心房颤动患者外周血沉默信息调节因子2相关酶1/核因子κB信号通路与认知功能障碍的相关性研究

目的探讨心房颤动(简称房颤)患者外周血沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin 1,SIRT1)/核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路与认知功能障碍的相关性。方法选取河北北方学院附属第一医院2019年5月至2020年5月收治的100例房颤患者,按蒙特利尔认知评估(Montreal cognitive assessment,MoCA)量表分组,MoCA评分<26分为研究组(53例),MoCA评分≥26分为对照组(47例)。入院后测定两组患者SIRT1/NF-κB信号通路相关分子的表达水平,采用MoCA量表、简易智力状态检查(mini-mental state examination,MMSE)量表对两组患者的进行认知功能评估。MoCA、MMSE评分与SIRT1/NF-κB信号通路相关分子表达水平的关系采用Pearson相关分析。以认知功能障碍为因变量,SIRT1、NF-κB表达水平为自变量对房颤患者认知功能障碍的独立危险因素进行logistic回归分析。结果研究组SIRT1表达水平低于对照组,NF-κB表达水平高于对照组,差异均有显著性(P<0.05)。研究组MMSE评分低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。Pearson相关分析显示,研究组SIRT1、NF-κB表达水平与MoCA、MMSE评分具有相关性(r=0.431、-0.324、-0.535、-0.514,P<0.05);校正后发现,SIRT1、NF-κB表达水平与MoCA、MMSE评分之间仍存在明显相关性(r=0.421、-0.352、-0.362、-0.425,P<0.05)。Logistic回归分析显示,SIRT1、NF-κB表达水平为房颤患者认知功能障碍的独立危险因素(P<0.05)。结论房颤患者外周血SIRT1/NF-κB信号通路与认知功能障碍具有明显相关性,SIRT1、NF-κB表达水平为房颤患者认知功能障碍的独立危险因素。

沉默信息调节因子1-肝X受体/核因子-κB信号通路在促使动脉粥样硬化斑块消退中的作用

目的研究沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)与泡沫细胞移出动脉粥样硬化斑块相关调控通路肝X受体(liver X receptor,LXR)-趋化因子受体7(chemokine receptor-7,CCR7)和促炎症信号核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的相关性。方法体外培养人单核细胞株U937细胞,构建泡沫细胞模型;分别用SIRT1激动剂SRT1720和RNA干扰等方法使SIRT1高表达或抑制其表达,观察SIRT1和其下游靶分子LXR、CCR7以及促炎因子NF-κB、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达变化。结果在泡沫细胞模型中,SRT1720使SIRT1蛋白表达水平升高,LXR和其靶分子CCR7蛋白水平无显著变化,而NF-κB以及其靶分子TNF-α蛋白表达水平显著下降。在加入SRT1720的基础上再用RNA干扰抑制SIRT1的表达,结果表明RNA干扰使SIRT1的表达水平显著下降,LXR和其靶分子CCR7表达也随之下降;与此同时,NF-κB及其下游靶基因TNF-α表达水平显著升高。结论在泡沫细胞中SIRT1可能是LXR-CCR7以及NF-κB信号通路的上游,并且有可能通过上调LXR-CCR7信号通路,抑制NF-κB炎症信号来参与调节泡沫细胞从动脉粥样硬化斑块中移出。

沉默信息调节因子2相关酶1通过增强肝X受体及抑制核因子κB信号起到抗动脉粥样硬化作用

目的：探讨冠状动脉粥样硬化患者外周血单个核细胞（PBMCs）中沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）与肝X受体（LXR）-趋化因子受体7（CCR7）/ATP联结盒转运因子A1（ABCA1）及炎症信号核因子κB（NF-κB）的关系。方法抽取104名正常人（NC组）以及111例冠状动脉粥样硬化患者（AS组）外周血，提取PBMCs，用实时荧光定量多聚酶链反应（qPCR）检测PBMCs中SIRT1、LXR及其下游CCR7/ ABCA1和促炎症信号NF-κB及其下游肿瘤坏死因子（TNF-α）的相对mRNA水平，并收集相关临床数据。所有数据应用SPSS 20.0统计软件进行分析。结果 qPCR结果显示所有AS组患者PBMCs中的SIRT1、LXR及其下游因子CCR7、ABCA1 mRNA含量比NC组低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；而NF-κB及其下游因子TNF-α mRNA含量高于NC组（P＜0.05）。相关性分析显示LXR mRNA与HDL呈正相关（P＜0.01， r=0.22），NF-κB、TNF-αmRNA与单核细胞数量呈正相关（P＜0.05，r=0.31，0.23）。结论 SIRT1可能通过抑制NF-κB信号及增强LXR-CCR7/ABCA1信号，抑制炎症，促进胆固醇流出，甚至激活单核-巨噬细胞源性泡沫细胞移出动脉粥样硬化斑块的潜能，从而起到抑制动脉粥样硬化发展甚至逆转动脉粥样硬化的作用。

白藜芦醇通过调节沉默信息调节因子1/核转录因子-κB通路改善高血压左心室重塑

目的:研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对自发性高血压大鼠(spontaneous hypertension rat,SHR)左心室重塑的影响及其对沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)/核转录因子κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)信号通路的作用。方法:将8只8周龄雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠作为正常组(WKY组),将40只8周龄雄性SHR随机分为SHR组、RES组、EX527组、RES+EX527组、RES+吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)组,每组8只,予以相应药物干预12周。测量大鼠体质量、收缩压、心脏超声、左心室质量、左心室质量指数(left ventricular mass index,LVMI)、心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF)、氧化应激指标、SIRT1和NF-κB以及炎症因子蛋白表达水平,观察HE和Masson染色下的心脏形态病理改变。结果:与WKY组[LVMI(2.12±0.10) mg/g,CVF(0.18±0.09)%,SIRT1蛋白表达量1.40±0.05,NF-κB蛋白表达量0.46±0.06]相比,SHR组[LVMI(3.07±0.07) mg/g,CVF(2.60±0.56)%,SIRT1蛋白表达量0.78±0.08,NF-κB蛋白表达量1.41±0.08]左心室重塑程度严重,氧化应激和炎症因子水平及NF-κB表达明显增加(P<0.05),而SIRT1表达降低(P<0.05)。RES组[LVMI(2.72±0.09) mg/g,CVF(1.10±0.30)%,SIRT1蛋白表达量0.99±0.07,NF-κB蛋白表达量0.98±0.12]较SHR组左心室重塑程度减轻,氧化应激和炎症因子水平及NF-κB表达降低(P<0.05),SIRT1表达增加(P<0.05);而EX527组[LVMI(3.18±0.08) mg/g,CVF(2.83±0.98)%,SIRT1蛋白表达量0.60±0.02,NF-κB蛋白表达量1.68±0.07]结果与RES组相反。与RES组相比,RES+EX527组有逆转RES改善左心室重塑的趋势;而RES+PDTC组更有改善左心室重塑的趋势。结论:RES能改善SHR的左心室重塑,其机制可能与调节SIRT1/NF-κB通路从而减轻氧化应激和炎症反应损伤有关。

金合欢素调节Sirt1/AMPK/Nrf2信号通路对糖尿病白内障大鼠氧化应激损伤的影响

目的探讨金合欢素对糖尿病白内障(DC)大鼠氧化应激损伤的影响及其对沉默调节蛋白1(Sirt1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的调控作用。方法60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、金合欢素低剂量组、金合欢素高剂量组、金合欢素+Sirt1抑制剂(EX527)组,除对照组以外均构建DC大鼠模型,其中,金合欢素低剂量组、金合欢素高剂量组大鼠分别经颈部皮下注射10 mg·kg^(-1)、20 mg·kg^(-1)的金合欢素,金合欢素+EX527组大鼠经颈部皮下注射20 mg·kg^(-1)金合欢素,均为每天2次,同时金合欢素+EX527组大鼠经皮下埋入渗透微型泵每天泵入3.5 mg·kg^(-1)EX527,其余组别均泵入等量生理盐水,给药持续4周。给药结束后,测量血压和空腹血糖(FBG),裂隙灯照射法观察大鼠晶状体混浊状况,HE染色观察晶状体组织病理学变化,ELISA测定血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β的含量,Western blot检测Sirt1、p-AMPK、AMPK、Nrf2蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠晶状体上皮细胞呈片状、条索状,发生迁移性聚集,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均降低(均为P<0.05);与模型组比较,金合欢素低、高剂量组大鼠晶状体上皮细胞迁移性聚集现象改善,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均降低,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均升高(均为P<0.05);与金合欢素高剂量组比较,金合欢素+EX527组晶状体上皮细胞形态改变和聚集现象加重,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均降低(均为P<0.05)。结论金合欢素可能通过激活Sirt1/AMPK/Nrf2通路保护DC大鼠免受氧化应激损伤。

紫铆因通过激活SIRT1介导FOXO1/NF-κB信号通路改善坐骨神经损伤

目的探讨紫铆因诱导SIRT1激活对大鼠坐骨神经损伤的影响及其可能的机制。方法将30只大鼠随机分为假手术组、坐骨神经损伤组和紫铆因组,每组10只。分别于建立大鼠坐骨神经损伤模型手术当天、术后第7天和第14天检测各组大鼠BBB运动评分和坐骨神经功能指数;术后第14天取材,通过HE染色观察各组大鼠坐骨神经病理学改变,通过TUNEL实验检测各组大鼠坐骨神经细胞凋亡水平,通过Western blotting检测各组大鼠坐骨神经BDNF、MBP、GAP-43、SIRT1、FOXO1、Keap1和NF-κB蛋白表达水平。结果与坐骨神经损伤组大鼠相比,紫铆因组坐骨神经损伤大鼠BBB运动评分和坐骨神经功能指数增加,坐骨神经病理损伤改善,坐骨神经细胞凋亡水平降低,坐骨神经BDNF、MBP、GAP-43和SIRT1蛋白表达水平增高,FOXO1、Keap1和NF-κB蛋白表达水平降低。结论紫铆因可通过上调坐骨神经损伤大鼠SIRT1表达抑制FOXO1/NF-κB信号通路激活,继而改善大鼠坐骨神经病理损伤。

七叶皂苷钠调控SIRT1/NF-κB信号通路对帕金森病大鼠的神经保护作用

目的探究七叶皂苷钠通过调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子κB(NF-κB)信号通路发挥对帕金森病大鼠的神经保护作用。方法采用6-羟基多巴胺注射法构建帕金森病大鼠模型,将建模成功的48只大鼠随机分为模型组、七叶皂苷钠低剂量组(1.8 mg/kg)、七叶皂苷钠高剂量组(3.6 mg/kg)、七叶皂苷钠+EX527组(七叶皂苷钠3.6 mg/kg+SIRT1抑制剂EX5275 mg/kg),每组12只;另取12只健康大鼠作为假手术组。各药物组大鼠腹腔注射相应药液,每天1次,持续21 d。末次给药结束24 h后,检测大鼠运动及认知功能,观察其黑质区和海马组织CA1区神经元形态,检测其黑质纹状体中多巴胺(DA)含量和黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、α突触核蛋白(α-Syn)表达水平,检测其血清中促炎因子[白细胞介素6(IL-6)、IL-18]、抗炎因子(IL-10)水平及黑质纹状体中SIRT1、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NF-κB p65蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠黑质区和海马组织CA1区神经元损伤严重;其旋转圈数、逃避潜伏期、黑质区α-Syn蛋白表达水平、血清中促炎因子水平、黑质纹状体中p-NF-κB p65与NF-κBp65蛋白的相对表达量之比均显著升高或延长(P<0.05),目标象限停留时间、黑质纹状体中DA含量及黑质区TH蛋白表达水平、血清中抗炎因子水平、黑质纹状体中SIRT1蛋白表达水平均显著缩短或降低(P<0.05)。与模型组比较,七叶皂苷钠各剂量组大鼠神经元损伤程度减轻,各定量指标均显著改善,且高剂量组的改善更为明显(P<0.05),而EX527可逆转高剂量七叶皂苷钠的改善作用(P<0.05)。结论七叶皂苷钠可通过上调SIRT1蛋白表达来抑制NF-κB信号激活,从而抑制帕金森病大鼠的神经炎症,改善其运动及认知功能障碍,最终起到神经保护作用。

沉默信息调节因子1对软骨损伤修复机制的研究进展

软骨容易受到内外界环境影响造成损伤,但因其缺乏神经、血管和淋巴等组织,所以自我修复能力有限,在这一过程中长寿基因沉默信息调节因子1(SIRT1)发挥重要作用。软骨受损后,软骨合成分解代谢紊乱,SIRT1基因可通过影响软骨细胞炎症反应、氧化应激等因素调控软骨损伤进程。在分子机制中,SIRT1基因具有调节软骨稳态的重要作用,其可通过Notch、BMP、Wnt/β-catenin等信号通路对软骨损伤修复进行调节。在本综述中,阐述了SIRT1基因在病理生理条件下对软骨的保护作用及可能的修复机制,为恢复软骨稳态、实现软骨代谢平衡相关研究提供理论支撑。

沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)调控p38MARK信号通路对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及机制

目的探讨沉默信息调节因子相关酶1(silment information regulator factor related enzymes 1,SIRT1)对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用及其机制。方法取健康清洁级雄性Sprague-Dawley大鼠60只,应用随机数字表法分为正常对照组(正常组)、糖尿病组(病变组)、SIRT1激动剂白藜芦醇治疗组(治疗组)。病变组和治疗组大鼠按60 mg·kg^(-1)单次腹腔注射链脲佐菌素以诱导糖尿病大鼠模型;正常组按60 mg·kg^(-1)腹腔注射枸橼酸钠缓冲液。72 h后取鼠尾静脉血检测血糖,血糖值>16.7 mmol·L^(-1)定为糖尿病大鼠。自造模成功后第2天起治疗组每天每只鼠给予白藜芦醇20 g·kg^(-1)灌胃,正常组和病变组每天每只鼠给予亚甲砜灌胃。8周后进行视网膜免疫组织化学染色,TUNEL法检测视网膜RGCs凋亡,Western blot检测SIRT1、p38 MAPK、Caspase-3蛋白的表达。结果正常组、病变组、治疗组8周后RGCs凋亡指数分别为:(0.848±0.131)%、(19.038±1.327)%、(10.461±1.089)%,三组间差异有统计学意义(F=670.497,P=0.000)。进一步两两比较:正常组RGCs凋亡指数与病变组、治疗组间差异均有统计学意义(均为P=0.000);治疗组与病变组间差异亦有统计学意义(P=0.000)。与正常组(0.132±0.043)相比,病变组(0.060±0.028)和治疗组(0.073±0.026)大鼠视网膜SIRT1蛋白表达降低,总体差异有统计学意义(F=1310.663,P=0.000)。进一步两两比较,病变组和治疗组与正常组间,以及病变组与治疗组间差异均有统计学意义(均为P=0.000)。病变组(1.121±0.082,0.266±0.005)和治疗组(0.574±0.012,0.190±0.060)大鼠视网膜p38MAPK、Caspase-3蛋白表达较正常组(0.402±0.012,0.156±0.006)明显增加,总体差异有统计学意义(F=604.500、1056.709,P=0.000、0.000)。进一步两两比较:p38 MAPK、Caspase-3蛋白表达在正常组与病变组间、正常组与治疗组间以及病变组与治疗组间差异均有统计学意义(均为P=0.000)。结论在糖尿病视网膜病变模型中,SIRT1表达上调,抑制RGCs的凋亡,对糖尿病视网膜病变RGCs起保护作用。其抗凋亡作用机制可能与其抑制p38 MAPK的表达相关。p38 MAPK信号通路是糖尿病视网膜病变中SIRT1介导的神经保护作用的重要通路之一。

能量限制通过激活沉默信息调节因子2相关酶1信号通路抑制小鼠卵泡发育和消耗

目的:探讨能量限制(CR)是否通过激活沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)信号通路调控雌性小鼠卵泡发育和卵巢寿命。方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为对照组、CR组和SIRT1激活剂(SRT1720)干预组;观察3组摄食量、体质量变化;26周后取小鼠卵巢、内脏脂肪称重,卵巢组织切片经苏木精-伊红染色,计数不同发育阶段的各级卵泡数;用Western'blot检测卵巢中SIRT1、FOXO3a、NRF1、SIRT6和p53的蛋白表达水平。结果:SRT1720和CR组体质量、卵巢及内脏脂肪重量相似,但均比对照组轻(P<0.05)。3组卵巢中卵泡总数相似。SRT1720和CR组存活卵泡数和闭锁卵泡数相似,但存活卵泡数均比对照组多(P<0.05),闭锁卵泡数均比对照组少(P<0.05)。SRT1720和CR组原始卵泡数、窦状卵泡数和黄体数均相似,但原始卵泡数均比对照组多(P<0.05),窦状卵泡数和黄体数均比对照组少(P<0.05)。Western blot显示SRT1720和CR组卵巢SIRT1、FOXO3a、NRF1、SIRT6和p53蛋白表达水平相似,且SIRT1、FOXO3a、NRF1和SIRT6蛋白水平均高于对照组(P<0.05),而p53蛋白水平均低于对照组(P<0.05)。结论:CR通过激活SIRT1信号抑制成年雌性小鼠原始卵泡的激活以及卵泡发育与消耗,保持卵巢中卵泡的储备量,从而延长卵巢寿命。

番茄红素调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对过敏性结膜炎小鼠的治疗作用

目的基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨番茄红素(LYC)减轻过敏性结膜炎小鼠炎症的作用机制。方法利用卵清蛋白(OVA)致敏建立AC小鼠模型。将BALB/c小鼠分为正常组(NC组)、模型组(AC组)、LYC低组(5 mg/kg)、LYC中组(10 mg/kg)、LYC高组(20 mg/kg),LYC高+AMPK抑制剂(CC)组(0.2 mg/kg)。观察小鼠眼周情况,采用苏木精-伊红染色观察结膜组织病理学变化,采用流式细胞仪检测脾脏中Th17、Treg细胞比例,采用酶联免疫吸附试验试剂盒检测血清中炎症因子、免疫球蛋白(Ig)E、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)水平,采用蛋白质印迹法检测结膜组织AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路蛋白水平。结果与NC组比较,AC组小鼠眼部出现结膜充血、红肿、溢泪等现象,结膜组织嗜酸性粒细胞较多,Th17细胞比例、白细胞介素(IL)-17、IL-6、IgE、TSLP、磷酸化AMPK(p-AMPK)、核NF-κB p65水平升高,Treg细胞比例、IL-10、转化生长因子(TGF)-β、SIRT1水平降低(P<0.05)。与AC组比较,LYC中、高组小鼠眼部结膜充血、水肿、溢泪等明显减轻,结膜组织嗜酸性粒细胞较少,脾脏中Th17/Treg细胞比例趋向平衡,IL-17、IL-6、IgE、TSLP、核NF-κB p65水平降低,IL-10、TGF-β、p-AMPK、SIRT1水平升高(P<0.05)。CC可抵消LYC对AC小鼠的上述保护作用。结论LYC可减轻AC小鼠的过敏和炎症反应,维护机体免疫平衡,其机制可能与促进AMPK/SIRT1通路活化,抑制NF-κB通路活化有关。

双路通脑方调节SIRT1/Nrf2/GPx4信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡的影响

目的探讨双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡的作用以及对沉默信息调节因子2同源物1(SIRT1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)信号通路的调节机制。方法采用随机数字表法选取20只大鼠作为假手术组,剩余70只大鼠均利用大脑中动脉闭塞法制备缺血性脑卒中大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型对照组、双路通脑方组、双路通脑方+SIRT1抑制剂组(双路通脑方+EX527组),每组20只。14 d后,对大鼠进行神经功能损伤评分;TTC染色检测大鼠脑梗死面积;HE染色检测大鼠脑组织病理变化;尼氏染色检测大鼠脑组织神经元数量;试剂盒检测大鼠脑组织中铁离子(Fe^(2+))、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的水平;免疫组化检测大鼠脑组织中酰基-辅酶a合成酶长链家族成员4(ACSL4)、转铁蛋白受体(TFR)、铁蛋白重链多肽1(FTH1)蛋白的阳性表达;Western blotting法检测大鼠脑组织中SIRT1、Nrf2、GPx4及胱氨酸/谷氨酸转运蛋白(SLC7A11)蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型对照组大鼠的神经功能缺损评分、脑梗死面积、Fe^(2+)和MDA含量、ACSL4、TFR蛋白表达升高(P<0.05),神经元数量、SOD和GSH含量、FTH1、SIRT1、Nrf2、GPx4及SLC7A11蛋白表达均降低(P<0.05);与模型对照组比较,双路通脑方组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积、Fe^(2+)和MDA含量、ACSL4、TFR蛋白表达降低(P<0.05),神经元数量、SOD和GSH含量、FTH1、SIRT1、Nrf2、GPx4及SLC7A11蛋白表达均升高(P<0.05);采用SIRT1抑制剂进行回补实验,结果显示SIRT1抑制剂逆转了双路通脑方对神经元铁死亡的抑制作用,同时也抑制了Nrf2和GPx4的表达(P<0.05)。结论双路通脑方可能通过激活SIRT1/Nrf2/GPx4信号通路来抑制缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡。

基于ERK1/2-GSK3β-NFκB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响

目的 研究基于细胞外信号调节激酶(ERK)1/2-糖原合成酶激酶(GSK)3β-核因子(NF)κB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响。方法 40只SD大鼠随机抽取10只作为健康组进行对照,剩余建立慢性肾衰竭(CRF)模型,建模成功后分为模型组、治疗组(芪黄苁蓉通便散贴)、药物对照组(复元四红散)各10只。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肾功能、氧化应激相关指标水平,苏木素-伊红(HE)、Masson染色观察肾组织病理形态学,采集粪便检测肠道细菌种类及数量,Western印迹检测ERK1/2-GSK3β-NFκB通路相关蛋白。结果 与健康组相比,模型组尿素氮、血肌酐、尿酸、丙二醛、肠球菌、肠杆菌、ERK1/2、p-ERK1/2、GSK3β、p-GSK3β、NFκBp65、p-NFκBp65、单核细胞趋化蛋白-1、细胞间黏附分子-1升高,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、双歧杆菌、乳酸杆菌水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善,且以治疗组效果显著(P<0.05)。健康组肾组织结构正常;模型组肾小球变形,肾小管扩张,大量炎性细胞浸润;与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善。Masson染色显示,健康组结构正常;模型组出现肾组织肾小管发生变性、萎缩、破坏及再生等病理改变,间质中单核与淋巴细胞浸润及胶原纤维表达最多;治疗组与药物对照组肾小管、间质的病理改变得到有效改善,蓝色胶原纤维沉积也呈下降趋势。结论 芪黄苁蓉通便散贴可能是通过抑制ERK1-2-GSK3β-NF-κB通路的激活,改善CRF大鼠肠道菌群及肾功能。

射干麻黄汤通过调节SIRT1-NF-κB信号通路干预哮喘大鼠气道炎症的机制

目的探究射干麻黄汤对卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘大鼠气道炎症的防治作用及机制。方法将105只SPF雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,地塞米松组,桂龙咳喘宁组,射干麻黄汤高、中、低剂量组,每组15只。以卵清蛋白联合氢氧化铝复制大鼠哮喘模型,造模21 d后,正常组、模型组每天给予等体积的0.9%氯化钠溶液灌服,地塞米松组按0.405 mg/(kg·d)灌胃给药,桂龙咳喘宁按0.405 g/(kg·d)灌胃给药,射干麻黄汤高、中、低剂量组按12.96、6.48、3.24 g/(kg·d)灌胃给药。灌胃4周后,在末次OVA激发后2 h内解剖大鼠并取出肺组织、支气管肺泡灌洗液(BALF)。苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织的形态学变化及炎症细胞浸润;酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法测量BALF中白细胞介素(IL)-4、IL-5和肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量以及OVA特异性免疫球蛋白E(IgE)的浓度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肺组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)、核因子kappa B(NF-κB)p65和蛋白表达水平;反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测SIRT1、NF-κB p65mRNA的表达水平。结果HE染色发现各治疗组支气管壁损伤明显改善,炎性细胞浸润减少;ELISA结果显示,与正常组比较,模型组的各项炎性因子IgE、IL-4、IL-5和TNF-α均显著升高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组(射干麻黄汤组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组)的IgE、IL-4、IL-5和TNF-α均明显降低(P<0.01);RT-qPCR结果显示,与正常组比较,模型组的SIRT1mRNA相对表达水平显著下降(P<0.01),而NF-κB p65mRNA相对表达则显著升高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组的SIRT1mRNA均显著升高(P<0.01),而治疗组的NF-κB p65mRNA均显著下降(P<0.01);Western blot结果显示,与正常组比较,模型组的SIRT1相对表达水平显著下降(P<0.01),而NF-κB p65相对表达则显著升高(P<0.01);与模型组相比,各治疗组的SIRT1均显著升高(P<0.01),而NF-κB p65均显著下降(P<0.01)。结论射干麻黄汤通过调节SIRT1-NF-κB信号通路改善OVA诱导的支气管哮喘大鼠气道炎症性损伤。

软骨细胞中SIRT1基因敲减后作用状态不明确信号通路及对相关疾病或功能的影响

背景:沉默信息调节因子1以去乙酰化的方式调控软骨细胞中相关蛋白的功能,参与软骨细胞增殖分化,促进软骨缺损修复。目的:利用高通量技术筛选软骨细胞中沉默信息调节因子1基因敲减后作用状态不明确的信号通路以及产生变化的疾病或功能。方法:取处于对数生长期的小鼠ATDC5软骨细胞,分2组转染:对照组转染沉默信息调节因子1基因敲减阴性对照慢病毒,实验组转染沉默信息调节因子1基因敲减慢病毒。转染72 h后,利用小鼠基因表达谱芯片GeneChip®Mouse Genome 4302.0 Array检测mRNA的基因层面变化情况,应用生物信息学技术筛选激活或抑制不明确的信号通路以及这些信号通路相关因子,并分析疾病或功能模块的富集情况。结果与结论:①沉默信息调节因子1基因敲减后,小鼠ATDC5软骨细胞中激活或抑制状态不明确的信号通路有245条;②根据-log(P-value)排序选择排前20的激活或抑制状态不明确信号通路中的因子情况进行报道,包括IGFBP4、TGFBR1、CTGF、COL4A5、LHX2、IL1RL1、KLF6等;③根据-log(P-value)进行排序,细胞生长和增殖、生物体存活和细胞死亡与存活等14个疾病和功能密切相关模块明显变化;根据差异基因数量排序,生物体损伤和异常、癌症和细胞死亡与存活3个疾病和功能密切相关模块明显变化;根据-log(P-value)与差异基因数量综合排序,固有免疫应答这一疾病和功能模块被显著激活。

基于SIRT1/NF-κB通路探究秦艽醇提物对脂多糖诱导大鼠背根神经节神经元炎性损伤的保护作用及机制

目的探讨秦艽醇提物对脂多糖诱导大鼠背根神经节神经元(DRGn)炎性损伤的保护作用及其机制。方法大鼠分为假手术组、模型组(建模)、阳性组(建模+16 mg/kg普瑞巴林)和给药组(建模+50 mg/kg秦艽醇提物),测定大鼠建模前及给药前后的机械性触痛阈值(PWPT)。制备正常大鼠血清和秦艽醇提物低、高剂量大鼠含药血清,分离培养DRGn细胞并分为对照组(10%正常大鼠血清)、脂多糖组(100 ng/ml脂多糖+10%正常大鼠血清)、秦艽醇提物低浓度组(100 ng/ml脂多糖+10%秦艽醇提物低剂量大鼠含药血清)、秦艽醇提物高浓度组(100 ng/ml脂多糖+10%秦艽醇提物高剂量大鼠含药血清)及沉默信息调节因子(SIRT)1抑制组(100 ng/ml脂多糖+10%秦艽醇提物高剂量大鼠含药血清+98 nmol/L烟酰胺)。CCK-8测定DRGn细胞活力,流式细胞仪检测DRGn细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定DRGn细胞培养液中白细胞介素(IL)-6、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,Western印迹检测DRGn细胞中SIRT1、乙酰化(Ac)-核因子(NF)-κB p65、NF-κB p65蛋白表达。结果给药前模型组、给药组PWPT较建模前均显著降低(P<0.05);给药后,给药组PWPT较给药前、模型组均显著升高(P<0.05),与阳性组差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,脂多糖组DRGn细胞活力及细胞中SIRT1蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、细胞中Ac-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平及细胞培养液中IL-6、IL-18、TNF-α水平显著升高(P<0.05);与脂多糖组相比,秦艽醇提物低、高浓度组DRGn细胞活力及细胞中SIRT1蛋白水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、细胞中Ac-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平及细胞培养液中IL-6、IL-18、TNF-α水平显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性;与秦艽醇提物低、高浓度组相比,SIRT1抑制组DRGn细胞活力及细胞中SIRT1蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、细胞中Ac-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平及细胞培养液中IL-6、IL-18、TNF-α水平显著升高(P<0.05)。结论秦艽醇提物可激活SIRT1,促进NF-κB p65去乙酰化,减轻脂多糖诱导大鼠DRGn细胞炎性损伤。

通络熄风汤通过调控Mst1/Sirt3信号通路对自发性高血压大鼠心肌损伤程度的影响

目的:探讨通络熄风汤改善高血压大鼠心肌损伤的作用机制。方法:6只Sprague-Dawley大鼠作为空白组,12只自发性高血压大鼠随机分为模型组和通络熄风汤组。空白组和模型组大鼠给予去离子水灌胃,通络熄风汤组给予中药配方颗粒通络熄风汤悬浮液灌胃治疗,连续干预8周。采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌细胞中自噬受体蛋白1(SQSTM1/P62)、磷酸化哺乳动物无菌20样激酶1(p-Mst1)、沉默信息调节因子3(Sirt3)蛋白的含量,运用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织结构变化,以评价通络熄风汤对高血压心肌损伤改善的效果及机制。结果:与模型组比较,通络熄风汤组能够显著改善高血压大鼠的收缩压及舒张压(P<0.01)。通络熄风汤治疗后大鼠心肌细胞与模型组比较,排列情况与坏死状态均有明显改善。通络熄风汤组大鼠心肌组织中的p-Mst1、P62蛋白含量较模型组降低(P<0.01),Sirt3蛋白含量升高(P<0.01)。结论:通络熄风汤可以介导Mst1/Sirt3信号通路对心肌组织细胞自噬水平进行调整,并且保护心脏功能。

当归芍药散通过调节Sirt1/NF-κB信号通路改善高脂饮食诱导大鼠非酒精性脂肪肝炎症反应

目的:研究当归芍药散治疗高脂饮食(high-fat diet,HFD)诱导的大鼠非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)炎症反应的作用机制。方法:将大鼠随机分为5组:正常组、HFD组、阿伐他丁组、当归芍药散低剂量组、当归芍药散高剂量组。大鼠给予高脂肪饲料(59.3%脂肪饲料)6周,正常组大鼠同时给予正常饲料。从第5周开始,阿伐他丁组大鼠灌胃给予25 mg/kg阿伐他丁2周,当归芍药散低剂量组大鼠灌胃给予12.9 g/kg当归芍药散2周,当归芍药散高剂量组大鼠灌胃给予25.8 g/kg当归芍药散2周,检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、甘油三酯(triglyceride,TG)、胆固醇(cholesterol,TC)、血清细胞因子水平。同时检测大鼠肝脏沉默信息调节因子1(sirtuin 1,Sirt1)/核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路蛋白表达。结果:与模型组比较,当归芍药散能显著降低血清ALT、AST、TG、TC、血清细胞因子水平,改善肝脏组织病理学改变。此外,显著增加大鼠肝脏Sirt1表达,抑制肝脏NF-κB蛋白表达。结论:当归芍药散通过Sirt1/NF-κB通路治疗HFD大鼠NAFLD。

沉默信息调节因子1在新生儿坏死性小肠结肠炎肠组织中的表达特点

目的·探究沉默信息调节因子1(silent information regulator transcript 1,SIRT1)在坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)肠管组织中的表达特点,初步探讨SIRT1对NEC的影响及可能机制。方法·纳入2018年6月—2020年10月经浙江大学医学院附属儿童医院新生儿外科手术治疗的NEC患儿80例,分为观察组和对照组。观察组组织样本为炎症坏死肠管;对照组为经保守治疗后发生肠狭窄,再次选择外科手术治疗的NEC患儿,组织样本为切缘肠管。收集2组患儿术前24 h内的血清中降钙素原(procalcitonin,PCT)、超敏C反应蛋白(hypersensitive C reactive protein,hs-CRP)、细胞因子[白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、IL-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)]以及性别、孕周等临床资料。采用免疫组织化学法检测2组患儿组织样本中的SIRT1、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)和Smad3蛋白的表达水平。体外培养SD雌性大鼠小肠上皮IEC-6细胞,采用干扰小RNA(small interfering RNA,siRNA)技术抑制IEC-6细胞中的SIRT1表达后,使用蛋白质印迹检查NF-κB表达变化,通过Cell Counting Kit-8(CCK8)和Transwell迁移实验检测SIRT1对IEC-6增殖和迁移能力的影响。结果·2组患儿的性别、孕周、出生体质量和分娩方式等一般资料差异无统计学意义。与对照组相比,观察组术前24 h内血清hs-CRP、PCT、IL-6、IL-10升高(均P=0.000)。与对照组NEC肠狭窄切缘肠管组织相比,观察组NEC坏死肠管组织中的SIRT1呈低表达,NF-κB呈过表达(均P=0.000)。Smad3蛋白和TGF-β1蛋白表达2组差异无统计学意义。NEC坏死肠管组织中SIRT1与NF-κB表达呈负相关(r=−0.592,P=0.000)。抑制SIRT1的mRNA和蛋白表达后,IEC-6细胞中的NF-κB相对表达量升高,细胞的增殖能力和迁移能力明显降低。结论·SIRT1可能通过抑制NF-κB的表达来降低NEC中炎症因子的表达,从而减轻NEC的进展。另一个可能的机制是SIRT1通过保护肠上皮细胞,减少其凋亡和迁移,从而减轻NEC的进展。

白藜芦醇对糖尿病白内障大鼠正沉默信息调节因子2相关酶1基因表达的影响

目的探讨白藜芦醇对糖尿病白内障大鼠晶状体正沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)基因表达的影响。方法 80只Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组、糖尿病模型组及白藜芦醇低剂量组及白藜芦醇高剂量组。糖尿病模型组、白藜芦醇低剂量组及白藜芦醇高剂量组一次性腹腔注射链脲菌素(STZ)(60 mg/kg)制备糖尿病大鼠模型。成模后低剂量组每日20 mg/kg,高剂量组每日100 mg/kg予白藜芦醇灌胃。裂隙灯显微镜照相机记录各组晶状体变化。12周实验结束时测定各组大鼠晶状体丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶含量。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组大鼠晶状体SIRT1、肿瘤抑制因子P53、叉头转录因子1、核转录因子κB(NF-κB)表达情况。结果糖尿病模型组大鼠晶状体均发生不同程度混浊,甚至完全混浊,形成白内障。白内障糖尿病大鼠晶状体MDA(7.96±0.51)nmol/mg·prot较正常对照组(4.21±0.27)nmol/mg·prot升高(P<0.01),糖尿病白内障大鼠晶状体SOD、谷胱甘肽过氧化酶[(31.92±5.03)和(7.43±1.53)u/mg·prot]较正常对照组[(61.86±6.17)和(13.61±2.27)u/mg·prot]降低(P<0.01)。高剂量白藜芦醇组大鼠晶状体MDA(4.64±0.42)nmol/mg·prot较白内障糖尿病大鼠晶状体(7.96±0.51)nmol/mg·prot降低(P<0.01)。高剂量白藜芦醇组大鼠晶状体SOD、谷胱甘肽过氧化酶[(52.41±6.54)和(12.76±1.72)u/mg·prot]较白内障糖尿病大鼠晶状体SOD、谷胱甘肽过氧化酶[(31.92±5.03)和(7.43±1.53)u/mg·prot]增高(P<0.01)。白内障糖尿病大鼠晶状体SIRT1 mRNA表达(0.187±0.034)较正常对照组大鼠(0.523±0.089)降低(P<0.01)。高剂量白藜芦醇组大鼠晶状体SIRT1 mRNA表达(0.497±0.072)较白内障糖尿病大鼠晶状体(0.187±0.034)增强(P<0.01)。白内障糖尿病大鼠晶状体P53、叉头转录因子1、NF-κB mRNA表达(0.816±0.153)、(1.269±0.231)、(0.896±0.029)较正常对照组(0.592±0.104)、(0.674±0.112)、(0.495±0.008)增强(P<0.01)。高剂量白藜芦醇组糖尿病大鼠晶状体P53、叉头转录因子1、NF-κB mRNA表达(0.609±0.107)、(0.713±0.121)、(0.397±0.018)较白内障糖尿病大鼠(0.816±0.153)、(1.269±0.231)、(0.896±0.029)降低(P<0.01)。结论白藜芦醇可能通过调节SIRT1表达,进一步调节下游基因P53、叉头转录因子1、NF-κB的表达,抑制和延缓晶状体上皮细胞凋亡,延缓糖尿病大鼠白内障的发生发展。