沉默信号调控因子1在1型糖尿病模型小鼠角膜和三叉神经节中的表达及意义

背景糖尿病是引发角膜神经病变的高危因素之一。沉默信号调控因子1（Sirtl）在糖代谢、脂代谢、胰岛素分泌调节中发挥着重要的作用，并与神经系统性疾病密切相关。目前，关于Sirtl与糖尿病性角膜神经病变的关系尚不完全清楚。目的探讨Sirtl在1型糖尿病C57BL／6-Ins2Aklta／J小鼠角膜及三叉神经节中的表达及其意义，探讨Sirtl与糖尿病性角膜神经病变的关系。方法取C57BL／6-Ins2Aklta／J雄性小鼠与同窝出生的野生型C57BL／6小鼠各8只，分别作为1型糖尿病模型组和正常对照组。两组小鼠均在12月龄时过量麻醉处死，处死前检测空腹血糖、测体质量。取小鼠三叉神经节和角膜组织，采用苏木精-伊红染色法检测两组小鼠三叉神经节和角膜组织的组织病理学变化，用免疫组织化学法检测三叉神经节和角膜组织中Sirtl蛋白的表达和定位；用荧光定量PCR法检测Sirtl mRNA在三叉神经节和角膜组织中的表达；采用Westernblot检测两组小鼠三又神经节和角膜组织中Sirtl蛋白的相对表达量，并进行比较。结果C57BIM6-Ins2Akita／J小鼠三叉神经节细胞大小不均，细胞排列较为疏松，神经纤维排列紊乱，角膜上皮细胞层数减少，角膜变薄；野生型C57BL／6小鼠神经节细胞排列紧密，细胞形态均一，神经纤维排列整齐。免疫组织化学法检测结果显示，C57BL／6-Ins2Akita／J小鼠角膜中Sirtl蛋白的表达强度低于野生型C57BL／6小鼠。荧光定量PCR结果显示，SirtlmRNA在C57BL／6-Ins2Akita／J小鼠角膜表达的灰度值显著低于野生型C57BL／6小鼠（0．56±O．03VS．0．98±0．13），差异有统计学意义（t=5．853，P=0．010）；C57BL／6-Ins2Akita／J小鼠三叉神经节中SirtlmRNA表达的灰度值为2．45±0．18，低于野生型C57BL／6小鼠的2．51±0．22，但差异无统计学意义（t=0．587，P=0．599）。Westernblot检测结果显示，C57BL／6-Ins2Akita／J小鼠角膜中Sirtl蛋白的表达显著低于野生型C57BL／6小鼠（0．780±0．017vs．1．300±0．012），差异有统计学意义（t=33．140，P=0．001）；两组小鼠间三叉神经节中Sial蛋白的表达差异无统计学意义（1．100±0．015 vs．1．110±0．017）（t=0．430，P=0．709）。结论12月龄C57BL／6一Ins2Akita／J小鼠角膜的神经和结构发育异常，Sirtl参与糖尿病角膜病变的发病，有可能是潜在的靶点分子。

七氟烷通过诱导SIRT1依赖型自噬减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的探究七氟烷对大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的影响及沉默信号调控因子1(SIRT1)自噬在其中发挥的作用。方法 SD大鼠分为假手术组、脑中动脉缺血(MCAO)模型组及七氟烷处理组(0.6%、1.2%、2.4%),不同浓度的七氟烷预处理大鼠, MCAO建模并进行神经功能评分,TTC染色检测脑梗死体积分数,并称量脑含水量,HE染色检测大脑皮质组织病理变化,TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡,ELISA法检测脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)含量,RT-PCR检测SIRT1基因表达,Western blot检测SIRT1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62蛋白表达,自噬抑制剂3-MA和SIRT1 siRNA处理大鼠,检测其对大鼠CIRI损伤的影响。结果与假手术组比较,MCAO模型大鼠出现神经功能损伤,脑梗死体积分数增高,脑含水量增加,大脑皮质出现病理变化及细胞凋亡,组织炎症反应加重,SIRT1基因和蛋白表达升高,自噬水平提高;七氟烷预处理可减轻CIRI的病理损伤,同时使SIRT1表达和自噬水平进一步升高。3-MA抑制自噬和SIRT1沉默可扭转七氟烷在CIRI中的保护作用,同时降低自噬水平。结论七氟烷可通过诱导SIRT1依赖性自噬,减轻大鼠CIRI。

SIRT1在癫痫患者及大鼠脑组织中的表达与活性

目的研究沉默信号调控因子1(SIRT1)在难治性癫痫患者及癫痫大鼠颞叶脑组织中的表达与活性,探讨其与癫痫发生发展的关系。方法在难治性癫痫患者及氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠颞叶脑组织中,应用蛋白免疫组织化学、免疫印迹技术检测其表达情况,应用SIRT1去乙酰化活性检测试剂盒检测其活性。结果蛋白免疫组化结果显示:SIRT1主要表达于人与大鼠神经元细胞浆中,且癫痫组SIRT1的表达明显强于对照组。蛋白免疫印迹及活性检测结果显示:相对于非癫痫患者脑组织,SIRT1表达及活性在难治性癫痫患者颞叶脑组织中均明显升高(P<0.05);相对于正常对照组大鼠,SIRT1表达在癫痫动物模型中点燃后的6 h、24 h、72 h、7 d、14 d、30 d、60 d均显著升高(P<0.05),SIRT1活性在6 h、24 h、72 h、7 d、14 d显著升高(P<0.05),其表达与活性的峰值同时出现在72 h。结论癫痫患者及动物颞叶脑组织中上调的SIRT1的表达与活性提示其可能在难治性癫痫发病机制中起重要作用。

miR-181a靶向SIRT1对脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤的影响及作用机制

目的探究miR-181a通过靶向沉默信号调控因子1(SIRT1)对脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤的影响及作用机制。方法脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤A549细胞模型,并通过miR-181a inhibitor和inhibitor阴性对照(NC)转染细胞;盲肠结扎穿孔术法(CLP)建立小鼠脓毒症急性肺损伤模型,并通过miR-181a antagomir和antagomir NC静脉注射,检测生存率、肺湿重/干重比。荧光素酶报告实验检测miR-181a和SIRT1靶向关系。RT-PCR检测miR-181a、SIRT1在体内体外的基因表达,Western blotting检测SIRT1在体内体外的蛋白水平,以及凋亡标志物蛋白B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bax及活化半胱天冬酶3(cl-CASP3)在体内蛋白水平,流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8检测体外细胞活力,试剂盒检测CASP3体外活性,HE染色检测肺组织病理变化,TUNNEL染色检测体内细胞凋亡,ELISA检测体内血清炎症细胞因子水平。结果在细胞实验中,与Control组比较,LPS组细胞中miR-181a表达升高,SIRT1表达降低(P<0.01),同时细胞凋亡率升高,CASP3活性升高,细胞活力下降;miR-181a inhibitor可扭转上述各指标的改变(P<0.01);在动物实验中,与Sham组比较,CLP组小鼠生存率下降,肺湿重/干重比上升,出现明显的病理性改变及细胞凋亡,同时炎症细胞因子水平升高,组织内miR-181a、Bax、cl-CASP3蛋白水平升高,SIRT1、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.01),经过miR-181a antagomir处理可扭转上述各指标的改变(P<0.05,P<0.01)。结论miR-181a可靶向作用于SIRT1,抑制miR-181a表达可提高SIRT1表达,从而对脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤起保护作用。