硫化氢通过调控沉默信息调节子1抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤

目的观察外源性硫化氢(H2S)对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激损伤的保护作用及其可能机制。方法用25 mmol/L D-葡萄糖(高糖)、外源性H2S供体硫化氢钠(NaHS)(5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3和5×10-3mol/L)及沉默信息调节子1(SIRT1)特异性抑制剂尼克酰胺(40 mmol/L)处理HUVECs细胞株24 h。实验分为对照组、高糖组、甘露醇组、NaHS(5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3、5×10-3mol/L)组、高糖+NaHS(5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3和5×10-3mol/L)组和高糖+NaHS(10-3 mol/L)+尼克酰胺组。采用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞内的内活性氧(ROS)水平,Western bolt法检测SIRT1的表达。结果与对照组比较,高糖组细胞活力显著降低[OD值分别为(0.76±0.09)和(0.18±0.01),t=5.34,P<0.05],细胞内ROS水平显著增加[ROS水平分别为(356.18±42.96)au和(1183.63±84.31)au,t=6.72,P<0.05]。与高糖组比较,高糖+NaHS(5×10-4、1×10-3和5×10-3 mol/L)组细胞活力显著增加[OD值分别为(0.18±0.01)、(0.39±0.05)、(0.68±0.04)和(0.51±0.08),t1=3.16,t2=3.95,t3=3.86,均P<0.05],细胞内ROS水平显著降低[ROS水平分别为(1183.63±84.31)、(874.32±85.36)、(628.65±54.27)和(439.56±53.64)au,t1=3.46,t2=3.97,t3=5.13,均P<0.05]。与对照组比较,高糖组细胞中SIRT1蛋白表达显著下调[蛋白相对表达量分别为(0.48±0.04)和(0.17±0.03),t=3.94,P<0.05]。与高糖组比较,高糖+NaHS(10-3mol/L)组细胞中SIRT1表达显著上调[蛋白相对表达量分别为(0.17±0.03)和(0.59±0.08),t=4.36,P<0.05]。SIRT1抑制剂尼克酰胺取消了NaHS抑制高糖诱导的HUVECs细胞活力的降低[高糖+NaHS组和高糖+NaHS+尼克酰胺组OD值分别为(0.52±0.04)和(0.23±0.03),t=2.98,P<0.05]和细胞内ROS水平的增加[高糖+NaHS组和高糖+NaHS+尼克酰胺组ROS水平分别为(628.65±54.27)au和(1052.84±113.42)au,t=3.76,P<0.05]。结论外源性H2S抑制了高糖诱导的HUVECs氧化应激损伤,其机制可能与H2S上调SIRT1的表达有关。

沉默信息调节因子2相关酶1在急性呼吸窘迫综合征/急性肺损伤中的研究进展

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)/急性肺损伤(ALI)是以不可控炎症反应导致肺泡屏障损伤为发病机制的临床疾病。肺部严重炎症反应时,肺泡内皮细胞和上皮细胞屏障破坏,引起微血管屏障通透性增加,进而导致肺水肿。因此,炎症介质的过度生成在破坏肺泡-毛细血管屏障和通透性中起着关键作用。沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)可通过去非组蛋白/组蛋白的去乙酰化作用影响细胞代谢、基因转录、细胞凋亡、炎症反应等生物学过程,减轻肺损伤严重程度。本文将近年来有关SIRT1在各种肺损伤模型下作用的研究进展进行综述,以期能够通过SIRT1对ARDS/ALI的治疗提供新思路。

早产儿氧暴露后沉默信息调节因子1(SIRT1)表达减少与支气管肺发育不良有关

目的观察氧暴露后早产儿外周血单个核细胞（PBMC）中沉默信息调节因子1（SIRT1）的表达,探讨与早产儿发生支气管肺发育不良（BPD）的关系。方法将胎龄28周~30周早产儿根据吸入氧气体积分数（FiO_2）不同分为低氧组：FiO_2〈30%;中氧组：FiO_230%~40%;高氧组：FiO_2≥40%;同期未吸氧且胎龄为28周~30周早产儿为对照组。收集患儿的临床资料以及在住院期间常规检查获得的0、7、14、28 d残余血标本,分离PBMC分别冻存于-80℃冰箱待测。收集最终确诊为BPD的患儿20例为BPD组,随机方法收集性别匹配的非BPD患儿20例为非BPD组。回顾性分析患儿的临床资料,Western blot法检测各组PBMC中SIRT1蛋白表达。并分析SIRT1蛋白表达水平在早产儿BPD发生发展中的作用。结果与对照组相比,中氧组、高氧组随FiO_2的增加SIRT1蛋白表达明显减少,低氧组与对照组SIRT1蛋白表达水平相当。与非BPD比较,BPD组于14 d、28 d的SIRT1蛋白表达明显减少。结论早产儿持续高浓度氧暴露PBMC中SIRT1蛋白表达降低,与新生儿BPD的发生有一定关系。

骨关节炎临床表现特点及沉默信息调节因子1在其发病中的作用

背景:研究发现一些功能性基因的功能变化是引发骨关节炎的调控环节,而年龄可能是其中的关键因素之一。目的:对近年来骨关节炎中的临床现表现特点及沉默信息调节因子1在骨关节炎发生发展中的研究进展做一概述。方法:计算机检索中国期刊全文数据库、Pub Med、Springer Link、Elsevier Science Direct数据库,检索时间1987年1月至2016年1月,检索词分别为"骨关节炎;沉默信息调节因子1;软骨"和"Osteoarthritis,Cartilage,Silent information regulation 1"。对纳入符合标准的83条文献进行分析。结果与结论:研究表明,在多种信号通路中去乙酰化修饰调控大量细胞因子的表达和生物学功能,继而影响骨关节炎的发生和发展。沉默信息调节因子1具有调节机体代谢,抑制细胞凋亡,修复DNA损伤,延缓衰老,抵抗应激反应等重要作用,同时在表观遗传学修饰、基因沉默和信号转导调节中发挥着重要的生物学功能,因此沉默信息调节因子1与各种年龄相关的疾病有关,如骨关节炎、骨质疏松症、糖尿病和阿尔茨海默症等。沉默信息调节因子1有望成为开发治疗骨关节炎药物的重要靶点,甚至可能在骨关节炎不成熟的阶段,逆转机械应力导致的软骨功能损伤。

脂滴自噬在丙型肝炎病毒核心蛋白下调沉默信息调节因子1诱导小鼠肝脂肪变性中的作用

目的研究脂滴自噬在HCV核心蛋白下调沉默信息调节因子1(SIRT1)诱导小鼠肝脂肪变性中的作用。方法小鼠随机分为两组,每组10只。实验组小鼠尾静脉注射HCV core重组表达载体。对照组小鼠尾静脉注射磷酸盐缓冲溶液。1个月后处死小鼠。检测肝功能、脂联素、血清和肝内甘油三酰(TG)、肝脏组织病理学检查肝脂肪变性程度。蛋白质免疫法检测肝脏SIRT1蛋白、脂联素受体(AdipoR)蛋白以及脂滴自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、脂肪分化相关蛋白(ADRP)、尾部作用蛋白(TIP-47)和P62蛋白的表达。计量资料采用t检验。结果与对照组相比,HCV组小鼠出现肝脂肪变性;肝脏TG含量明显增加[(80.9±20.1)比(45.8±10.5)μg/mg,t=4.964,P<0.01];血清脂联素[(1.05±0.25)比(1.41±0.45)ng/mL,t=2.211,P<0.05]水平下降;SIRT1蛋白水平(0.4±0.1比0.9±0.2,t=7.071,P<0.01)和AdipoR2蛋白水平(0.4±0.1比0.8±0.2,t=5.656,P<0.01)下降;LC3-Ⅱ蛋白(0.8±0.2比0.4±0.1,t=5.656,P<0.01)、TIP-47蛋白(0.9±0.3比0.4±0.1,t=5.000,P<0.01)和ADRP蛋白(0.8±0.3比0.4±0.1,t=4.000,P<0.01)表达增加;而p62蛋白(0.7±0.2比0.8±0.3,t=0.877,P>0.05)表达水平差异无统计学意义。结论 HCV核心蛋白下调SIRT1表达,下调脂联素及受体表达,引起不完全脂滴自噬导致肝脂肪变性。

丙型肝炎病毒核心蛋白下调沉默信息调节因子1导致肝窦内皮细胞功能障碍

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对肝窦内皮细胞(LSEC)沉默信息调节因子1(SIRT1)表达及LSEC功能的影响。方法 HepG2细胞或表达HCV核心蛋白的HepG2细胞与LSEC共培养。应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-PCR(RT-PCR)、Western印迹检测LSEC SIRT1活性、mRNA和蛋白的表达,以及LSEC脂联素受体2(AdipoR2)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、第Ⅷ相关抗原(Von Willebrand factor,vWf)、分化抗原簇31(CD31)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和CD14蛋白的表达。应用流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平,检测共培养上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、脂联素、一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)的水平。计量资料采用t检验。结果与LSEC和HepG2细胞共培养组相比,LSEC和表达HCV核心蛋白HepG2细胞共培养组SIRT1活性(0.3±0.1比1.0±0.3,t=5.422,P<0.01)、mRNA(0.4±0.1比1.0±0.2,t=6.573,P<0.01)和蛋白(0.3±0.08比1.0±0.3,t=5.613,P<0.01)水平下降;脂联素[(3.41±0.61)比(5.82±0.87)μg/mL,t=5.556,P<0.01]分泌减少且AdipoR2蛋白(0.3±0.1比0.8±0.2,t=5.477,P<0.01)表达下降;eNOS蛋白(0.4±0.1比0.9±0.3,t=3.873,P<0.01)表达下降;vWf蛋白(0.8±0.3比0.4±0.1,t=3.098,P<0.01)、CD31蛋白(0.9±0.2比0.3±0.1,t=6.573,P<0.01)、VEGF蛋白(0.9±0.3比0.5±0.1,t=3.873,P<0.01)表达增加;CD14蛋白(0.4±0.1比0.9±0.3,t=3.873,P<0.01)表达下降。共培养上清液中NO和SOD水平下降,ET-1和MDA水平升高。结论 HCV核心蛋白下调SIRT1活性及表达,下调脂联素及受体表达,引起LSEC收缩和肝窦毛细血管化,增加氧化应激反应,导致肝窦微循环障碍。

丙型肝炎病毒核心蛋白下调沉默信息调节因子1导致肝星状细胞活化

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对肝星状细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)表达及肝星状细胞活化的影响。方法 HepG2细胞或表达HCV核心蛋白的HepG2细胞与肝星状细胞(LX-2细胞)共培养。应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-PCR、Western印迹检测LX-2细胞SIRT1活性、mRNA及蛋白的表达。Western印迹检测LX-2细胞磷酸化AMP激活的蛋白激酶(p-AMPK)、脂联素受体2(AdipoR2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白的表达。ELISA法检测共培养上清液中人Ⅳ胶原(ColⅣ)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)、透明质酸(HA)和人层黏连蛋白(LN)的水平。计量资料采用t检验。结果与LX-2细胞和HepG2细胞共培养组相比,LX-2细胞和表达HCV核心蛋白HepG2细胞共培养组SIRT1活性(0.4±0.1比1.0±0.2,t=6.573,P<0.01)、mRNA(0.3±0.1比1.0±0.3,t=5.422,P<0.01)和蛋白(0.4±0.1比0.8±0.2,t=4.382,P<0.01)水平下降;p-AMPK(0.3±0.1比0.8±0.2,t=5.477,P<0.01)和AdipoR2(0.4±0.1比0.8±0.2,t=4.382,P<0.01)表达下降;TGF-β1(2.3±0.5比0.8±0.2,t=6.823,P<0.01)表达增加;共培养上清液中ColⅣ、PⅢNP、HA和LN的水平增加。SIRT1激动剂白藜芦醇降低TGF-β1的表达。结论 HCV核心蛋白下调肝星状细胞SIRT1活性及表达,下调AdipoR2表达,上调TGF-βl表达,活化肝星状细胞。

沉默信息调节因子2相关酶1参与机体相关调控及脓毒症治疗靶点的研究进展

脓毒症是一种复杂的综合征,是由宿主反应功能失调引起的危及生命的器官功能障碍,具有高发病率,高病死率的特点。沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)作为组蛋白去乙酰化酶与多种底物蛋白相结合,活化后具有抑制机体炎症反应、细胞衰老、氧化应激等发挥器官保护作用。MicroRNA(miRNA)是SIRT1表达的重要调节因子,直接靶向SIRT1参与多种疾病的发展。因此,SIRT1有可能成为脓毒症的治疗靶点。本文通过对SIRT1参与机体生理调控、调节miRNA表达及其在脓毒症相关脏器损伤中的研究进展进行综述,以期为脓毒症的治疗提供新的策略和方向。

基于AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路研究补阳还五汤促进骨质疏松性骨折大鼠愈合的机制

目的基于AMP活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子(sirt)1/核转录因子(NF)-κB受体活化蛋白配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路,探究补阳还五汤促进骨质疏松性骨折大鼠骨折愈合的机制。方法将大鼠随机分成假手术组、模型组、补阳还五汤低剂量组(6.25 g/kg)、补阳还五汤中剂量组(12.50 g/kg)和补阳还五汤高剂量组(25.00 g/kg)。除假手术组外,其余组均构建骨质疏松性骨折模型,并给予相应剂量药物干预。检测大鼠骨密度(BMD)值、骨折愈合评分及骨痂体积;自动生化分析仪测定血清碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素、钙和磷水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测股骨组织中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠骨痂组织的病理形态;Western印迹检测股骨组织中AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组骨痂骨小梁分布稀疏,成骨细胞大量减少且有纤维组织生成,骨痂体积、血清中ALP、骨钙素、钙和磷水平及股骨组织中MDA水平、RANKL蛋白水平显著升高(P<0.05),BMD值、骨折愈合评分、骨组织中SOD和GSH-Px水平和AMPK、sirt1、OPG蛋白水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,补阳还五汤低、中、高剂量组骨痂骨小梁分布较为密集,成骨细胞增加,骨痂体积、血清中ALP、骨钙素、钙和磷水平及股骨组织中MDA水平、RANKL蛋白水平显著降低(P<0.05),BMD值、骨折愈合评分、骨组织中SOD和GSH-Px水平和AMPK、sirt1、OPG蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论补阳还五汤可能通过抑制氧化应激反应,调节AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路,发挥对骨质疏松骨折大鼠的治疗作用。

沉默信息调节因子2相关酶1与慢性阻塞性肺疾病关系的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是呼吸系统中的常见病和多发病,患病率和死亡率均居高不下,预计到2020年将成为全球第三大常见死亡原因。COPD最常见和最强的危险因素是吸烟,这导致了COPD的主要病理,包括肺气肿(空腔扩大导致的肺泡壁破坏)、炎症、蛋白酶/抗蛋白酶失衡、细胞凋亡和氧化应激等。沉默信息调节因子(Sir)2相关酶(Sirt)1参与COPD的发病、发展过程,笔者前期做了许多关于COPD发病及防治机制的研究,目前Sirt1在COPD中受到了极大的关注,未来可能成为治疗COPD的一项新的靶点。本文就Sirt1在COPD中作用,重点在于Sirt1如何调节炎症反应、氧化应激、细胞衰老、自噬、凋亡。此外,本文还将讨论Sirt1激活剂作为COPD治疗中的潜在应用。

能量限制通过激活沉默信息调节因子2相关酶1信号通路抑制小鼠卵泡发育和消耗

目的:探讨能量限制(CR)是否通过激活沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)信号通路调控雌性小鼠卵泡发育和卵巢寿命。方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为对照组、CR组和SIRT1激活剂(SRT1720)干预组;观察3组摄食量、体质量变化;26周后取小鼠卵巢、内脏脂肪称重,卵巢组织切片经苏木精-伊红染色,计数不同发育阶段的各级卵泡数;用Western'blot检测卵巢中SIRT1、FOXO3a、NRF1、SIRT6和p53的蛋白表达水平。结果:SRT1720和CR组体质量、卵巢及内脏脂肪重量相似,但均比对照组轻(P<0.05)。3组卵巢中卵泡总数相似。SRT1720和CR组存活卵泡数和闭锁卵泡数相似,但存活卵泡数均比对照组多(P<0.05),闭锁卵泡数均比对照组少(P<0.05)。SRT1720和CR组原始卵泡数、窦状卵泡数和黄体数均相似,但原始卵泡数均比对照组多(P<0.05),窦状卵泡数和黄体数均比对照组少(P<0.05)。Western blot显示SRT1720和CR组卵巢SIRT1、FOXO3a、NRF1、SIRT6和p53蛋白表达水平相似,且SIRT1、FOXO3a、NRF1和SIRT6蛋白水平均高于对照组(P<0.05),而p53蛋白水平均低于对照组(P<0.05)。结论:CR通过激活SIRT1信号抑制成年雌性小鼠原始卵泡的激活以及卵泡发育与消耗,保持卵巢中卵泡的储备量,从而延长卵巢寿命。

沉默信息调节因子T1及其在心血管疾病中保护作用的研究进展

沉默信息调节因子(SIRT1)是一种依赖烟碱胺腺嘌呤二核苷酸的Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶,与酵母菌中发现的沉默信息调节因子2高度同源,其通过对组蛋白以及多种非组蛋白底物的去乙酰化作用调控细胞代谢、衰老、凋亡及氧化应激等众多生理及病理过程。最近研究发现,SIRT1及其下游的调节通路参与心血管疾病的发生发展过程,并起到保护作用。SIRT1在基础医学研究和临床医学应用中具有重要意义,可能成为心血管疾病防治的新策略和潜在靶点。该文对近年来SIRT1在心血管疾病中的研究做一综述。

沉默信息调节因子1在消化系统肿瘤中的作用

沉默信息调节因子1(SIRT1)是Sirtuin家族中的一员,属于烟酰胺(NAD+)依赖的Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶,能通过对多种非组蛋白及组蛋白赖氨酸残基进行去乙酰化修饰调节基因表达。近来的研究发现,SIRT1不仅能使肿瘤抑制因子去乙酰化,促进肿瘤发生,还能使肿瘤促进因子去乙酰化,抑制肿瘤发生。SIRT1与肿瘤的生物学特性密切相关,影响肿瘤分期及患者预后。在消化系统肿瘤中,SIRT1具有双面性,既可作为抑癌因子,也可发挥癌因子的作用。近年来,许多研究对SIRT1在肿瘤中的作用靶点及相关信号通路做了深入研究,关于SIRT1在肿瘤中作用机制的新研究不断出现。SIRT1已成为人们攻克肿瘤的一个研究热点。本文通过对SIRT1在肿瘤中的双重作用,尤其是在消化系统肿瘤中的不同作用靶点和参与的信号通路作一综述,希望为临床上治疗消化系统肿瘤提供更有说服力的证据。

白藜芦醇苷通过上调SIRT1抑制氧化低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞增殖和炎性因子表达

目的观察白藜芦醇苷对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导THP-1巨噬细胞(MDM)炎性增殖与细胞因子表达的影响及机制。方法培养THP-1巨噬细胞,分为对照组(仅加入普通培养基)、ox-LDL组(80μmol/L ox-LDL处理细胞24 h)、白藜芦醇苷处理组(100μmol/L白藜芦醇苷预处理2 h后,再加入80μmol/L ox-LDL处理24 h)、EX-527组(10μmol/L EX-527预处理细胞2 h)。CCK-8法检测各组细胞增殖率,分光光度计检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)以及丙二醛(MDA)含量,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)负载法检测活性氧(ROS)的含量;实时定量PCR法检测白藜芦醇苷对组蛋白去乙酰化酶沉默信息调节因子1(SIRT1)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)mRNA水平的影响,Western blot法检测SIRT1、MCP-1、TNF-α、IL-6的蛋白水平。结果 ox-LDL促进THP-1巨噬细胞增殖。100μmol/L白藜芦醇苷组明显抑制ox-LDL诱导的细胞增殖,同时明显增加SOD含量,降低胞内MDA与ROS含量。ox-LDL抑制THP-1巨噬细胞中SIRT1 mRNA与蛋白表达,促进MCP-1、TNF-α、IL-6 mRNA与蛋白表达。白藜芦醇苷显著增加ox-LDL诱导后SIRT1 mRNA与蛋白表达,抑制MCP-1、TNF-α、IL-6 mRNA与蛋白表达,EX-527能抑制白藜芦醇苷上述保护作用。结论白藜芦醇苷可通过上调SIRT1表达提高抗巨噬细胞增殖的能力,减少ox-LDL诱导细胞内活性氧生成、抑制炎性因子表达。

白藜芦醇苷通过上调SIRT3和SDF-1延缓大鼠心肌纤维化

目的观察白藜芦醇苷对阿霉素诱导心肌纤维化与免疫细胞因子表达的作用及机制。方法雄性SD大鼠20只,随机分为4组,每组5只。对照组(常规喂养)、阿霉素组(腹腔注射2. 5 mg/kg阿霉素,2次/周)、白藜芦醇苷组(腹腔注射50 mg/kg白藜芦醇苷,1次/日,其余处理同阿霉素组)、尼克酰胺组(腹腔注射500 mg/kg尼克酰胺,2次/周,其余处理同白藜芦醇苷组)。Van Gieson染色法观察心肌纤维化,免疫组织化学染色法检测心肌组织1型胶原蛋白(Col1)、Col3表达,酶标法检测心肌羟脯氨酸(HYP)含量,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)与还原型谷胱甘肽(GSH)水平,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、IL-10含量,反转录PCR检测沉默信息调节因子1(SIRT1)、SIRT3、基质细胞衍生因子1(SDF-1)与转化生长因子β(TGF-β)的mRNA水平,Western blot法检测心肌SIRT1、SIRT3、SDF-1与TGF-β的蛋白水平。结果阿霉素促进心肌纤维化,降低心肌组织中IL-10的水平并抑制SIRT3、SDF-1 mRNA与蛋白表达,增加TNF-α、IL-1的水平并促进TGF-βmRNA与蛋白表达。白藜芦醇苷明显抑制阿霉素诱导的心肌纤维化效应,降低HYP与Col3水平,同时增加GSH与SOD含量,降低MDA含量。显著增加阿霉素诱导后心肌细胞SIRT3、SDF-1 mRNA与蛋白水平,抑制TGF-β表达,尼克酰胺能抑制白藜芦醇苷上述作用。结论白藜芦醇苷可通过上调SIRT3表达提高抗心肌纤维化能力,降低阿霉素诱导氧化应激水平、抑制炎性细胞因子表达。

miR-138靶向调控SIRT1表达及其对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-138(miRNA-138)在膀胱癌细胞中的表达情况,并研究其对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的靶基因。方法采用实时定量PCR(QPCR)法检测膀胱癌细胞T24和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中miR-138的表达水平。将T24细胞分为3组:未转染组、miR-138对照组(转染阴性对照片段)和miR-138转染组(转染miR-138mimics)。采用MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Western blotting检测细胞中沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-138与SIRT1间的靶向关系。结果膀胱癌T24细胞中miR-138的表达量为0.57±0.19,低于SV-HUC-1细胞的1.00±0.26(P<0.05)。miR-138转染组的miR-138表达量为2.59±0.67,高于未转染组的1.00±0.36和miR-138对照组的1.08±0.49(P<0.05)。miR-138转染组T24细胞的增殖率显著低于未转染组和miR-138对照组(P<0.05)。转染48 h后,miR-138转染组的细胞凋亡率为(29.8±1.9)%,高于未转染组的(5.8±1.2)%和miR-138对照组的(7.7±0.9)%(P<0.05)。miR-138转染组SIRT1的相对表达量为0.59±0.22,低于未转染组的1.00±0.35和miR-138对照组的1.20±0.42(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证明SIRT1是miR-138的直接作用靶点。结论 miR-138在膀胱癌细胞中低表达,可能通过靶向SIRT1调控膀胱癌细胞的增殖和凋亡。

丹皮酚通过上调SIRT1减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:检测丹皮酚对于大鼠心肌缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)的保护作用并探究其作用机制。方法:使用Sprague Dawley(SD)大鼠建立心肌缺血再灌注损伤模型。Western blot检测大鼠心肌组织中沉默信息调控因子1(sirtuin1,SIRT1)表达水平。2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFDA)试剂盒检测大鼠心肌组织中活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量。ELISA法检测大鼠心肌组织氧化应激标志物丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)表达水平及大鼠血浆中心肌损伤标志物乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)含量。超声心动系统检测大鼠心脏功能和心室重构情况。结果:丹皮酚显著减少了大鼠心脏组织中活性氧的含量,下调了MDA、LDH和CK的表达,并上调了SOD的表达水平。此外,超声心动图的结果说明丹皮酚还具有提高大鼠心脏功能和逆转大鼠心室重构的作用。丹皮酚的预处理显著增强了大鼠心肌组织中SIRT1的表达水平。进一步的研究表明,下调SIRT1逆转了上述所有丹皮酚的作用。结论:丹皮酚通过上调SIRT1的表达,减轻了缺血再灌注导致的大鼠心肌组织氧化应激和心肌损伤,并因此改善了心脏功能和心室重构情况。

沉默信息调节因子2同源蛋白1与肿瘤

沉默信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1/sirtuin 1)为III型去乙酰化酶,依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)调控基因转录、细胞凋亡等一系列细胞功能。近年研究发现,SIRT1表达水平改变对于某些肿瘤具有很强的抑制作用,本文从SIRT1的基本结构以及在癌症中的研究现状和与癌细胞的侵袭与转移和凋亡机制两方面阐述SIRT1与肿瘤调节之间的关系。

白花丹素介导sirt1-FOXO1通路对糖尿病肾病大鼠氧化应激损伤的影响

目的探究白花丹素通过沉默信息调节因子2相关酶(sirt)1-叉头框蛋白(FOX)O1通路对糖尿病肾病(DN)大鼠氧化应激损伤的影响。方法120只SD大鼠随机分为对照组、DN组、白花丹素低剂量组、白花丹素高剂量组、EX-527组(sirt1抑制剂,5 mg/kg)、白花丹素高剂量+EX-527组,每组20只。检测大鼠24 h尿蛋白、空腹血糖(FBG)、血肌酐(SCr)、血β2微球蛋白(β2-MG)及肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;测定大鼠左肾指数;过碘酸雪夫(PAS)染色观测肾脏病理变化;TUNEL法检测肾组织细胞凋亡;Western印迹法检测sirt1-FOXO1通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,DN组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著升高,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白均显著降低(P<0.05)。与DN组相比,白花丹素低、高剂量组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著降低,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白显著升高(P<0.05);EX-527组24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著升高,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1蛋白均显著降低(P<0.05);EX-527可部分削弱白花丹素高剂量对DN大鼠氧化应激损伤的缓解作用。结论白花丹素可能通过激活sirt1-FOXO1通路,缓解DN大鼠氧化应激损伤。

基于SIRT1/PGC-1α信号通路探讨抑眩宁颗粒干预缺血性眩晕的作用机制

目的:探讨抑眩宁颗粒对沉默信息调节因子1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)信号通路的调控作用及对缺血性眩晕大鼠眩晕症状的改善作用。方法:对清洁级SD大鼠进行电刺激逃避反射训练3 d后建立缺血性眩晕模型。将大鼠分为模型组、抑眩宁颗粒组(6 g/kg)、SIRT1抑制剂(EX527)组(5 mg/kg)、抑眩宁颗粒+EX527组(抑眩宁颗粒6 g/kg+EX5275 mg/kg),各组给予相应药物干预7 d;另取16只清洁级SD大鼠作为假手术组(进行造模前训练,仅穿线不结扎)。采用跳台逃避实验测定跳台逃避潜伏期;多普勒激光血流仪测量大鼠前庭神经核组织血流量,计算血流量下降率;苏木精-伊红染色观察大鼠脑组织病理特征;酶联免疫吸附法检测大鼠脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、一氧化氮(NO)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;蛋白免疫印迹法检测大鼠脑组织SIRT1、PGC-1α、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑组织神经细胞变形、固缩和凋亡,跳台逃避潜伏期、给药后血流量下降率、脑组织MDA、NO、IL-1β、TNF-α含量、Bax蛋白表达水平升高(P<0.05),SOD活性、SIRT1、PGC-1α和Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。与模型组比较,抑眩宁颗粒组大鼠脑组织凋亡变异的细胞数量减少,胶质周围的正常细胞数量增多,跳台逃避潜伏期、给药后血流量下降率、脑组织MDA、NO、IL-1β、TNF-α含量及Bax蛋白表达水平降低(P<0.05),SOD活性、SIRT1、PGC-1α和Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05);EX527组大鼠脑组织神经细胞严重变形,固缩和凋亡现象明显,跳台逃避潜伏期、给药后血流量下降率、脑组织MDA、NO、IL-1β、TNF-α含量及Bax蛋白表达水平升高(P<0.05),SOD活性、SIRT1、PGC-1α和Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。EX527可逆转抑眩宁颗粒对缺血性眩晕大鼠的改善作用(P<0.05)。结论:抑眩宁颗粒可能通过激活SIRT1/PGC-1α通路、抑制氧化应激和炎症反应,进而改善缺血性眩晕大鼠眩晕症状。