基于核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1信号通路探讨益气康肺方对脂多糖感染急性肺损伤地鼠氧化损伤的影响

目的基于核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(nuclear factor erythroid-2-related factor 2/heme oxygenase 1,Nrf2/HO-1)信号通路探讨益气康肺方对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)感染的金黄地鼠肺氧化损伤的影响及其作用机制。方法将60只SPF级叙利亚金黄地鼠,随机分为空白组、模型组、地塞米松组、益气康肺方低剂量组、益气康肺方中剂量组、益气康肺方高剂量组,每组雌性5只,雄性5只。造模开始前予以预防性给药,空白组和模型组予以等量生理盐水灌胃,地塞米松组于造模前连续腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液4天,益气康肺方低、中、高剂量组于造模前连续灌胃给予相应剂量中药混悬液14天。预防性给药结束后第2天,开始LPS气管滴注建立急性肺损伤(acute lung injury,ALI)地鼠模型,造模结束48小时后解剖取材。BCA法检测肺泡灌洗液蛋白含量水平并计算地鼠肺指数;HE染色检测肺组织病理改变;荧光探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;TBA法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;WST-1法检测肺组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)活力;Western blot法检测肺组织Nrf2、HO-1蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组肺指数及BALF中蛋白浓度升高,肺组织病理损伤严重,ROS及MDA水平升高,SOD和GSH-PX活力较低,Nrf2、HO-1蛋白含量较低。药物干预处理后,与模型组比较,地塞米松和各中药组肺指数及BALF中蛋白浓度较低,肺组织病理损伤轻,ROS及MDA水平低,SOD和GSH-PX活力高,Nrf2、HO-1蛋白含量高,尤以益气康肺方高剂量组疗效最为显著(P<0.05)。结论益气康肺方可能是通过激活Nrf2/HO-1通路,增强SOD、GSH-PX的活力,抑制LPS引起的炎症和氧化损伤。

心房颤动患者外周血沉默信息调节因子2相关酶1/核因子κB信号通路与认知功能障碍的相关性研究

目的探讨心房颤动(简称房颤)患者外周血沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin 1,SIRT1)/核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路与认知功能障碍的相关性。方法选取河北北方学院附属第一医院2019年5月至2020年5月收治的100例房颤患者,按蒙特利尔认知评估(Montreal cognitive assessment,MoCA)量表分组,MoCA评分<26分为研究组(53例),MoCA评分≥26分为对照组(47例)。入院后测定两组患者SIRT1/NF-κB信号通路相关分子的表达水平,采用MoCA量表、简易智力状态检查(mini-mental state examination,MMSE)量表对两组患者的进行认知功能评估。MoCA、MMSE评分与SIRT1/NF-κB信号通路相关分子表达水平的关系采用Pearson相关分析。以认知功能障碍为因变量,SIRT1、NF-κB表达水平为自变量对房颤患者认知功能障碍的独立危险因素进行logistic回归分析。结果研究组SIRT1表达水平低于对照组,NF-κB表达水平高于对照组,差异均有显著性(P<0.05)。研究组MMSE评分低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。Pearson相关分析显示,研究组SIRT1、NF-κB表达水平与MoCA、MMSE评分具有相关性(r=0.431、-0.324、-0.535、-0.514,P<0.05);校正后发现,SIRT1、NF-κB表达水平与MoCA、MMSE评分之间仍存在明显相关性(r=0.421、-0.352、-0.362、-0.425,P<0.05)。Logistic回归分析显示,SIRT1、NF-κB表达水平为房颤患者认知功能障碍的独立危险因素(P<0.05)。结论房颤患者外周血SIRT1/NF-κB信号通路与认知功能障碍具有明显相关性,SIRT1、NF-κB表达水平为房颤患者认知功能障碍的独立危险因素。

瑞舒伐他汀上调沉默信息调节因子2相关酶1/核转录因子-κB信号通路抑制阿霉素所致的心肌损伤的研究

目的：探讨沉默信息调节因子2相关酶1/核转录因子-κB（Sirt1/NF-κB）信号通路在抗肿瘤药阿霉素诱导的心肌损伤中的作用及瑞舒伐他汀钙的干预效果。方法：将30只4-6周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组和干预组,每组各10只。干预组预先给予瑞舒伐他汀钙稀释灌胃7天后,干预组和模型组分别给予阿霉素15 mg/kg腹腔注射建立心肌损伤模型,建模后干预组继续瑞舒伐他汀干预5天,同时模型组与对照组给予等量生理盐水灌胃。12天后,处死全部小鼠取心脏组织,多聚甲醛固定,经石蜡包埋、切片、苏木精-伊红（HE）染色后,观察各组小鼠心肌病理变化;取心肌组织匀浆检测氧化应激指标丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力;免疫组化法测各组小鼠心肌Sirt1/NF-κB表达水平。结果：与对照组相比,模型组心肌匀浆MDA含量、心肌组织NF-κB水平均明显升高,匀浆SOD活力、心肌组织Sirt1水平均显著降低（P〈0.05）,差异均有统计学意义,且心肌结构紊乱、炎症细胞浸润明显;与模型组比较,干预组MDA含量、NF-κB水平均明显下降但仍高于对照组,匀浆SOD活力、心肌Sirt1水平均升高（P〈0.05）,差异有统计学意义,且心肌结构完整、细胞水肿及淋巴浸润明显减少。结论：Sirt1/NF-κB信号通路参与了阿霉素诱导的心肌损伤过程,瑞舒伐他汀能通过上调该信号通路保护阿霉素所致的心肌毒性损伤。

沉默信息调节因子2相关酶1及相关信号网络在糖尿病中的作用

糖尿病(diabetes mellitus,DM)是目前临床医学中最普遍的代谢性疾病之一,并且已经成为全球关注的公共卫生问题。沉默信息调节因子2相关酶1(silencing information regulator 2 related enzyme 1,SIRT1)是一种腺嘌呤二核苷酸依赖性去乙酰化酶,参与糖代谢和胰岛素的分泌过程,在DM的发病机制中扮演了重要角色。糖尿病主要是由于胰岛素分泌缺乏或者胰岛素抵抗导致的代谢紊乱综合征。SIRT1不仅在β细胞中通过p53、叉头盒转录因子O(forkhead box transcription factor class O,FoxO)、烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribose transferase,NAMPT)等相关靶点影响胰岛素分泌;还可以通过胰岛素受体、脂联素影响胰岛素敏感性从而干扰胰岛素抵抗。此外,SIRT1还可以通过抑制NF-κB信号通路,保护胰岛β细胞免受氧化应激和炎症细胞因子的刺激。同时,SIRT1通过促进线粒体的生物发生保证机体内所有细胞活动的供能,并避免脂质的积累。白色脂肪组织(white adipose tissue,WAT)、糖异生功能异常导致的糖尿病也受到SIRT1诸多影响。本文旨在探讨SIRT1与DM的关系及其中涉及的相关信号网络。

罗汉果皂苷通过沉默信息调节因子1/核因子E2相关因子2信号通路调控过氧化氢所致视网膜色素上皮细胞氧化应激反应

目的观察并初步探讨罗汉果皂苷对过氧化氢(H_(2)O_(2))所致视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化应激反应的影响及其可能作用机制。方法实验研究。将人RPE细胞随机分为对照组、H_(2)O_(2)组、沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂EX527组(EX527组)、罗汉果皂苷组、罗汉果皂苷+EX527组。噻唑蓝比色法检测各组细胞存活率;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;2',7'-二氯双氢荧光素二乙酸酯探针、黄嘌呤法、酶联免疫吸附试验分别检测细胞中活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量;实时定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测细胞中SIRT1、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA、蛋白相对表达量。多组间比较采用单因素方差分析;组间两两比较采用最小显著差法t检验。结果与对照组比较,H_(2)O_(2)组细胞存活率降低,凋亡率升高,细胞中ROS水平升高,SOD活力降低,MDA含量升高,SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与H_(2)O_(2)组比较,EX527组细胞存活率降低,凋亡率升高,细胞中ROS水平升高,SOD活力降低,MDA含量升高,SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05);罗汉果皂苷组细胞存活率升高,凋亡率降低,细胞中ROS水平降低,SOD活力升高,MDA含量降低,SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白相对表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与罗汉果皂苷组比较,罗汉果皂苷+EX527组细胞存活率降低,凋亡率升高,细胞中ROS水平升高,SOD活力降低,MDA含量升高,SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论罗汉果皂苷可减轻H_(2)O_(2)所致RPE细胞氧化应激反应,促进细胞增生,减少细胞凋亡;其可能通过激活SIRT1/Nrf2信号通路发挥抗氧化作用。

沉默信息调节因子2相关酶1在急性呼吸窘迫综合征/急性肺损伤中的研究进展

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)/急性肺损伤(ALI)是以不可控炎症反应导致肺泡屏障损伤为发病机制的临床疾病。肺部严重炎症反应时,肺泡内皮细胞和上皮细胞屏障破坏,引起微血管屏障通透性增加,进而导致肺水肿。因此,炎症介质的过度生成在破坏肺泡-毛细血管屏障和通透性中起着关键作用。沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)可通过去非组蛋白/组蛋白的去乙酰化作用影响细胞代谢、基因转录、细胞凋亡、炎症反应等生物学过程,减轻肺损伤严重程度。本文将近年来有关SIRT1在各种肺损伤模型下作用的研究进展进行综述,以期能够通过SIRT1对ARDS/ALI的治疗提供新思路。

膀胱移行细胞癌组织中沉默信息调节因子2相关酶1和E钙黏附素的表达及其相关性

目的探讨膀胱移行细胞癌组织中沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT-1)及E钙黏附素(E-cadherin)的定性表达情况及其相关性。方法选取2015年1月至2019年8月于西安交通大学第二附属医院行手术治疗的膀胱移行细胞癌患者81例,取手术切除的膀胱移行细胞癌组织和癌旁正常组织,免疫组织化学法检测SIRT-1及E-cadherin蛋白的表达,比较癌组织与癌旁正常组织中SIRT-1和E-cadherin阳性表达率,以及不同临床病理特征膀胱移行细胞癌患者癌组织中SIRT-1和E-cadherin的阳性表达率,分析SIRT-1与E-cadherin表达的相关性。结果SIRT-1阳性染色主要位于细胞核及细胞质,E-cadherin阳性染色主要位于细胞膜及细胞质。膀胱移行细胞癌组织中SIRT-1阳性表达率明显高于癌旁正常组织[92.6%(75/81)比13.6%(11/81)],而E-cadherin阳性表达率明显低于癌旁正常组织[25.9%(21/81)比93.8%(76/81)],差异均有统计学意义(χ^2=101.523、77.724,均P<0.001)。肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期和伴淋巴结转移患者的癌组织中SIRT-1阳性表达率分别高于肿瘤分期Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移患者,E-cadherin表达水平分别低于肿瘤分期Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移患者(均P<0.05)。经Spearman秩相关分析,膀胱移行细胞癌组织中SIRT-1与E-cadherin的表达呈负相关(ρ=-0.371,P=0.001)。结论膀胱移行细胞癌组织中SIRT-1阳性表达率增高,而E-cadherin阳性表达率降低,二者表达均与肿瘤分期、淋巴结转移有关且二者表达呈负相关。

能量限制通过激活沉默信息调节因子2相关酶1信号通路抑制小鼠卵泡发育和消耗

目的:探讨能量限制(CR)是否通过激活沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)信号通路调控雌性小鼠卵泡发育和卵巢寿命。方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为对照组、CR组和SIRT1激活剂(SRT1720)干预组;观察3组摄食量、体质量变化;26周后取小鼠卵巢、内脏脂肪称重,卵巢组织切片经苏木精-伊红染色,计数不同发育阶段的各级卵泡数;用Western'blot检测卵巢中SIRT1、FOXO3a、NRF1、SIRT6和p53的蛋白表达水平。结果:SRT1720和CR组体质量、卵巢及内脏脂肪重量相似,但均比对照组轻(P<0.05)。3组卵巢中卵泡总数相似。SRT1720和CR组存活卵泡数和闭锁卵泡数相似,但存活卵泡数均比对照组多(P<0.05),闭锁卵泡数均比对照组少(P<0.05)。SRT1720和CR组原始卵泡数、窦状卵泡数和黄体数均相似,但原始卵泡数均比对照组多(P<0.05),窦状卵泡数和黄体数均比对照组少(P<0.05)。Western blot显示SRT1720和CR组卵巢SIRT1、FOXO3a、NRF1、SIRT6和p53蛋白表达水平相似,且SIRT1、FOXO3a、NRF1和SIRT6蛋白水平均高于对照组(P<0.05),而p53蛋白水平均低于对照组(P<0.05)。结论:CR通过激活SIRT1信号抑制成年雌性小鼠原始卵泡的激活以及卵泡发育与消耗,保持卵巢中卵泡的储备量,从而延长卵巢寿命。

沉默信息调节因子2相关酶1通过增强肝X受体及抑制核因子κB信号起到抗动脉粥样硬化作用

目的：探讨冠状动脉粥样硬化患者外周血单个核细胞（PBMCs）中沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）与肝X受体（LXR）-趋化因子受体7（CCR7）/ATP联结盒转运因子A1（ABCA1）及炎症信号核因子κB（NF-κB）的关系。方法抽取104名正常人（NC组）以及111例冠状动脉粥样硬化患者（AS组）外周血，提取PBMCs，用实时荧光定量多聚酶链反应（qPCR）检测PBMCs中SIRT1、LXR及其下游CCR7/ ABCA1和促炎症信号NF-κB及其下游肿瘤坏死因子（TNF-α）的相对mRNA水平，并收集相关临床数据。所有数据应用SPSS 20.0统计软件进行分析。结果 qPCR结果显示所有AS组患者PBMCs中的SIRT1、LXR及其下游因子CCR7、ABCA1 mRNA含量比NC组低，差异具有统计学意义（P＜0.05）；而NF-κB及其下游因子TNF-α mRNA含量高于NC组（P＜0.05）。相关性分析显示LXR mRNA与HDL呈正相关（P＜0.01， r=0.22），NF-κB、TNF-αmRNA与单核细胞数量呈正相关（P＜0.05，r=0.31，0.23）。结论 SIRT1可能通过抑制NF-κB信号及增强LXR-CCR7/ABCA1信号，抑制炎症，促进胆固醇流出，甚至激活单核-巨噬细胞源性泡沫细胞移出动脉粥样硬化斑块的潜能，从而起到抑制动脉粥样硬化发展甚至逆转动脉粥样硬化的作用。

沉默信息调节因子2相关酶1激动剂增强载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的稳定性

目的:探讨沉默信息调节因子2相关酶(SIRT)1对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响及其可能机制。方法:雄性Apo E-/-小鼠随机分为高脂对照组、SIRT1激动剂组、SIRT1激动剂+抑制剂组。高脂饮食16周后,分别予NS、SRT1720、SRT1720和尼克酰胺腹腔注射6周。油红O和苏木精-伊红染色比较3组间动脉粥样硬化斑块大小;油红、Masson染色和免疫组化分别比较3组斑块中脂质、胶原纤维、巨噬细胞和平滑肌细胞成分面积各占斑块总面积的百分比;比较3组胸主动脉粥样硬化斑块易损指数大小。激光显微切割腹主动脉冰冻切片,实时荧光定量PCR法检测SIRT1 m RNA表达。结果:与高脂对照组比,SIRT1激动剂组SIRT1 m RNA表达明显升高(P<0.05),动脉粥样硬化斑块面积明显减少(P<0.05),斑块中脂质和巨噬细胞含量明显减少(P<0.05),斑块中胶原纤维和平滑肌细胞含量明显增加(P<0.05),斑块易损指数也明显减少(P<0.05);SIRT1激动剂+抑制剂组各指标差异均无统计学意义。结论:上调SIRT1能使Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化斑块缩小,并能增强动脉粥样硬化斑块的稳定性。

ST段抬高心肌梗死患者血清可溶性信号素4D、沉默信息调节因子2相关酶1表达水平与预后的关系

目的 分析ST段抬高心肌梗死(ST-elevation myocardial infarction,STEMI)患者血清可溶性信号素4D(soluble semaphorins 4D,sSema4D)、沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)表达水平与预后的关系。方法 选取2018年1月至2021年2月河南省开封市中心医院78例STEMI患者为研究对象,另纳入30例同期健康体检者为健康对照组;所有STEMI患者均在入院后即刻采集外周静脉血,行急诊经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention,PCI)治疗,根据PCI术后6个月主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events,MACE)发生情况分为预后不良组及预后良好组,比较各组基线资料及血清sSema4D、SIRT1水平差异,分析血清sSema4D、SIRT1水平与基线资料的联系;并使用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估入院即刻血清sSema4D、SIRT1及联合检测对STEMI患者PCI术后不良预后的预测价值。结果 Pearson相关性分析,发现STEMI患者血清sSema4D与左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)呈显著负相关(P<0.05),与血清氨基末端B型钠尿肽原(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)、肌钙蛋白I(cardiac troponinⅠ,cTnI)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)呈显著正相关(P<0.05);血清SIRT1水平则与LVEF呈显著正相关(P<0.05),与血清NT-proBNP、cTnI、CK-MB呈显著负相关(P<0.05)。经ROC曲线分析,发现入院即刻血清sSema4D、SIRT1均对STEMI患者PCI术后不良预后具有较高预测价值(P<0.05),其cut-off值分别为8.255μg/L、995.215 pg/ml,且两者联合检测预测价值最高。结论 入院即刻血清sSema4D、SIRT1联合检测能有效预测STEMI患者PCI术后不良预后,临床可结合血清学指标尽早判断患者预后,以改善STEMI诊疗现状。

Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1-核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件抗氧化应激通路在多发性硬化中作用的研究进展

多发性硬化(MS)是一种慢性炎症性疾病,主要是由T淋巴细胞引起,可使中枢神经系统产生氧化应激反应,导致脱髓鞘等病理改变。Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)抗氧化应激通路是体内最重要的内源性抗氧化应激通路,激活该通路可启动下游解毒酶、抗氧化蛋白,参与清除氧自由基,维持细胞内氧化还原系统平衡,从而对神经退行性疾病起保护作用。通过药物或各种康复治疗手段激活该Keap1-Nrf2/ARE通路,减轻MS疾病进展的作用及未来MS治疗靶点是目前研究热点。

沉默信息调节因子2相关酶1分子调控机制及其在炎性疾病中的作用

沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖性脱乙酰酶Sirtuin家族成员,SIRT1与神经退行性疾病、心脑血管疾病、脂肪肝和肿瘤性疾病等炎性疾病密切相关。本文主要综述了SIRT1的分子调控机制及其在炎性疾病中的作用,具体介绍了SIRT1及其相关下游转录因子肿瘤蛋白53(p53)、核因子-κB(NF-κB)、单磷酸腺苷依赖的蛋白激酶(AMPK)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)等分子的调控机制以及SIRT1在相关疾病中的作用,以期为多种炎性疾病的治疗提供技术支撑。

香豆素通过调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路减轻脑缺血-再灌注大鼠神经损伤

目的 探讨香豆素通过调节Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白(Keap)1/核因子E2相关因子(Nrf)2/抗氧化反应元件(ARE)信号通路减轻脑缺血-再灌注大鼠神经损伤。方法 大鼠随机分为假手术(Sham)组、脑缺血-再灌注损伤模型(CIRI)组,低(2.5 mg/kg)、中(5 mg/kg)、高剂量(10 mg/kg)香豆素组,Keap1/Nrf2/ARE信号通路抑制剂组(ML385)组及ML385+高剂量香豆素组,脑缺血2 h、再灌注24 h后采用Longa5分制法评估大鼠神经行为评分;2,3,5氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测量大鼠脑梗死体积;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脑皮质组织病理学变化;Western印迹检测大鼠脑皮质组织中Keap1/Nrf2/ARE信号通路相关因子[Keap1、Nrf2、血红素氧合酶(HO)-1、醌氧化还原酶(NQO)1]蛋白水平。结果 与Sham组比较,CIRI组神经行为评分、脑梗死体积,脑皮质组织中胞核Nrf2/Nrf2及HO-1、NQO1蛋白增加,Keap1蛋白减少,差异有统计学意义(P<0.05),且神经细胞可见明显病理学改变。与CIRI组比较,低、中、高剂量香豆素组神经行为评分、脑梗死体积及脑皮质组织中Keap1蛋白减少,脑皮质组织中胞核Nrf2/Nrf2及HO-1、NQO1蛋白增加,呈剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05),且神经细胞损伤程度显著减轻;ML385组神经行为评分、脑梗死体积增加,脑皮质组织中胞核Nrf2/Nrf2及HO-1、NQO1蛋白减少,差异有统计学意义(P<0.05),且神经细胞损伤程度加重。与高剂量香豆素组比较,ML385+高剂量香豆素组神经行为评分、脑梗死体积增加,脑皮质组织中胞核Nrf2/Nrf2及HO-1、NQO1蛋白减少,差异有统计学意义(P<0.05),且神经细胞损伤程度有所加重。结论 香豆素可减轻脑缺血-再灌注大鼠神经损伤,可能通过激活Keap1/Nrf2/ARE信号通路而实现。

人参皂苷Rg1调节Nrf2/ARE信号通路对大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症的影响

目的探讨人参皂苷Rg1(GRg1)调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应原件(ARE)信号通路对大鼠妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的作用。方法将雌性孕SD大鼠随机分为正常组(Normal组)、ICP模型组(Model组)、低剂量GRg1组(GRg1⁃L组,20 mg/kg GRg1)、高剂量GRg1组(GRg1⁃H组,40 mg/kg GRg1)、高剂量GRg1+Nrf2抑制剂全反式维甲酸(ATRA)组(GRg1⁃H+ATRA组,40 mg/kg GRg1+10 mg/kg ATRA),每组12只。采用苯甲酸雌二醇、黄体酮联合注射的方式建立大鼠ICP模型。给药结束后ELISA法检测大鼠血清总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和总胆汁酸(TBA)、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、γ⁃干扰素(IFN⁃γ)和白细胞介素⁃1β(IL⁃1β)及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。HE染色观察大鼠肝切片的病理学变化。免疫印迹法检测大鼠肝组织Nrf2/ARE信号通路相关蛋白的表达。结果与Normal组相比,Model组大鼠血清ALT、AST、TBIL、ALP、TBA水平均显著升高(P<0.05),Normal组炎症因子TNF⁃α、IFN⁃γ、IL⁃1β和肝组织MDA水平[分别为(248.26±27.64)pg/mL、(153.68±18.47)pg/mL、(189.53±23.21)pg/mL和(2.89±0.36)nmol/mg]均较Model组大鼠[分别为(53.47±8.69)pg/mL]、(24.72±2.94)pg/mL、(46.89±6.82)pg/mL和(1.05±0.14)nmol/mg]显著升高(P<0.05),Normal组肝组织SOD水平和Nrf2、ARE蛋白表达水平[分别为(53.18±8.77)U/mg、0.34±0.03、0.40±0.04]均较Model组大鼠[分别为(128.95±16.34)U/mg、0.87±0.09、0.94±0.09]显著降低(P<0.05);与Model组相比,GRg1⁃L组、GRg1⁃H组大鼠相关指标变化与上述相反(P<0.05)。Nrf2抑制剂减轻了GRg1对ICP大鼠的治疗作用。结论GRg1可能通过激活Nrf2/ARE信号通路对大鼠ICP具有一定的治疗作用。

金合欢素调节Sirt1/AMPK/Nrf2信号通路对糖尿病白内障大鼠氧化应激损伤的影响

目的探讨金合欢素对糖尿病白内障(DC)大鼠氧化应激损伤的影响及其对沉默调节蛋白1(Sirt1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的调控作用。方法60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、金合欢素低剂量组、金合欢素高剂量组、金合欢素+Sirt1抑制剂(EX527)组,除对照组以外均构建DC大鼠模型,其中,金合欢素低剂量组、金合欢素高剂量组大鼠分别经颈部皮下注射10 mg·kg^(-1)、20 mg·kg^(-1)的金合欢素,金合欢素+EX527组大鼠经颈部皮下注射20 mg·kg^(-1)金合欢素,均为每天2次,同时金合欢素+EX527组大鼠经皮下埋入渗透微型泵每天泵入3.5 mg·kg^(-1)EX527,其余组别均泵入等量生理盐水,给药持续4周。给药结束后,测量血压和空腹血糖(FBG),裂隙灯照射法观察大鼠晶状体混浊状况,HE染色观察晶状体组织病理学变化,ELISA测定血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β的含量,Western blot检测Sirt1、p-AMPK、AMPK、Nrf2蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠晶状体上皮细胞呈片状、条索状,发生迁移性聚集,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均降低(均为P<0.05);与模型组比较,金合欢素低、高剂量组大鼠晶状体上皮细胞迁移性聚集现象改善,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均降低,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均升高(均为P<0.05);与金合欢素高剂量组比较,金合欢素+EX527组晶状体上皮细胞形态改变和聚集现象加重,收缩压、FBG、晶状体混浊评分、MDA、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH-Px含量及Sirt1、p-AMPK/AMPK、Nrf2蛋白表达水平均降低(均为P<0.05)。结论金合欢素可能通过激活Sirt1/AMPK/Nrf2通路保护DC大鼠免受氧化应激损伤。

双路通脑方调节SIRT1/Nrf2/GPx4信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡的影响

目的探讨双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡的作用以及对沉默信息调节因子2同源物1(SIRT1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)信号通路的调节机制。方法采用随机数字表法选取20只大鼠作为假手术组,剩余70只大鼠均利用大脑中动脉闭塞法制备缺血性脑卒中大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型对照组、双路通脑方组、双路通脑方+SIRT1抑制剂组(双路通脑方+EX527组),每组20只。14 d后,对大鼠进行神经功能损伤评分;TTC染色检测大鼠脑梗死面积;HE染色检测大鼠脑组织病理变化;尼氏染色检测大鼠脑组织神经元数量;试剂盒检测大鼠脑组织中铁离子(Fe^(2+))、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的水平;免疫组化检测大鼠脑组织中酰基-辅酶a合成酶长链家族成员4(ACSL4)、转铁蛋白受体(TFR)、铁蛋白重链多肽1(FTH1)蛋白的阳性表达;Western blotting法检测大鼠脑组织中SIRT1、Nrf2、GPx4及胱氨酸/谷氨酸转运蛋白(SLC7A11)蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型对照组大鼠的神经功能缺损评分、脑梗死面积、Fe^(2+)和MDA含量、ACSL4、TFR蛋白表达升高(P<0.05),神经元数量、SOD和GSH含量、FTH1、SIRT1、Nrf2、GPx4及SLC7A11蛋白表达均降低(P<0.05);与模型对照组比较,双路通脑方组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积、Fe^(2+)和MDA含量、ACSL4、TFR蛋白表达降低(P<0.05),神经元数量、SOD和GSH含量、FTH1、SIRT1、Nrf2、GPx4及SLC7A11蛋白表达均升高(P<0.05);采用SIRT1抑制剂进行回补实验,结果显示SIRT1抑制剂逆转了双路通脑方对神经元铁死亡的抑制作用,同时也抑制了Nrf2和GPx4的表达(P<0.05)。结论双路通脑方可能通过激活SIRT1/Nrf2/GPx4信号通路来抑制缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡。

基于Keap1-Nrf2信号通路研究补青颗粒对2型糖尿病大鼠肝损伤的保护作用及机制

目的基于Keap1-Nrf2信号通路探讨补青颗粒对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠肝损伤的保护作用及其机制。方法采用高脂高糖饲料联合小剂量链脲佐菌素制备T2DM模型后持续高脂高糖饲料喂养建立T2DM合并肝损伤大鼠模型。实验设置空白组、模型组、补青颗粒高剂量组、补青颗粒中剂量组,给药8周后取材检测各组大鼠血糖、肝功能、氧化应激相关指标;HE染色观察肝组织病理形态;Western blot、RT-qPCR法检测大鼠肝脏中Keap1-Nrf2通路相关蛋白表达水平及mRNA表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠体质量下降、血糖升高、肝功能受损伤(P均<0.05);补青颗粒组体质量、血糖及肝功能均较模型组改善(P均<0.05);补青颗粒组氧化应激相关指标均较模型组改善(P均<0.05);补青颗粒各剂量组Keap1、Cytoplasm Nrf2蛋白表达较模型组均减少,Nuclear Nrf2、NQO1、HO-1较模型组均升高(P均<0.05)。补青颗粒各组Keap1、Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA表达与模型组比较均上调(P均<0.05)。结论补青颗粒可减轻T2DM大鼠肝损伤,改善大鼠一般状况及肝组织病理学改变,其机制可能与调控Keap1-Nrf2信号通路从而对抗氧化损伤有关。

常压高浓度氧对新生大鼠脑微血管内皮细胞损伤与Nrf2/HO-1信号通路的影响分析

目的探究常压高浓度氧(NBO)对新生大鼠脑微血管内皮细胞损伤及核因子E2相关因子2/血红素氧合酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路的影响。方法取新生SD大鼠45只,采用随机数字表法分为常氧组、NBO组和NBO+Nrf2激活剂组,每组各15只。常氧组大鼠置于普通空气(21%氧气)中饲养,NBO组和NBO+Nrf2激活剂组大鼠置于90%常压氧气饲养,NBO+Nrf2激活剂组每日灌胃5 mg/kg Nrf2激动剂莱菔硫烷。测定脑组织伊文思蓝(EB)含量,采用酶联免疫法检测血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)含量,干湿重法检测脑组织含水量,HE染色和TUNEL染色观察脑组织病理变化,蛋白质印迹法检测海马组织Nrf2/HO-1信号通路蛋白表达,水迷宫检测大鼠认知功能。结果与常氧组比较,NBO组脑组织EB、VEGF、MMP-9含量及脑组织含水量升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与NBO组比较,NBO+Nrf2激活剂组脑组织EB、VEGF、MMP-9含量及脑组织含水量降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。病理染色结果显示,常氧组大鼠神经细胞形态及结构完整,未见明显病理变化和细胞凋亡;NBO组神经细胞形态及结构不规则,出现明显的水肿和空泡,并伴有大量的凋亡细胞;NBO+Nrf2激活剂组脑组织病理损伤较NBO组明显减轻。与常氧组比较,NBO组脑组织Nrf2、HO-1蛋白相对表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与NBO组比较,NBO+Nrf2激活剂组Nrf2、HO-1蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与常氧组比较,NBO组第2~4天逃避潜伏期延长,穿越平台次数减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与NBO组比较,NBO+Nrf2激活剂组第2~4天逃避潜伏期缩短,穿越平台次数增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NBO可诱导新生大鼠脑微血管内皮细胞损伤,导致远期认知功能障碍,可能与下调Nrf2/HO-1信号通路表达有关。

芍药苷调节SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路对过氧化氢诱导皮肤成纤维细胞氧化应激损伤的影响

目的:探讨芍药苷(PF)调节沉默信息调节因子2同系物1(SIRT1)/氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活剂-1α(PGC-1α)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导皮肤成纤维细胞(HSF)氧化应激损伤的影响。方法:以HSF细胞为研究对象,将其分为Control组、H_(2)O_(2)组、L-PF、M-PF、H-PF组、PF+EX527组;CCK-8检测HSF细胞增殖;β-半乳糖苷酶染色法检测HSF细胞衰老;流式细胞仪检测HSF细胞凋亡;ELISA法检测HSF细胞中ROS、SOD、GSH、MDA的表达;WB检测HSF细胞中SIRT1、PGC-1α、Nrf2蛋白表达。结果:H_(2)O_(2)组HSF细胞的存活率、SOD、GSH、SIRT1、PGC-1α、Nrf2表达低于Control组,衰老细胞比例、凋亡率、ROS、MDA表达高于Control组(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,L-PF组、M-PF组、H-PF组存活率、SOD、GSH、SIRT1、PGC-1α、Nrf2表达升高,衰老细胞比例、凋亡率、ROS、MDA表达降低(P<0.05);PF+EX527组存活率、SOD、GSH、SIRT1、PGC-1α、Nrf2表达低于H-PF组,衰老细胞比例、凋亡率、ROS、MDA表达高于H-PF组(P<0.05)。结论:PF可以抑制H_(2)O_(2)诱导的HSF细胞氧化应激损伤,其机制可能是激活SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路实现的。