沉默信息调节因子1/叉头框蛋白O1信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞的影响实验研究

目的:探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框蛋白O1(FOXO1)信号通路调控铁死亡对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞的影响。方法:将30只雌性SD大鼠分为对照组(皮下注射豆油)和PCOS组(皮下注射脱氢表雄酮)。将对照组和PCOS组大鼠分离得到的卵巢颗粒细胞分为对照组、PCOS组,取一半PCOS组卵巢颗粒细胞为过表达SIRT1组(20μmol/L SIRT1激活剂SRT 2183干预)。RT-qPCR及Western blot检测细胞中SIRT1、FOXO1、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA及蛋白表达。Hoechst染色检测细胞活性氧(ROS)及线粒体活性氧(mtROS)水平。ELISA检测细胞中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe^(2+)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,PCOS组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平降低,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe^(2+)、T、LH水平升高,卵巢颗粒细胞凋亡率增加(均P<0.05)。与PCOS组比较,过表达SIRT1组卵巢颗粒细胞中SIRT1、FOXO1、SLC7A11、GPX4、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和GSH、FSH水平升高,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达和MDA、ROS、mtROS、Fe^(2+)、T、LH水平降低,卵巢颗粒细胞凋亡率减少(均P<0.05)。结论:SIRT1/FOXO1通路在PCOS卵巢颗粒细胞中下调,激活该通路可能通过下调铁死亡抑制PCOS卵巢颗粒细胞凋亡。

2型糖尿病病人血清沉默信息调节因子2相关酶1和叉头样转录因子O4表达与糖尿病视网膜病变的关系

目的探究2型糖尿病(T2DM)病人血清沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)和叉头样转录因子O4(FOXO4)表达与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法采用随机数字表法将2021年8月至2022年8月在七台河市人民医院收治的142例T2DM病人纳入研究,按照国际临床DR严重程度量表分为无DR组62例、非增殖性(NPDR)组50例和增殖性(PDR)组30例。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清SIRT1和FOXO4的表达水平;Pearson法分析血清中SIRT1和FOXO4表达水平的相关性;logistic回归分析影响T2DM病人DR发生的因素。ROC曲线分析血清中SIRT1和FOXO4对T2DM病人DR发生的诊断价值。结果PDR组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)[(1.22±0.15)mmol/L比(1.98±0.17)mmol/L、(1.64±0.18)mmol/L]、SIRT1水平[(3.82±0.50)μg/L比(5.36±0.56)μg/L、(4.65±0.52)μg/L]显著低于无DR组及NPDR组,NPDR组显著低于无DR组;PDR组收缩压(SBP)、三酰甘油(TG)、FOXO4[(14.63±1.48)μg/L比(12.62±1.45)μg/L、(13.74±1.46)μg/L]水平显著高于无DR组及NPDR组,NPDR组显著高于无DR组(P<0.05)。相关性分析显示,血清SIRT1和FOXO4表达水平呈负相关关系(r=−0.47,P<0.001)。logistic回归分析显示,HDL-C、SIRT1和FOXO4表达水平是影响T2DM病人DR发生的因素(P<0.05)。二者联合诊断DR发生的ROC曲线下面积(AUC)高于SIRT1和FOXO4单独诊断的AUC值(Z=32.22,P<0.001;Z=19.03,P<0.001)。结论T2DM病人血清中SIRT1表达水平显著降低,FOXO4表达水平显著升高,二者是影响T2DM病人DR发生的因素。

沉默信息调节因子1/叉头转录因子1通路上调微小RNA-203对慢性心力衰竭大鼠的干预实验研究

目的:探究沉默信息调节因子1/叉头转录因子1(Sirt1/Foxo1)通路上调微小RNA-203(miR-203)对慢性心力衰竭大鼠的干预效果。方法:选取45只SD健康大鼠,随机选中10只作为对照组,其余采用左冠状动脉结扎术建立慢性心力衰竭模型,共有30只大鼠建模成功,分为模型组、下调组、上调组,每组各10只,对照组只做穿线不结扎。对照组和模型组每天给予等量0.9%氯化钠溶液,下调组大鼠注射miR-203 inhibitor慢病毒注射,上调组大鼠注射miR-203 mimics慢病毒,观察大鼠的情况变化。结果:与对照组比较,模型组、下调组、上调组miR-203表达量均降低(均P<0.05);与模型组比较,下调组miR-203表达量降低,上调miR-203表达量升高(均P<0.05);与下调组比较,上调组miR-203表达量升高(P<0.05),说明转染成功。与对照组比较,经干预2、4周后模型组、下调组、上调组大鼠的心室射血分数(LVEF)、左心室短轴收缩率(LVFS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-P X)、超氧化物歧化酶(SOD)水平均降低,左心室舒张末期内径(LVIDD)、左心室收缩末期内径(LVIDS)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、过氧化氢(H_(2)O_(2))、丙二醛(MDA)水平均升高(均P<0.05);与模型组比较,经干预2、4周后下调组大鼠的LVEF、LVFS、GSH-P X、SOD水平均降低,LVIDD、LVIDS、AngⅡ、ALD、TNF-α、IL-6、IL-1β、H_(2)O_(2)、MDA水平均升高,上调组大鼠的LVEF、LVFS、GSH-PX、SOD水平均升高,LVIDD、LVIDS、AngⅡ、ALD、TNF-α、IL-6、IL-1β、H_(2)O_(2)、MDA水平均降低(均P<0.05);与下调组比较,经干预2、4周后上调组大鼠的LVEF、LVFS、GSH-P X、SOD水平均升高,LVIDD、LVIDS、AngⅡ、ALD、TNF-α、IL-6、IL-1β、H_(2)O_(2)、MDA水平均降低(均P<0.05)。与对照组比较,模型组、下调组、上调组沉默信息调节因子1(Sirt1)表达量降低,叉头转录因子1(Foxo1)表达量均升高(均P<0.05);与模型组比较,下调组Sirt1表达量降低,Foxo1表达量均升高,上调组Sirt1表达量升高,Foxo1表达量均降低(均P<0.05);与下调组比较,上调组Sirt1表达量升高,Foxo1表达量均降低(均P<0.05)。结论:上调miR-203可降低氧化应激,减轻机体炎症反应,改善心脏功能,作用机制可能与Sirt1/Foxo1信号通路有关。

白花丹素介导sirt1-FOXO1通路对糖尿病肾病大鼠氧化应激损伤的影响

目的探究白花丹素通过沉默信息调节因子2相关酶(sirt)1-叉头框蛋白(FOX)O1通路对糖尿病肾病(DN)大鼠氧化应激损伤的影响。方法120只SD大鼠随机分为对照组、DN组、白花丹素低剂量组、白花丹素高剂量组、EX-527组(sirt1抑制剂,5 mg/kg)、白花丹素高剂量+EX-527组,每组20只。检测大鼠24 h尿蛋白、空腹血糖(FBG)、血肌酐(SCr)、血β2微球蛋白(β2-MG)及肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;测定大鼠左肾指数;过碘酸雪夫(PAS)染色观测肾脏病理变化;TUNEL法检测肾组织细胞凋亡;Western印迹法检测sirt1-FOXO1通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,DN组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著升高,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白均显著降低(P<0.05)。与DN组相比,白花丹素低、高剂量组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著降低,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白显著升高(P<0.05);EX-527组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著升高,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白均显著降低(P<0.05);EX-527可部分削弱白花丹素高剂量对DN大鼠氧化应激损伤的缓解作用。结论白花丹素可能通过激活sirt1-FOXO1通路,缓解DN大鼠氧化应激损伤。

Slit引导配体2通过调控AMPK/SIRT1-FoxO1信号通路影响糖尿病小鼠视网膜血管损伤的机制研究

目的 探讨Slit引导配体2(SLIT2)是否通过调控腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/转录沉默信息调节因子1(SIRT1)-叉头盒蛋白O1(FoxO1)信号通路通过对糖尿病小鼠视网膜血管损伤的影响。方法 30只db/db小鼠随机分为DR组(db/db小鼠)、DR+阴性对照载体组(DR+sh-NC组)和DR+sh-SLIT2组,每组10只。另选10只db/m小鼠为对照组。DR+sh-NC组和DR+sh-SLIT2组麻醉后分别在双眼玻璃体腔内注射sh-SLIT2的腺相关病毒(AAV)载体。眼底荧光血管造影(FFA)和苏木精伊红染色观察视网膜血管病变;酶联免疫吸附测定检测血清白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)的水平,荧光定量PCR检测SLIT2 mRNA表达;Western blot检测视网膜组织SLIT2、AMPK、SIRT1、FoxO1蛋白水平。结果 与对照组相比,DR组、DR+sh-NC组、DR+sh-SLIT2组血糖、每日饮水量、每日排尿量、食物摄入量及体质量均明显升高(P<0.05);与对照组相比,DR组视网膜存在血管病变及病理损伤,SLIT2 mRNA及蛋白表达、IL-6、TNF-α和VEGF水平,FoxO1蛋白水平均明显升高(P<0.05),AMPK、SIRT1蛋白水平均明显降低(P<0.05);与DR+sh-NC组相比,DR+sh-SLIT2组的视网膜血管病变及病理损伤明显减轻,SLIT2 mRNA及蛋白表达、IL-6、TNF-α和VEGF水平,FoxO1蛋白水平均明显降低(P<0.05),AMPK、SIRT1蛋白水平均明显升高(P<0.05)。结论 沉默SLIT2表达显著改善糖尿病小鼠视网膜血管损伤及炎症水平,这可能是通过调控AMPK/SIRT1-FoxO1信号通路发挥作用的。

基于SIRT1/FOXO3a信号通路探讨“温阳通脉”灸法对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠炎症反应的影响

【目的】探讨“温阳通脉”灸法防治动脉粥样硬化(AS)的作用机制。【方法】将10只饲喂普通饲料的C57BL/6J小鼠设为空白组;将30只ApoE^(-/-)小鼠给予高脂饲料喂养建立动脉粥样硬化模型,随机分为模型组、辛伐他汀组和艾灸组,每组10只。于造模第1天开始干预,艾灸组小鼠给予膻中、神阙、内关、血海穴艾灸,辛伐他汀组给予辛伐他汀蒸馏水混悬液灌胃,共干预12周。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠胸主动脉病理形态结构,透射电镜观察小鼠胸主动脉内皮细胞超微结构,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)水平,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测胸主动脉沉默信息调节因子1(SIRT1)和叉头框转录因子O3a(FOXO3a)的mRNA表达水平,Western Blot法检测胸主动脉SIRT1和FOXO3a蛋白表达水平。【结果】与空白组比较,模型组小鼠胸主动脉及血管内皮细胞病理变化明显,血清炎症因子TNF-α、ICAM-1和VCAM-1水平升高(P<0.05或P<0.01),胸主动脉SIRT1 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.01),FOXO3a mRNA和蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,辛伐他汀组和艾灸组小鼠的胸主动脉及血管内皮细胞结构得到明显改善,血清TNF-α、ICAM-1、VCAM-1水平均降低(P<0.05),胸主动脉SIRT1 mRNA和蛋白表达量增加(P<0.05或P<0.01),FOXO3a mRNA和蛋白表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。辛伐他汀组和艾灸组上述指标组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】“温阳通脉”灸法可通过调控SIRT1/FOXO3a信号通路减轻炎症反应防治小鼠AS。

花黄色素调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对冠心病大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨花黄色素(SY)调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子-κB(NF-κB)对冠心病(CHD)大鼠心肌损伤的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,生理盐水)、模型组(Model组,生理盐水)、SY组(100 mg/kg SY)、EX-527组(47 mg/kg EX-527)、SY+EX-527组(100 mg/kg SY+47 mg/kg EX-527),每组12只,持续4周给予相应药物。试剂盒检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和心肌白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色法进行心肌组织病理学观察;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心肌组织AMPK/SIRT1/NF-κB通路相关蛋白表达。结果:与NC组相比,Model组大鼠心肌细胞数量少且排列杂乱,细胞核皱缩,TC、TG、LDL-C、氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及磷酸化-AMPK(p-AMPK)/AMPK、SIRT1蛋白水平明显下降(P<0.05)。与Model组比较,SY组大鼠心肌细胞数量增多且排列整齐有序,TC、TG、LDL-C、ox-LDL、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显下降(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1蛋白水平明显上升(P<0.05);而EX-527组以上指标呈现相反趋势。与SY组相比,SY+EX-527组大鼠心肌损伤加重,TC、TG、LDL-C、ox-LDL、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1蛋白水平明显下降(P<0.05)。结论:SY可能通过调控AMPK/SIRT1/NF-κB通路降低氧化应激,减轻炎症反应,对冠心病大鼠心肌损伤起到一定改善作用。

基于AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路研究补阳还五汤促进骨质疏松性骨折大鼠愈合的机制

目的基于AMP活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子(sirt)1/核转录因子(NF)-κB受体活化蛋白配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路,探究补阳还五汤促进骨质疏松性骨折大鼠骨折愈合的机制。方法将大鼠随机分成假手术组、模型组、补阳还五汤低剂量组(6.25 g/kg)、补阳还五汤中剂量组(12.50 g/kg)和补阳还五汤高剂量组(25.00 g/kg)。除假手术组外,其余组均构建骨质疏松性骨折模型,并给予相应剂量药物干预。检测大鼠骨密度(BMD)值、骨折愈合评分及骨痂体积;自动生化分析仪测定血清碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素、钙和磷水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测股骨组织中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠骨痂组织的病理形态;Western印迹检测股骨组织中AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组骨痂骨小梁分布稀疏,成骨细胞大量减少且有纤维组织生成,骨痂体积、血清中ALP、骨钙素、钙和磷水平及股骨组织中MDA水平、RANKL蛋白水平显著升高(P<0.05),BMD值、骨折愈合评分、骨组织中SOD和GSH-Px水平和AMPK、sirt1、OPG蛋白水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,补阳还五汤低、中、高剂量组骨痂骨小梁分布较为密集,成骨细胞增加,骨痂体积、血清中ALP、骨钙素、钙和磷水平及股骨组织中MDA水平、RANKL蛋白水平显著降低(P<0.05),BMD值、骨折愈合评分、骨组织中SOD和GSH-Px水平和AMPK、sirt1、OPG蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论补阳还五汤可能通过抑制氧化应激反应,调节AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路,发挥对骨质疏松骨折大鼠的治疗作用。

鹿茸多肽对骨质疏松模型大鼠的改善作用及对SIRT1/FOXO1信号通路的影响

目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对骨质疏松(OP)模型大鼠的保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法:60只12周龄SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组(1 mg·kg^(-1)·d^(-1)阿仑膦酸钠灌胃)、低剂量(100 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组、中剂量(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组和高剂量(300 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠肌肉注射地塞米松(2 mg·kg^(-1))复制OP大鼠模型,对照组大鼠肌肉注射等体积生理盐水,每周2次,连续11周。双能X射线骨密度仪检测各组大鼠股骨骨密度(BMD),酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清中血钙(Ca^(2+))、血磷(P)、骨保护素(OPG)、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)水平,生化法检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性,HE染色观察各组大鼠骨组织病理形态表现,Western blotting法检测各组大鼠骨组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)、过氧化氢酶(CAT)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和叉头框蛋白O1(FOXO1)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠股骨BMD明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠股骨BMD明显升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,模型组大鼠血清中Ca^(2+)、P和OPG水平及SOD活性明显降低(P<0.05),ALP、OCN和MDA水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,低剂量VAP大鼠血清中OPG水平明显升高(P<0.05),阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠血清中Ca^(2+)、P和OPG水平及SOD活性明显升高(P<0.05或P<0.01),阳性药组和各剂量VAP组大鼠血清中ALP、OCN和MDA水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。HE染色,与对照组比较,模型组大鼠骨组织中骨细胞数量减少且排列混乱,骨小梁纤细,出现大片断裂,髓腔扩大;与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中骨小梁粗壮,排列紧密。Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠骨组织中SIRT1、CAT、RUNX2和FOXO1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中SIRT1、CAT、RUNX2和FOXO1蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:VAP对OP模型大鼠具有保护作用,其作用机制可能与介导SIRT1/FOXO1信号通路抗氧化应激作用有关。

补阳还五汤对动脉粥样硬化模型小鼠SIRT1/HMGB1/NF-κB通路及炎症反应的影响

目的:观察补阳还五汤对动脉粥样硬化模型载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)/高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路及炎症反应的影响。方法:小鼠适应性饲养2周后,ApoE^(-/-)小鼠给予高脂饲料喂养进行动脉粥样硬化模型制备。8周后分离小鼠主动脉根部,制备石蜡切片,油红O染色证实模型复制成功。将40只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、补阳还五汤低剂量组、补阳还五汤中剂量组、补阳还五汤高剂量组,每组10只;另将10只C57BL/6J小鼠继续普通饲料喂养设置为空白组,各组小鼠均干预4周。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清炎性因子[γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-12、IL-1β]表达水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测小鼠主动脉SIRT1、HMGB1、NF-κB蛋白表达。结果:补阳还五汤可升高小鼠主动脉斑块中SIRT1蛋白表达,降低HMGB1、NF-κB蛋白表达及小鼠血清IFN-γ、TNF-α、IL-12、IL-1β表达。结论:补阳还五汤可能通过调控SIRT1/HMGB1/NF-κB信号通路,减低炎症反应,发挥抗动脉粥样硬化的作用。

番茄红素调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对过敏性结膜炎小鼠的治疗作用

目的基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨番茄红素(LYC)减轻过敏性结膜炎小鼠炎症的作用机制。方法利用卵清蛋白(OVA)致敏建立AC小鼠模型。将BALB/c小鼠分为正常组(NC组)、模型组(AC组)、LYC低组(5 mg/kg)、LYC中组(10 mg/kg)、LYC高组(20 mg/kg),LYC高+AMPK抑制剂(CC)组(0.2 mg/kg)。观察小鼠眼周情况,采用苏木精-伊红染色观察结膜组织病理学变化,采用流式细胞仪检测脾脏中Th17、Treg细胞比例,采用酶联免疫吸附试验试剂盒检测血清中炎症因子、免疫球蛋白(Ig)E、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)水平,采用蛋白质印迹法检测结膜组织AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路蛋白水平。结果与NC组比较,AC组小鼠眼部出现结膜充血、红肿、溢泪等现象,结膜组织嗜酸性粒细胞较多,Th17细胞比例、白细胞介素(IL)-17、IL-6、IgE、TSLP、磷酸化AMPK(p-AMPK)、核NF-κB p65水平升高,Treg细胞比例、IL-10、转化生长因子(TGF)-β、SIRT1水平降低(P<0.05)。与AC组比较,LYC中、高组小鼠眼部结膜充血、水肿、溢泪等明显减轻,结膜组织嗜酸性粒细胞较少,脾脏中Th17/Treg细胞比例趋向平衡,IL-17、IL-6、IgE、TSLP、核NF-κB p65水平降低,IL-10、TGF-β、p-AMPK、SIRT1水平升高(P<0.05)。CC可抵消LYC对AC小鼠的上述保护作用。结论LYC可减轻AC小鼠的过敏和炎症反应,维护机体免疫平衡,其机制可能与促进AMPK/SIRT1通路活化,抑制NF-κB通路活化有关。

足细胞SIRT1/FoxO3自噬通路与糖尿病肾脏疾病关系的研究进展

糖尿病肾脏疾病(DKD)是糖尿病微血管并发症之一,也是目前全球范围内导致终末期肾病的首要原因,足细胞在DKD发病机制中发挥重要作用,而自噬对维持足细胞生存及内环境稳定具有重要意义。因此,自噬及相关通路是DKD的潜在治疗干预靶点。沉默信息调节因子1通过介导叉头框转录因子O3的去乙酰化,激活足细胞自噬相关通路,调节自噬相关基因和氧化应激反应,维持足细胞结构和功能,从而延缓DKD的进展。未来对足细胞自噬相关通路与DKD发病机制的关系进行深入探索,将为DKD的临床诊断和靶向治疗提供新思路。

虎杖苷促进大鼠骨质疏松性骨折的作用及对SIRT1/FoxO1信号通路的影响

目的探究虎杖苷对骨质疏松性骨折大鼠骨折愈合的效果及对沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头状转录因子O1(FoxO1)信号通路的影响。方法构建骨质疏松性骨折大鼠模型,将建模成功的48只大鼠随机分为模型组、虎杖苷低剂量(30 mg/kg)组、虎杖苷高剂量(60 mg/kg)组、阿仑膦酸钠组(0.5 mg/kg)。另取12只大鼠作为对照组,构建相同部位骨折模型。建模结束后,各组大鼠给予相应药物灌胃,每天1次,连续8周。对大鼠进行骨折愈合程度评分并检测骨折处骨密度(bone mineral density,BMD);运用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中I型胶原交联羧基末端肽(CTX-Ⅰ)、骨钙素(OC)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;通过苏木素-伊红染色观察大鼠骨组织病理学;通过荧光定量PCR法检测大鼠骨组织中SIRT1、FoxO1信使RNA(mRNA)水平;通过蛋白印迹法检测大鼠骨组织中SIRT1、FoxO1蛋白水平。结果与模型组相比,虎杖苷低、高剂量组大鼠骨组织病理学变化程度依次减轻,骨折愈合程度评分、骨折处BMD、血清中OC、骨组织中SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白水平依次升高,CTX-Ⅰ、TNF-α、IL-1β水平依次降低(P<0.05);阿仑膦酸钠组和虎杖苷高剂量组大鼠骨组织病理学变化及各项指标比较均无显著差异(P>0.05)。结论虎杖苷可减轻骨质疏松性骨折大鼠炎症反应,提升BMD,促进骨折愈合,其机制可能与激活SIRT1/FoxO1信号通路有关。

蓝萼甲素对急性髓系白血病U937细胞增殖、凋亡、自噬及SIRT1/FoxO1信号通路的影响

目的:探究蓝萼甲素对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡、自噬及沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框转录因子O1(FoxO1)信号通路的影响。方法:体外培养AML U937细胞,取培养至对数生长期的U937细胞分为对照组(常规培养U937细胞)、三氧化二砷组(在含U937细胞的培养基中加入2μmol/L的三氧化二砷)、蓝萼甲素低(在含U937细胞的培养基中加入2μmol/L蓝萼甲素)、高(在含U937细胞的培养基中加入4μmol/L蓝萼甲素)浓度组,继续培养48 h后。四甲基偶氮唑蓝法检测U937细胞增殖率,流式细胞术检测U937细胞凋亡率,单丹磺酰尸胺荧光染色观察U937细胞自噬小体数量,荧光定量PCR法检测U937细胞SIRT1、FoxO1 mRNA表达水平,蛋白印迹法检测U937细胞SIRT1、FoxO1蛋白表达水平。结果:与对照组相比,三氧化二砷组、蓝萼甲素低、高浓度组U937细胞增殖率显著降低(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05);与三氧化二砷组相比,蓝萼甲素低、高浓度组U937细胞增殖率显著升高(均P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);与蓝萼甲素低浓度组相比,蓝萼甲素高浓度组U937细胞增殖率显著降低(P<0.05),凋亡率、自噬小体数量、SIRT1、FoxO1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。结论:蓝萼甲素能抑制U937细胞的增殖,促进其凋亡和自噬,其机制可能与激活SIRT1/FoxO1信号通路有关。

阿魏酸钠通过SIRT1/FOXO3A改善血管性痴呆大鼠学习记忆障碍的机制研究

目的探究阿魏酸钠在血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠中的神经保护作用及其对前额叶皮质沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SRIT1)和叉头框转录因子O3A(forkhead box transcription factor O3A,FOXO3A)表达的影响。方法将32只雄性SD大鼠随机分成4组,每组8只。模型组和阿魏酸钠组大鼠行双侧颈总动脉栓塞;假手术组进行相同的手术操作,但不做结扎处理;正常组不做处理。阿魏酸钠组连续4周灌胃阿魏酸钠溶液(100 mg/kg),其余3组接受相同体积的生理盐水灌胃。通过Morris水迷宫、尼氏染色、Western Blot和免疫组织化学染色法观察比较各组大鼠行为学、细胞形态及SIRT1和FOXO3A蛋白的表达情况。结果正常组和假手术组神经元呈现较完整的形态结构。相较于正常组,模型组大鼠逃避潜伏期显著延长、穿越平台次数明显减少(P<0.05),细胞核固缩,SIRT1表达水平显著下降(P<0.05),FOXO3A表达显著上升(P<0.05);与模型组相比,阿魏酸钠组细胞形态得以改善,逃避潜伏期和FOXO3A蛋白表达均降低(P<0.05),穿台次数和SIRT1蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论阿魏酸钠通过调节SIRT1/FOXO3A改善大鼠学习记忆能力,为VD治疗提供了一定的研究基础。

miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及SIRT1/Foxo1蛋白表达的影响

目的 探讨miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及细胞沉默信息调节因子1/叉头框转录因子o1(SIRT1/Foxo1)蛋白表达的影响。方法 将40只大鼠随机分为对照组(健康大鼠)、模型组(骨关节炎大鼠,造模后不做其他处理及干预)、miR-125a-3p组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后于大鼠左膝关节关节腔内注射miR-125a-3p抑制剂)、阿利吉仑组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后给予大鼠50 mg/kg阿利吉仑灌胃),每组10只。通过氧化应激反应检测超氧物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH),HE、番红O、Masson染色检查大鼠软骨损伤情况,TUNEL检测软骨细胞凋亡,RT-PCR与免疫印迹检测SIRT1、Foxo1基因及蛋白水平。结果 软骨细胞凋亡率模型组高于miR-125a-3p组与阿利吉仑组(P<0.05),miR-125a-3p组与阿利吉仑组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE、番红O、Masson染色显示,模型组大鼠关节软骨面骨裂隙形成;miR-125a-3p组与阿利吉仑组大鼠关节软骨表面变得光滑,无明显裂隙。RT-PCR与免疫印迹检测显示,与模型组相比,miR-125a-3p组与阿利吉仑组SOD、GSH、SIRT1水平均升高(P<0.05), MDA、LDH、Foxo1水平均降低(P<0.05)。结论 miR-125a-3p通过调控SIRT1/Foxo1信号通路,可降低氧化应激反应,抑制软骨细胞凋亡,改善骨关节炎病情。

miR-22-3p靶向抑制SIRT1信号通路加重慢性阻塞性肺疾病

目的探讨miR-22-3p是否通过沉默信息调节因子1(SIRT1)信号通路影响慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发生发展。方法将大鼠随机分为5组:对照组、模型组、antagomir-NC组、antagomir-miR-22-3p组和antagomir-miR-22-3p+EX527组,每组12只。对照组大鼠正常饲养,其他组大鼠建立香烟烟雾(CS)和脂多糖(LPS)诱导的COPD大鼠模型。CS暴露当天开始,模型组、antagomir-NC组、antagomir-miR-22-3p组和antagomir-miR-22-3p+EX527组大鼠分别尾静脉注射生理盐水、antagomir-NC、antagomir-miR-22-3p和SIRT1抑制剂EX527,每2周注射1次,CS暴露90 d内共注射6次。CS暴露90 d后,使用肺功能分析系统测定肺功能指标:最大自主分钟通气量(MVV)、0.3 s用力呼气量(FEV0.3)、用力肺活量(FVC)和最大呼气峰流速(PEF)。按照ELISA试剂盒测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)水平。按照试剂盒说明对肺组织进行苏木素伊红(HE)染色。按照试剂盒说明检测肺组织氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)]。通过RT-PCR检测肺组织中miR-22-3p和SIRT1的mRNA水平。通过Western blot检测肺组织中SIRT1、核因子-κB(NF-κB)p65、p-NF-κB p65和叉头盒O3a(FoxO3a)蛋白表达。结果与模型组和antagomir-NC组比较,antagomir-miR-22-3p组大鼠中MVV、FEV0.3/FVC和PEF升高,BALF中IL-1β、TNF-α和MIP-2水平降低,肺组织病变减轻,肺组织中SOD和CAT水平升高,MDA水平降低,miR-22-3p水平降低,SIRT1 mRNA水平升高,SIRT1和FoxO3a蛋白水平升高,p-NF-κB p65蛋白水平降低(均P<0.05)。与antagomir-miR-22-3p组比较,antagomir-miR-22-3p+EX527组大鼠中MVV、FEV0.3/FVC和PEF降低,BALF中IL-1β、TNF-α和MIP-2水平升高,肺组织病变加重,肺组织中SOD和CAT水平降低,MDA水平升高,SIRT1 mRNA水平降低,SIRT1和FoxO3a蛋白水平降低,p-NF-κB p65蛋白水平升高(均P<0.05)。结论沉默miR-22-3p通过上调SIRT1的表达有效提高了COPD大鼠的肺功能并减轻了肺损伤。

电针通过SIRT1-FOXO1通路激活自噬减轻神经病理性疼痛的机制

目的探讨电针通过沉默信息调节因子(SIRT1)1-叉头状转录因子(FOX)O1通路激活自噬减轻神经病理性疼痛(NP)的机制。方法实验分为假手术组、模型组、电针组、电针+抑制剂组,每组12只。除假手术组外,其余各组建立坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)所致NP大鼠模型,造模第7天电针组选用“环跳”“阳陵泉”穴电针针刺;电针+抑制剂组在电针组基础上分别在第7天、第10天、第14天脊髓鞘内注射SIRT1抑制剂EX-527;假手术组和模型组鞘内注射等体积二甲基亚砜(DMSO)。造模前、造模后给药前、给药后测定机械缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(PWTL);免疫荧光检测脊髓SIRT1蛋白表达情况;透射电镜下观察脊髓超微结构;Western印迹检测脊髓中微管相关蛋白1轻链(LC)3、SIRT1、FOXO1蛋白水平。结果造模前,各组MWT、PWTL差异无统计学意义(P>0.05)。造模后给药前,与假手术组相比,模型组、电针组、电针+抑制剂组MWT、PWTL明显降低(P<0.05)。给药后,模型组出现线粒体肿胀破裂现象,且与溶酶体融合,未发现明显的自噬小体;电针组线粒体结构基本恢复,自噬小体数量多,双膜包裹里可见少量的内质网碎片;电针+抑制剂组自噬小体数量较电针组明显减少,自噬小体部分出现单膜结构。与假手术组相比,模型组MWT、PWTL、脊髓中SIRT1蛋白免疫荧光强度和蛋白水平、FOXO1、LC3Ⅱ蛋白水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显降低(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,电针组MWT、PWTL、脊髓中SIRT1蛋白免疫荧光强度和蛋白水平、FOXO1、LC3Ⅱ蛋白水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显升高(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白水平明显降低(P<0.05);与电针组相比,电针+抑制剂组MWT、PWTL、脊髓中SIRT1蛋白免疫荧光强度和蛋白水平、FOXO1、LC3Ⅱ蛋白水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显降低(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论电针通过激活SIRT1-FOXO1通路激活自噬减轻NP,实现对NP大鼠的保护。

siRNA沉默FoxO1对STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜IL-1β的影响及其作用机制

目的:探讨抑制叉头状转录因子O1(FoxO1)表达对糖尿病大鼠视网膜IL^(-1)β的影响及其作用机制。方法:将人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)用不同浓度葡萄糖处理后,采用RT-PCR和Western blot检测细胞FoxO1、IL^(-1)β表达。HRCECs按照处理方式分为空白对照组(Mock组)、阴性对照组(NC-FoxO1组)和siFoxO1组(si-FoxO1组),RT-PCR检测各组细胞FoxO1、IL^(-1)βmRNA表达,Western blot检测各组细胞FoxO1、IL^(-1)β、p-P38、p-JNK、p-ERK蛋白表达。60只大鼠随机分为对照组(Control组)、DM组、si-FoxO1转染组(LV-si-FoxO1组)和空病毒转染组(LV-NC组),DM组、LV-si-FoxO1组、LV-NC组建立糖尿病大鼠模型,造模成功后向大鼠玻璃体腔注射LV-si-FoxO1或LV-NC慢病毒载体,注射12周后分离视网膜组织,分别采用免疫组织化学染色、RT-PCR和Western blot检测大鼠视网膜组织FoxO1、IL^(-1)β表达。结果:与5 mmol·L^(-1)葡萄糖浓度组比较,15 mmol·L^(-1)浓度组FoxO1、IL^(-1)βmRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),25 mmol·L^(-1)浓度组FoxO1、IL^(-1)βmRNA和蛋白表达明显高于5 mmol·L^(-1)浓度组,而35 mmol·L^(-1)浓度组FoxO1、IL^(-1)βmRNA和蛋白表达增加的更明显,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。si-FoxO1组IL^(-1)βmRNA和蛋白表达明显低于NC-FoxO1组和Mock组(P<0.05),NC-FoxO1组和Mock组IL^(-1)βmRNA和蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。DM组和LV-NC组FoxO1、IL^(-1)βmRNA和蛋白表达明显高于Control组和LV-si-FoxO1组(P<0.05),LV-NC组与Control组FoxO1、IL^(-1)β表达差异无统计学意义(P>0.05),DM组和LV-NC组FoxO1、IL^(-1)β表达差异无统计学意义(P>0.05)。si-FoxO1组p-P38、p-JNK、pERK蛋白表达明显低于NC-FoxO1组和Mock组(P<0.05),NC-FoxO1组和Mock组p-P38、p-JNK、p-ERK蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:高糖能够诱导HRCECs FoxO1、IL^(-1)β表达增加,抑制FoxO1表达可能是通过降低MAPK磷酸化下调HRCECs细胞IL^(-1)β表达实现的。

松果菊苷调控Sirt1-FOXO1通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:研究松果菊苷通过调控沉默信息转录调节因子1(Sirt1)-叉形头转录因子1(FOXO1)通路减轻大鼠心肌缺血再灌注(MI/R)损伤。方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min,再灌注6 h建立MI/R损伤模型。将大鼠随机分为4组:假手术组、MI/R组、松果菊苷+MI/R组、Sirt1特异性抑制剂EX527+松果菊苷+MI/R组,每组10只,腹腔注射给药。心脏切片后用三苯基氯化四氮唑(TCC)染色测定心肌梗死面积;分光光度法测定血清中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)含量;TUNEL法检测心肌细胞凋亡率;蛋白质印迹法(Western blot)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测sirt1和FOXO1蛋白和mRNA表达水平。结果:与MI/R组比较,松果菊苷+MI/R组大鼠心肌梗死面积、LDH和CK含量、心肌细胞凋亡率、FOXO1蛋白和mRNA表达水平显著降低,Sirt1蛋白和mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。与松果菊苷+MI/R组比较,EX527+松果菊苷+MI/R组大鼠心肌梗死面积、LDH和CK含量、心肌细胞凋亡率、FOXO1蛋白和mRNA表达水平显著升高,而Sirt1蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论:松果菊苷能够减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与调控Sirt1-FOXO1通路有关。