PECAM-1水平升高,Sirt1水平降低;血清PECAM-1、Sirt1水平为CAP不稳定独立影响因素,联合检测能提升CAP不稳定预测价值。

高氧抑制SIRT1和PGC-1α表达引起肺泡上皮细胞线粒体功能障碍

目的探讨沉默配对型信息调节因子2同源物1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(SIRT1-PGC-1α)信号途径介导高氧对A549人肺泡上皮细胞线粒体功能的影响及其可能机制。方法取对数生长期的人肺泡上皮细胞,随机分为对照组和高氧组。对照组置于37℃、50 mL/L CO2饱和湿度培养箱中培养,高氧组予以950 mL/L O2处理。培养24 h后,Mito SOX^TM染色法检测线粒体活性氧(Mito-ROS)水平,JC-1染色检测线粒体膜电位,实时定量PCR检测线粒体DNA含量及SIRT1、PGC-1α、核呼吸因子1(NRF1)和线粒体转录因子A(TFAM)mRNA水平,Western blot法检测SIRT1、PGC-1α、NRF1和TFAM蛋白水平。结果与对照组相比,高氧组细胞Mito-ROS明显增加,膜电位明显下降;高氧组线粒体DNA含量减少,SIRT1、PGC-1α、NRF1和TFAM的mRNA和蛋白表达均下降。结论高氧诱导SIRT1和PGC-1α表达降低引起人肺泡上皮细胞线粒体功能障碍。

莪术醇通过Sirt1-p53信号通路诱导肝星状细胞衰老减轻肝纤维化

目的探讨莪术醇对肝纤维化的治疗作用及其可能机制。方法用不同浓度莪术醇5、10、15、20、30、45、60、80和100μmol/L培养人肝星状细胞株HSC-LX224h,采用CCK-8法检测细胞活力。选择三个浓度的莪术醇10、20、30μmol/L用于后续实验。Western blot法及免疫荧光实验检测肝纤维化相关蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、α1(Ⅰ)胶原及纤连蛋白的表达;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老细胞;实时定量PCR检测衰老标志物p16、p21、高迁移率族蛋白A1(HMGA1)及端粒酶逆转录酶(TERT)mRNA表达;Western blot法检测沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(Sirt1)和p53蛋白表达。结果与莪术醇0μmol/L比较,莪术醇20、30μmol/L处理后,α-SMA、α1(Ⅰ)胶原及纤连蛋白的表达下调,SA-β-Gal染色阳性细胞增加,p16、p21、HMGA1 mRNA表达和p53蛋白表达增加,TERT mRNA表达和Sirt1蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01)。加入Sirt1激动剂SRT 17205μmol/L后,p16和p21mRNA表达降低(P<0.01)。结论莪术醇能够通过Sirt1-p53信号通路诱导肝星状细胞衰老,从而减轻肝纤维化。

鼠尾草酸的体内氧化应激调节作用研究进展

氧化应激会破坏核酸、蛋白质和脂质等多种生物分子的结构和功能,导致基因表达调控、细胞信号转导、物质摄取及胞内运输等重要生命活动受到影响,是多种组织器官发生病变的主要因素。鼠尾草酸富含于迷迭香等植物中,能够活化细胞内抗氧化系统[如核转录因子E2相关因子2-BTB-Kelch样ECH相关蛋白1(nuclear factor erythroid-2 related factor 2-BTB-Kelch-like ECH-associated protein 1,Nrf2-Keap1)、沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,Sirt1)等信号通路]清除活性氧,同时抑制其他促进氧化应激的信号通路[如核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGE)等],抑制活性氧的作用,最终减缓甚至阻止氧化应激,有效预防和治疗如神经系统、视网膜、心血管、肝脏等组织器官的病变。笔者整理归纳了鼠尾草酸对氧化应激相关疾病的调节机制,为推进鼠尾草酸临床应用的转化提供参考。