沉默维甲酸诱导蛋白14蛋白在胃癌组织芯片中的表达及其临床意义

目的探讨沉默维甲酸诱导蛋白14(RAI14)在胃癌组织的表达及临床意义。方法选择带有随访信息的胃癌组织芯片(HStmA180Su18),采用用免疫组织化学二步法检测癌组织和癌旁组织中RAI14的表达水平,用SPSS 21.0软件分析RAI14表达水平与临床病理特征及癌预后关系进行统计学分析。结果RAI14主要在胞质中表达,癌组织中RAI14表达量显著高于癌旁组织(9.59±2.78比3.03±1.54,P<0.01);RAI14表达水平与病理分化程度(rs=0.280,P<0.01)、肿瘤浸润深度(rs=0.353,P<0.01)、淋巴结转移(rs=0.514,P<0.01)、临床分期(rs=0.496,P<0.01)正相关。Kaplan-Meier生存率分析显示胃癌患者总生存率与RAI14表达负相关(χ^(2)=55.984,df=2,P<0.01)。多因素COX回归分析显示RAI14高表达[比值比(OR)=1.223,95%可信区间(CI):1.124~1.361,P<0.01]和临床分期(OR=3.118,95%CI:1.897~5.539,P<0.01)为影响总生存率的单因素独立危险因素。结论RAI14是胃癌潜在的致癌基因,是胃癌预后的独立风险因素之一。

磷酸化蛋白质组学联合蛋白质组学分析敲除维甲酸诱导蛋白16对人结肠癌细胞的影响

目的分析人结肠癌HCT116细胞敲除维甲酸诱导蛋白16(RAI16)后细胞内总蛋白及磷酸化蛋白质表达的差异,探究RAI16影响HCT116细胞蛋白质功能的可能机制及相关信号通路。方法收集并提取HCT116 KO和WT细胞蛋白,SDS-PAGE检验蛋白提取效果。利用胰蛋白酶酶解蛋白后,标记肽段并进行质谱分析。对鉴定到的差异蛋白及差异磷酸化蛋白质利用GO数据库、KEGG数据库和STRING数据库进行生物信息学分析。结果SDS-PAGE结果提示蛋白无明显降解,且实验组与对照组部分关键条带有明显差异;按Foldchange≥1.5或Foldchange≤1/1.5且P<0.05为条件进行差异蛋白的筛选,共筛选出147个上调差异蛋白和230个下调差异蛋白;并筛选到106个上调磷酸化位点和217个下调磷酸化位点。将去本底差异磷酸化位点功能GO富集分析,发现差异蛋白主要在核质、细胞核及细胞质组成,RNA、钙黏着蛋白及染色质结合,DNA修复、RNA剪接及DNA为模板转录的正调控等多个方面有显著富集趋势。KEGG富集结果显示,差异蛋白主要在核质转运、剪接体、细胞周期、细胞间紧密连接、病毒致癌作用和癌症中的微小RNA等通路具有显著富集趋势。蛋白互作网络主要以DDX17、NCL、EEF2、CDK1、SSRP1和SMARCC1为核心蛋白质。统计发现,SKP1、ORC1和BAD等两组学差异变化均上调,且磷酸化差异变化比蛋白差异变化更显著,RBL1、RB1、CDK1、CDC6、MCM4、TFDP1、CHD4和SNW1等两组学差异变化均下调,且磷酸化差异变化比蛋白差异变化更显著。结论RAI16可能通过SKP1、ORC1、RB1和CDK1等关键蛋白质在多方面生物功能和多条信号通路中发挥作用,影响细胞周期,进而影响癌症发生发展。

双向电泳分析比较维甲酸诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异

目的 以维甲酸诱导急性早幼粒白血病细胞HL60分化为模型 ,用双向电泳技术分析比较维甲酸诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异。方法 用细胞生物学的方法分析分化细胞形态上的差异 ,NBT实验检测细胞NBT阳性率。用双向电泳技术分析分化肿瘤细胞蛋白表达差异。结果 分化后细胞形态发生明显变化 ,细胞表面出现突起 ,细胞核变小。分化后细胞NBT阳性率达90 %以上 ,而未分化细胞NBT阳性率低于 5 %。双向电泳技术分析发现有 7个蛋白点只未分化细胞检测到表达 ,而分化细胞未检测到 ;有 14个蛋白点只在分化细胞检测到。结论 双向电泳技术可直接反映细胞蛋白表达变化。

未折叠蛋白反应对维甲酸诱导鼠胚胎干细胞分化的作用

目的 研究未折叠蛋白反应 (UPR)在神经分化过程中的作用。 方法 应用全反式维甲酸 (RA)诱导鼠胚胎干细胞 (ES) ,通过免疫细胞化学和RT PCR方法检测神经组织特异性标志物的表达 ,建立以RA诱导ES细胞得到的神经分化的初步模型 ,再分别用RT PCR和Westernblot方法检测模型中UPR分子的表达。 结果 RA诱导后得到大量表达神经特异性标志物的细胞。UPR关键分子Irelα的表达在RA处理组和未经RA处理组中均下降 ,但未经RA处理组中Irelα的表达始终低于同一时间RA处理组细胞 ;Grp78的表达在RA处理组随诱导时间延长逐渐上升 ,但在未经RA处理组Grp 78的表达未见上升。Irelα和Grp78的这种表达变化与RA诱导细胞中神经特异性标志物的表达情况相关。 结论 以RA诱导ES细胞得到表达神经特异性标志物的细胞分化系统 ,可作为研究神经发育的初步模型 ,其模型中UPR分子的表达变化提示 。

维甲酸诱导蛋白Ⅰ在禽类抗病毒天然免疫中的研究进展

维甲酸诱导蛋白Ⅰ(retinoic acid-inducible geneⅠ,RIG-Ⅰ)是机体先天性免疫系统中的一类重要受体,能识别细胞中的外源RNA,诱导Ⅰ型干扰素、细胞因子及趋化因子的产生,对机体抗病毒天然免疫的建立有重要作用。研究结果发现,RIG-Ⅰ在哺乳动物中能抑制流感病毒和新城疫病毒等病毒。鸡体内不含有RIG-Ⅰ,鸭RIG-Ⅰ能在鸡源细胞系中产生显著的抗禽流感病毒效果。作者重点论述了RIG-Ⅰ的作用机制,展望了RIG-Ⅰ在提高禽类抗病力和推进禽类先天性免疫基础研究方面的潜力。

细胞角蛋白13在全反式维甲酸和三氧化二砷诱导分化人口腔鳞癌细胞系KB中的表达

目的研究细胞角蛋白(cytokertin,CK)13及其基因在全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)和三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导分化人口腔未分化鳞癌细胞系KB中的表达和意义。方法采用MTT法观察ATRA和As2O3对KB细胞的敏感程度,Western blot法和RT-PCR法观察KB细胞经ATRA和As2O3诱导分化后的CK13和CK13-mRNA的表达。结果MTT法显示ATRA和As2O3的IC50分别为35.9×10-6mol/L和1.55×10-6mol/L,As2O3对KB细胞药物化学敏感性比ATRA高;Western blot法显示ATRA和As2O3对KB细胞诱导分化后24h CK13无表达,48h CK13出现弱表达,72h CK13出现明显的表达;RT-PCR法显示ATRA和As2O3对KB细胞诱导分化后24h CK13-mRNA表达明显升高,48h达到高峰,72h出现下降的趋势,并且CK13-mRNA的表达变化提前于CK13的表达。结论CK13可作为口腔鳞癌诱导分化标记物和判断临床口腔鳞癌诱导分化疗效的指标。

鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ基因原核表达和单克隆抗体的制备及鉴定

本试验旨在制备针对鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ(RIG-Ⅰ)全长蛋白的单克隆抗体。从鸭脾脏cDNA中扩增鸭RIG-Ⅰ基因N端长度均为900bp的a(1—900bp)和b(751—1650bp)2段基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-30a中;重组质粒转化BL21感受态细胞后,经IPTG诱导表达,将获得的目的蛋白免疫BALB/c小鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,并进行间接ELISA检测。结果显示,筛选出17株与分段表达的鸭RIG-Ⅰ蛋白有良好反应性的杂交瘤细胞株,测定单克隆抗体上清效价均为1∶512;间接免疫荧光(IFA)与Western blotting分析结果显示,10H7C3和2A10A2 2株单克隆抗体与原核表达的鸭RIG-Ⅰ全长蛋白有良好的反应性。本研究制备了特异性鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体,为进一步研究RIG-Ⅰ基因的功能奠定了基础。

宽体金线蛭提取物对HEK293细胞维甲酸诱导基因蛋白样受体(RLRs)通路的影响

维甲酸诱导基因蛋白样受体(RLRs)信号通路是机体重要的抗病毒作用途径。宽体金线蛭体内含有抗凝血的活性物质,主要用于治疗血栓等疾病,但对于该信号通路的影响尚无任何报道。本试验目的是采用聚肌苷酸聚胞苷酸(Poly I∶C)建立HEK293细胞RLRs信号通路激活模型,在此基础上揭示宽体金线蛭提取物(LE)对HEK293细胞RLRs信号通路的影响。试验首先转染3个不同质量浓度(1、2、4μg·mL^(-1))的Poly I∶C至HEK293细胞,并分别处理12 h、24 h和48 h,以维甲酸诱导基因I(RIG-I)的蛋白表达水平和mRNA转录水平为RLRs通路激活的指标。RLRs信号通路激活之后,采用LE对HEK293细胞进行处理,共设置4组,每组3个重复,分别为:对照组、2μg·mL^(-1) Poly I∶C转染组、2μg·mL^(-1) Poly I∶C转染且添加150μg·mL^(-1)的水蛭提取物、2μg·mL^(-1) Poly I∶C转染且添加300μg·mL^(-1)的水蛭提取物。处理时长分别为24 h和48 h。试验结果表明,转染3个剂量的Poly I∶C在3个处理时长均引起细胞活力降低,2μg·mL^(-1)和4μg·mL^(-1) Poly I∶C转染HEK293细胞12 h、24 h和48 h均显著提高了RIG-I蛋白的表达量,4μg·mL^(-1)的Poly I∶C转染组RIG-I mRNA转录水平在24 h和48 h显著提高。选择Poly I∶C质量浓度2μg·mL^(-1),处理24 h和48 h作为后续试验激活RLRs的处理条件。质量浓度为150μg·mL^(-1) LE可以显著抑制Poly I∶C介导的细胞活力降低;300μg·mL^(-1)的LE显著降低了RIG-I的蛋白水平;150μg·mL^(-1)和300μg·mL^(-1) LE处理24 h和48 h后均显著抑制了β干扰素的mRNA转录和生成。据此得出如下结论:Poly I∶C转染HEK293细胞成功地激活了RLRs信号通路,宽体金线蛭提取物具有促进HEK293细胞活力和抑制β干扰素生成的作用。

骨形态发生蛋白/维甲酸诱导的神经特异性蛋白3在丙戊酸钠诱导神经干细胞向神经元分化过程中的作用

目的探讨骨形态发生蛋白/维甲酸诱导的神经特异性蛋白3(Brinp3)在丙戊酸钠(VPA)诱导神经干细胞向神经元分化过程中的作用。方法体外培养大鼠海马神经干细胞,运用Real-time PCR和Western blotting技术在VPA诱导神经干细胞分化后24 h和48 h检测Brinp3的表达;Real-time PCR检测Brinp3在成年大鼠各组织中以及在神经干细胞、星形胶质细胞和神经元中的表达水平;在神经干细胞中转染Brinp3小干扰RNA(siRNA)并诱导分化24 h后,运用Real-time PCR、Western blotting和免疫荧光技术检测Brinp3和神经元标志分子的表达。以上实验均包含5次生物学重复。结果与对照组相比,VPA处理组中Brinp3的mRNA和蛋白水平在24 h和48 h均显著上调(P<0.05);Brinp3在脑组织中呈优势表达;Brinp3在星形胶质细胞中表达较低,而在神经元中表达较高(P<0.001);在神经干细胞中转染Brinp3 siRNA,诱导分化24 h后,Brinp3的表达被显著抑制(P<0.001),神经元标志分子的表达均显著下调(P<0.01),第4天分化成的神经元比例减少(P<0.001)。结论Brinp3表达的上调可能介导了VPA促神经干细胞向神经元分化的功能。

沉默干扰素诱导跨膜蛋白3可抑制肝癌细胞HepG2增殖和侵袭

目的研究干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)在原发性肝癌中的异常表达,探讨沉默IFITM3表达对肝癌细胞系Hep G2生物学特征的影响。方法通过Western blot和免疫组织化学染色法检测60例肝癌组织及对应癌旁组织中IFITM3的表达情况及相关性;构建IFITM3小干扰RNA片段(IFITM3 si-RNA),采用脂质体介导转染肝癌细胞(Hep G2细胞系),同时设置无义序列组和空白对照组,实时荧光定量PCR检测转染后IFITM3 m RNA的表达;CCK8(cell counting kit 8)检测转染后细胞增殖能力;Western blot检测IFITM3在蛋白水平的表达;Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化。结果和癌旁组织相比,IFITM3在肝癌组织中的明显高表达。与无义序列组和空白对照组比较,IFITM3 si-RNA转染组细胞IFITM3表达和细胞增值率降低,穿膜细胞数也明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。划痕实验也表明迁移能力降低。结论 IFITM3在原发性肝癌中高表达;IFITM3在肝癌细胞增殖和侵袭过程中发挥重要作用,有望成为原发性肝癌基因治疗的侯选靶点。

脂多糖结合蛋白抑制肽对内毒素诱导的人单核巨噬细胞株表达CD14的影响

目的研究脂多糖结合蛋白(LBP)抑制肽对内毒素(LPS)诱导的人单核巨噬细胞株U937细胞表达CD14的影响。方法佛波脂(PMA)诱导U937成熟后分为5组:正常对照组、LPS组(100ng/mLLPS+100ng/mLrhLBP)、低剂量抑制肽组、中剂量抑制肽组及高剂量抑制肽组,后3组分别给予10、100和1000ng/mL抑制肽。用RTPCR和蛋白定量方法(Westernblot)测定CD14mRNA和蛋白的表达,ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量。结果LBP抑制肽显著抑制LPS刺激后U937细胞CD14的mRNA与蛋白表达,同时也抑制了TNFα的分泌,较LPS组有显著差异。结论LBP抑制肽通过抑制由CD14介导的LPS信号跨膜转导和TNFα的分泌,对LPS所致疾病如脓毒血症、急性肺损伤可能有潜在的治疗作用。

结肠腺癌中缺氧诱导因子-1α和基质金属蛋白酶-14表达及与微血管密度的关系

目的检测结肠腺癌中缺氧诱导因子(HIF)-1α和基质金属蛋白酶(MMP)-14的表达,观察二者在不同临床病理特征中的表达及与微血管密度(MVD)的关系。方法 103例结肠腺癌作为观察组,30例正常结肠黏膜组织作为对照组。采用免疫组化方法检测两组中HIF-1α、MMP-14和CD34的表达。结果观察组中HIF-1α、MMP-14表达的阳性率明显高于对照组,观察组中CD34标记的MVD明显高于对照组。观察组中HIF-1α、MMP-14的阳性率、MVD值与浸润深度和淋巴结转移相关,MVD值与肿瘤的最大径密切相关。相关分析显示HIF-1α和MVD、MMP-14和MVD之间均呈正相关。结论结肠腺癌中HIF-1α和MMP-14高表达可以促进肿瘤的形成和进展,二者可能对肿瘤间质的血管生成有一定的促进作用。

基质金属蛋白酶-14和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-14(matrix metalloproteinase-14,MMP-14)和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extra-cellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中的表达及其与临床病程的关系。方法用免疫组织化学SP法分别检测39例Rb中MMP-14及EMMPRIN的表达;用LEICA IM 50型全自动医学图像分析系统测量其平均灰度值,比较不同临床和病理阶段Rb中表达MMP-14和EMMPRIN的差异及二者阳性表达之间的关系。结果39例Rb中MMP-14阳性表达34例,占87.18%;EMMPRIN阳性表达33例,占84.62%;青光眼期Rb中MMP-14和EMMPRIN的表达明显高于眼内期(P<0.01及P<0.05),眼外期二者表达明显高于青光眼期(P<0.01及P<0.05);视神经浸润组Rb中MMP-14和EMMPRIN的表达明显高于无视神经浸润组(P<0.01及P<0.05);Rb中MMP-14和EMMPRIN的阳性表达水平呈密切相关(P<0.01)。结论MMP-14及EMMPRIN的表达水平可能与Rb的浸润转移有关,二者共同促进Rb的浸润转移。

维甲酸诱导蛋白在消化系统恶性肿瘤中的研究进展

2020年全球癌症统计报告显示,消化系统恶性肿瘤发病率与死亡率均较高,但消化系统恶性肿瘤发生发展机制仍然未明确。维甲酸诱导蛋白(Retinoic acid-induced protein, RAI)是一类由维甲酸诱导的蛋白,与消化系统恶性肿瘤的增殖、侵袭、迁移关系密切,RAI系列蛋白在消化系统肿瘤中的表达水平与临床预后相关,过表达或敲低RAI蛋白可以影响消化系统恶性肿瘤对于靶向药物治疗的敏感性,RAI蛋白可能是消化系统肿瘤发生发展密切相关的特异性靶蛋白。本文就RAI蛋白在消化系统恶性肿瘤发生发展中的作用及相关机制等进行综述,为疾病早期诊断、治疗及预后评估提供一定的参考。

三七总皂苷抗心肌细胞肥大与成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14的关系

目的研究三七总皂苷(panax notoginseng saponin,PNS)抗心肌细胞肥大是否与成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(fibroblast growth factor-inducible 14,Fnl4)的表达变化相关。方法分离原代新生大鼠心肌细胞,去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)处理原代细胞建立心肌细胞肥大模型。鬼笔环肽染色观察细胞形态,实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测肥大相关基因和Fn14 m RNA表达水平,Western blot检测Fn14蛋白表达水平。结果与对照组比较,NE处理组细胞表面积增大、细胞肥大相关基因m RNA表达水平明显升高,Fn14 m RNA和蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与单独NE组比较,NE和PNS同时处理组的细胞表面积减小、肥大相关基因m RNA表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。PNS对Fn14 m RNA表达水平影响不大,但是却明显的促进Fn14蛋白表达(P<0.05)。结论 PNS能够抗NE诱导的心肌细胞肥大,同时能够影响Fn14的表达。PNS抗心肌肥大可能通过Fn14起作用。

基质金属蛋白酶-14与细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨基质金属蛋白酶（MMP）-14和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的临床意义,并分析二者的相关性。方法 选取2012年1月至2014年6月于我院口腔颌面外科诊治的69例OSCC患者作为OSCC组,同时选取43例口腔正常新鲜组织标本作为对照组。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测组织中的MMP-14及EMMPRIN mRNA的表达含量。结果 MMP-14mRNA、EMMPRIN mRNA在OSCC组中的相对表达量明显高于其在对照组中的相对表达量,差异具有统计学意义（t=8.198、9.624,P0.05）,在伴有淋巴结转移的患者中均明显升高（t=2.909、2.156,P〈0.05）;且MMP-14、EMMPRIN mRNA在Ⅲ~Ⅳ期、中低分化的OSCC中表达均明显升高,差异具有统计学意义（t=3.376、2.667、3.027、2.399,P〈0.05）;MMP-14与EMMPRIN mRNA表达含量间相关系数为r=0.821,二者呈正相关性（P〈0.01）。结论 OSCC组织中MMP-14和EMMPRIN的高表达状态均与肿瘤的病理分期、分化程度及淋巴结转移因素关系密切,两者的表达具有正相关性,提示MMP-14和EMMPRIN均参与了OSCC的浸润及转移过程,通过检测EMMPRIN及MMP-14mRNA表达含量可能有助于OSCC的病变程度及预后转归判断。

阿格蛋白2:RNA诱导基因沉默复合物的切片机

RNA干扰是生物体基因表达调节的一种重要方式,由RNA诱导的基因沉默复合物(RISC)来介导完成,这个复合物中除了微小RNA外,最新研究表明阿格蛋白2是其中的主要应答元件,它本身具有核酸内切酶活性,可以有效启动mRNA的剪切反应而实现对基因表达的调节,这个进展使我们对RNA干扰过程有了更为详尽的理解。

膀胱尿路上皮癌中缺氧诱导因子-1α、基质金属蛋白酶-10和-14的表达及相关性

目的应用免疫组化(SP)法检测膀胱尿路上皮癌中缺氧诱导因子(HIF)-1α、基质金属蛋白酶(MMP)-10和-14表达,探讨其临床意义。方法 59例膀胱尿路上皮癌患者为观察组,常规留取术后蜡块组织;13例膀胱切除后非肿瘤性的黏膜组织为对照组。采用SP法检测两组HIF-1α、MMP-10和-14的表达。结果观察组HIF-1α、MMP-10和-14表达明显高于对照组(P<0.05)。观察组HIF-1α、MMP-10和-14表达与肿瘤分级、脉管侵犯相关;HIF-1α表达与肿瘤增殖和肿瘤最大径相关。线性相关分析显示观察组HIF-1α和MMP-10、-14间呈正相关。结论膀胱尿路上皮癌中HIF-1α、MMP-10和-14表达升高是肿瘤性病变形成的促进因素。HIF-1α对调节细胞外基质的降解可能有一定作用。

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人白血病K562细胞的蛋白质组学研究

目的研究新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)诱导人白血病K562细胞分化作用的蛋白质组学机制。方法1×10-6mol·L-1的ATPR及ATRA分别作用于人白血病K562细胞48 h后,收集细胞并提取总蛋白,纯化之后使用胰蛋白酶酶解,固相萃取法脱盐,高分辨率液相色谱质谱联用仪检测肽段,使用Proteome Discoverer 1.2软件寻找出差异表达的蛋白质,利用生物信息学DAVID数据库、KEGG数据库、STRING数据库,分析鉴定出的差异蛋白质所具有的分子功能、所参与的生物学过程等信息。结果 ATPR组特异性的蛋白质鉴定出120个,ATRA组特异性蛋白质有143个,两者共有蛋白422个。DAVID分析显示ATPR特异性蛋白质主要参与39个生物学过程,包括蛋白质和大分子的代谢、蛋白质转运和定位等。KEGG分析发现,ATPR组特异性蛋白质主要参与新陈代谢过程、PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路等其他癌症相关信号通路。STRING蛋白相互作用网络分析显示ATPR特异性蛋白质,如EIF3A、EIF6、RPL3、RPL8、RPL13、RPL7A、RPL21、RPS3、RPS14、NACA、BTF3、NHP2L1、PPP2CA蛋白与其他≥10个相关蛋白存在直接相互作用关系。结论 ATPR组特异性中心蛋白质均参与对细胞生长增殖、诱导细胞分化和凋亡等过程的调控,这些蛋白质间的相互作用网络及特异性中心蛋白质是ATPR诱导K562细胞分化作用的可能机制。

家蚕丝氨酸蛋白酶BmHP14基因的克隆与表达模式分析

家蚕受到外源微生物侵染或损伤时,前酚氧化酶原级联反应中的起始丝氨酸蛋白酶会激活下游信号通路,最终产生黑色素。采用RACE技术,获得了家蚕前酚氧化酶原级联反应起始丝氨酸蛋白酶——血淋巴蛋白酶编码基因的全长cDNA序列,命名为BmHP14(GenBank登录号:JQ954757)。BmHP14 cDNA全长2 508 bp,开放阅读框为2 013 bp,编码670个氨基酸,预测蛋白质分子质量71 kD,等电点5.09,N端17个氨基酸预测为信号肽序列。多重序列比对显示BmHP14与烟草天蛾HP14的相似度很高,达到57%;分子进化树中二者也聚为一支。RT-PCR分析表明,BmHP14在家蚕5龄第3天幼虫脂肪体、马氏管、精巢、卵巢、表皮、血细胞、头部均有表达,其中以脂肪体中的表达水平最高。以黑胸败血芽孢杆菌、大肠杆菌、球孢白僵菌注射侵染家蚕5龄第3天幼虫,Real-time PCR检测显示在受到病菌侵染后,幼虫脂肪体中的BmHP14表达上调。Westernblotting检测结果显示,BmHP14在家蚕体液中以前体和成熟体的形式共同存在。研究结果提示,BmHP14是家蚕前酚氧化酶原级联反应信号通路中的关键酶。