目的观察肾纤维化模型中沉默信息调节因子3(silent information regulator 3,Sirt3)的表达变化及有氧糖酵解水平变化,探讨Sirt3在肾间质纤维化中的作用及机制。方法野生型小鼠及Sirt3基因敲除小鼠分别构建单侧输尿管梗阻肾纤维化模型,...目的观察肾纤维化模型中沉默信息调节因子3(silent information regulator 3,Sirt3)的表达变化及有氧糖酵解水平变化,探讨Sirt3在肾间质纤维化中的作用及机制。方法野生型小鼠及Sirt3基因敲除小鼠分别构建单侧输尿管梗阻肾纤维化模型,对侧肾脏为假手术对照组。HE染色及Masson染色观察肾脏病理变化,蛋白质印迹法检测Sirt3、纤维化相关标志性蛋白(纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白)、有氧糖酵解关键酶(己糖激酶2、M2型丙酮酸激酶)及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达,脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测肾小管上皮细胞凋亡;体外培养人肾小管上皮细胞,分为对照组和si-Sirt3组,转化生长因子β1处理细胞,蛋白质印迹法检测上述纤维化相关蛋白及有氧糖酵解关键酶的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡。结果在体内外纤维化反应中,肾小管上皮细胞凋亡和有氧糖酵解水平明显增加,Sirt3表达显著下调。而Sirt3基因敲除进一步加重了肾小管上皮细胞凋亡和异常的有氧糖酵解,促进了肾间质纤维化。结论Sirt3可能通过抑制肾小管上皮细胞有氧糖酵解减轻肾间质纤维化,在慢性肾脏病中发挥保护作用。展开更多
目的测定脑组织中沉默信息调节因子(SIRT)3和水通道蛋白(AQP)4的表达,探讨大黄酚对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法随机将昆明小鼠分为空白对照组、假手术组、模型组、大黄酚组。采用改良的Himori法暂时性阻断双侧颈总动脉建立脑...目的测定脑组织中沉默信息调节因子(SIRT)3和水通道蛋白(AQP)4的表达,探讨大黄酚对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法随机将昆明小鼠分为空白对照组、假手术组、模型组、大黄酚组。采用改良的Himori法暂时性阻断双侧颈总动脉建立脑缺血再灌注模型。观察脑缺血5 min再灌注24 h后小鼠的行为学表现,计算神经功能损伤评分,应用免疫组化法测定脑组织中沉默信息调节因子(SIRT)3,水通道蛋白(AQP)4的表达,测定脑组织中的超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果大黄酚能明显改善脑缺血再灌注后小鼠的神经功能损伤情况;大黄酚可提高脑组织中SOD的活力;小鼠脑缺血再灌注后24 h SIRT3及AQP4表达均增强,而应用大黄酚可以降低AQP4以及上调SIRT3的表达。SIRT3的表达与SOD活力呈正相关。结论大黄酚是通过上调SIRT3的表达,增强抗细胞凋亡及SOD的抗氧化作用;下调AQP4的表达,减轻脑缺血后脑水肿的发生,发挥其神经保护作用。展开更多
目的探讨沉默信息调节因子3(SIRT3)对肝癌细胞增殖的影响。方法 Western blotting检测SIRT3在正常肝组织、永生化肝细胞及肝癌细胞系中的蛋白表达水平;在肝癌细胞中过表达SIRT3,台盼蓝排斥实验检测过表达SIRT3对肝癌细胞增殖的影响,E...目的探讨沉默信息调节因子3(SIRT3)对肝癌细胞增殖的影响。方法 Western blotting检测SIRT3在正常肝组织、永生化肝细胞及肝癌细胞系中的蛋白表达水平;在肝癌细胞中过表达SIRT3,台盼蓝排斥实验检测过表达SIRT3对肝癌细胞增殖的影响,Ed U标记实验检测SIRT3对肝癌细胞DNA合成的影响;在肝癌细胞中过表达SIRT3,平板集落实验检测SIRT3对肝癌细胞集落形成能力的影响;q RT-PCR验证SIRT3的沉默效率,台盼蓝排斥实验检测SIRT3沉默对肝癌细胞增殖的影响,Ed U标记实验检测SIRT3沉默对肝癌细胞DNA合成的影响。结果 SIRT3在肝癌细胞系中的蛋白水平较永生化肝细胞、正常肝组织降低;SIRT3在肝癌细胞中成功过表达,过表达SIRT3使肝癌细胞增殖数目减少了约为51%~61%(P〈0.001),使肝癌细胞DNA合成下降了约57%(P〈0.05);过表达SIRT3抑制肝癌细胞的集落形成能力;SIRT3沉默有效,SIRT3沉默使肝癌细胞的增殖增加了约51%~61%(P〈0.01),使肝癌细胞的DNA合成能力增强了137%~149%(P〈0.01)。结论 SIRT3可抑制肝癌细胞的增殖。展开更多
文摘目的观察肾纤维化模型中沉默信息调节因子3(silent information regulator 3,Sirt3)的表达变化及有氧糖酵解水平变化,探讨Sirt3在肾间质纤维化中的作用及机制。方法野生型小鼠及Sirt3基因敲除小鼠分别构建单侧输尿管梗阻肾纤维化模型,对侧肾脏为假手术对照组。HE染色及Masson染色观察肾脏病理变化,蛋白质印迹法检测Sirt3、纤维化相关标志性蛋白(纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白)、有氧糖酵解关键酶(己糖激酶2、M2型丙酮酸激酶)及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达,脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测肾小管上皮细胞凋亡;体外培养人肾小管上皮细胞,分为对照组和si-Sirt3组,转化生长因子β1处理细胞,蛋白质印迹法检测上述纤维化相关蛋白及有氧糖酵解关键酶的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡。结果在体内外纤维化反应中,肾小管上皮细胞凋亡和有氧糖酵解水平明显增加,Sirt3表达显著下调。而Sirt3基因敲除进一步加重了肾小管上皮细胞凋亡和异常的有氧糖酵解,促进了肾间质纤维化。结论Sirt3可能通过抑制肾小管上皮细胞有氧糖酵解减轻肾间质纤维化,在慢性肾脏病中发挥保护作用。
文摘目的测定脑组织中沉默信息调节因子(SIRT)3和水通道蛋白(AQP)4的表达,探讨大黄酚对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法随机将昆明小鼠分为空白对照组、假手术组、模型组、大黄酚组。采用改良的Himori法暂时性阻断双侧颈总动脉建立脑缺血再灌注模型。观察脑缺血5 min再灌注24 h后小鼠的行为学表现,计算神经功能损伤评分,应用免疫组化法测定脑组织中沉默信息调节因子(SIRT)3,水通道蛋白(AQP)4的表达,测定脑组织中的超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果大黄酚能明显改善脑缺血再灌注后小鼠的神经功能损伤情况;大黄酚可提高脑组织中SOD的活力;小鼠脑缺血再灌注后24 h SIRT3及AQP4表达均增强,而应用大黄酚可以降低AQP4以及上调SIRT3的表达。SIRT3的表达与SOD活力呈正相关。结论大黄酚是通过上调SIRT3的表达,增强抗细胞凋亡及SOD的抗氧化作用;下调AQP4的表达,减轻脑缺血后脑水肿的发生,发挥其神经保护作用。