小鼠黑色素细胞沉默及过表达色素上皮衍生因子对黑色素合成的影响

旨在研究色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)与黑色素合成调控因子之间的互作关系,探索PEDF对黑色素细胞活力和黑色素合成的调控作用,为研究动物毛色形成机制提供基础。本研究将PEDF siRNA及PEDF过表达载体分别转染小鼠黑色素细胞,对黑色素细胞活力、黑色素含量进行检测,采用qRT-PCR、Western blotting及细胞免疫荧光对PEDF、Wnt1、Wnt3α、MITF和β-catenin的表达和定位进行检测。黑色素细胞PEDF沉默后,黑色素细胞的细胞活力增强,黑色素含量增加,Wnt1、Wnt3α、MITF和β-catenin的mRNA和蛋白表达量升高;黑色素细胞PEDF过表达后,黑色素细胞活力减弱,黑色素含量减少,Wnt1、Wnt3α、MITF和β-catenin的mRNA和蛋白表达量降低。细胞免疫荧光结果显示:PEDF、Wnt1、MITF、β-catenin表达于黑色素细胞的细胞质;Wnt3α表达于黑色素细胞的细胞质和细胞膜。本研究证实:PEDF使黑色素细胞活力减弱,可通过下调促黑色素生成相关的因子Wnt1、Wnt3α、MITF和β-catenin,从而抑制黑色素的生成。

SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株的构建及筛选

目的:构建并筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌LM3细胞株,为研究SLC7A11基因的表达沉默对肝癌发生发展的影响奠定基础。方法:针对SLC7A11基因的不同部位合成3个siRNA的寡核苷酸片段,分别将其克隆到真核表达载体p GPU6/GFP/Neo中。利用脂质体转染法分别将质粒导入肝癌LM3细胞,24小时后观察细胞内GFP表达情况,并通过real-time PCR及Western blot的方法比较各组细胞SLC7A11基因mRNA和蛋白的表达水平,然后用G418对转染细胞进行筛选培养。结果:经酶切分析及测序验证,成功构建了靶向沉默SLC7A11基因的真核表达质粒p GPU6-SLC7A11-siRNA;通过real-time PCR及Western blot的方法验证,成功筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌LM3细胞株。结论:成功构建并筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株,为进一步研究SLC7A11基因表达沉默对肝癌细胞发生发展的影响奠定了基础。

siRNA介导多药耐药相关蛋白(MRP的表达沉默(英文)

利用pSIREN-RetroQ载体构建了3个沉默多药耐药相关蛋白(MRP1)基因表达质粒pSIREN-siRNAs.并通过限制性内切酶酶切鉴定和DNA测序鉴定,将截断的MRP1和全长MRP1cDNA分别克隆到真核表达载体pEGFP-N2和pcDNA3.1中,产生了pEGFP-MRP1T和pcDNA-MRP1表达质粒.质粒pEGFP-MRP1T分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞沉默MRP1T-GFP靶基因,pSIREN-siRNA1作为阴性对照.荧光显微镜下显示结果表明,与pSIREN-siRNA1相比,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3产生的siRNA能够有效沉默MRP1T-GFP融合蛋白的表达.为了沉默全长MRP1基因的表达,pcDNA-MRP1分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞.Western印迹和MTT分析表明,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能有效抑制190kDMRP1在HEK293细胞中的表达,而pSIREN-siRNA1则不能.pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能逆转MRP1转染HEK293细胞产生的多药耐药性.RNA二级结构预测结果分析表明,siRNA1靶序列mRNA局部自由能热动力参数ΔG低于siRNA2和siRNA3靶序列mRNA局部自由能热动力参数,siRNA1的GC含量和Tm值高于siRNA2和siRNA3.这些数据提示,siRNA和局部靶结构可能影响siRNA对MRP1 mRNA表达的沉默作用.

siRNA对多头绒泡菌丝氨酸/精氨酸蛋白激酶表达的沉默

SR蛋白激酶(serine/arginine protein-specific kinase,SRPK)是一类特异磷酸化剪接因子SR蛋白的激酶家族,可调节SR蛋白的选择型剪接,影响SR蛋白在核内的分布与定位,在pre-mRNA剪接调控上具有重要的作用。目前对于多头绒泡菌SRPK的功能仍不清楚。为了进一步研究PSRPK的功能,设计可转录小干扰RNA(siRNA)的寡核苷酸序列含U6启动子的载体pSIREN-RetroQ定向连接,构建了真核表达质粒pSIREN-PSRPK-1,pSIREN-PSRPK-2,pSIREN-PSRPK-3,pSIREN-PSRPK-4,pSIREN-PSRPK-5及对照质粒pSIREN-PSRPK-Neg。把编码PSRPK基因的cDNA与红色荧光蛋白表达载体pDsRed-N1重组,构建了表达PSRPK-红色荧光融合蛋白的表达质粒pP-SRPK-DsRed。将真核表达质粒和质粒pPSRPK-DsRed共转染HEK293细胞。转染后72h通过倒置荧光显微镜观察,结果表明,pSIREN-PSRPK-2和pSIREN-PSRPK-5可以有效沉默红色荧光融合蛋白的表达;进一步采用RT-PCR和Northern点杂交分析表明,pSIREN-PSRPK-2和pSIREN-PSRPK-5对红色荧光融合蛋白mRNA表达具有明显的抑制作用与倒置荧光显微镜下观察到的结果一致。这为进一步研究多头绒泡菌SRPK的功能奠定了实验基础。

干旱胁迫下过表达和沉默Z257 snoRNA基因对水稻耐旱性及表型的影响

研究旨在分析过表达和基因沉默水稻Z257 SnoRNA对水稻耐旱性、农艺性状和品质性状的影响,以转基因品系和野生型对照日本晴为研究材料,通过苗期干旱和抽穗期干旱处理的方法,分析Z257SnoRNA的作用方式。结果表明:过表达Z257 SnoRNA的转基因水稻品系GB日本晴的耐旱性要高于野生型对照日本晴和Z257 SnoRNA沉默的转基因水稻品系CM日本晴,因此Z257 SnoRNA基因应与水稻耐旱性相关;幼苗期干旱胁迫后GB日本晴的根系较野生型日本晴更为强壮,CM日本晴根系最弱;抽穗期干旱胁迫后GB日本晴的农艺性状要好于野生型对照日本晴,CM日本晴农艺性状最劣;GB日本晴较野生型对照日本晴和基因沉默品系CM日本晴有更好的品质,而沉默该基因的品系品质指标受影响最大,品质最劣。Z257 snoRNA与水稻耐旱性高度相关,可以减少干旱胁迫对水稻根系、农艺性状和品质性状的影响,因此该基因可以作为耐旱候选基因使用。

急性白血病ZO-1基因表达与甲基化调控关系的研究

目的探讨人急性白血病细胞系与正常骨髓细胞中ZO-1基因启动子区甲基化状态的差异及其与基因表达的关系。方法应用反转录聚合酶链反应的方法观察3种人白血病细胞株HL60、NK92、Molt4及正常人骨髓有核细胞中ZO-1基因的表达情况;应用甲基化特异性聚合酶链反应的方法分别检测其ZO-1基因启动子区的甲基化状态;应用去甲基化药物处理HL-60细胞,观察处理后ZO-1基因甲基化状态及基因表达的变化。结果在10例正常骨髓细胞均可发现ZO-1基因表达,而在3种白血病细胞系中未见其表达;正常骨髓细胞中ZO-1基因启动子区无甲基化,而在3种白血病细胞中呈完全甲基化;应用去甲基化药物处理HL-60细胞使其ZO-1基因启动子区去甲基化,可重新诱导ZO-1基因的表达。结论ZO-1基因的表达受甲基化状态调控,ZO-1基因可能与白血病发生相关。

siRNA沉默ASIC1a基因对佐剂性关节炎大鼠关节软骨细胞凋亡的影响研究

目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)技术诱导佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)大鼠关节软骨细胞中ASIC1a表达沉默对细胞凋亡的影响。方法:通过化学合成法合成特异性荧光短链ASIC1asiRNA-FAM,使用Lipo-fectamine 2000转染试剂盒将ASIC1asiRNA转染入关节软骨细胞,采用荧光显微镜、流式细胞术、实时荧光定量PCR(q-RT-PCR)及WesternBlot法检测siRNA转染效率及其对ASIC1amRNA和蛋白表达的抑制作用。同时采用An-nexin-V/PI流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:ASIC1asiRNA能成功转入软骨细胞,转染后AA大鼠关节软骨细胞中ASIC1amRNA表达显著低于对照组(P<0.01),最大抑制率为85.4%;Western Blot结果显示,转染特异性siRNA后ASIC1a蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)。Annexin-V/PI流式细胞术结果表明,与模型组相比,siRNA-3转染引起ASIC1a表达沉默后AA大鼠软骨细胞凋亡明显减少。结论:siRNA介导的AA大鼠关节软骨细胞ASIC1a表达沉默模型是研究酸敏感离子通道对软骨细胞代谢影响的可靠模型,siRNA-3转染对胞外酸化刺激条件下AA大鼠关节软骨细胞凋亡的保护作用可能与其调节的表达有关。

NPM异常表达对肿瘤细胞周期调控作用的研究进展

细胞周期为母细胞分裂为2个子细胞并且遗传物质均等分配的一个过程。核仁磷酸蛋白(NPM)是一类穿梭于核仁、核质和胞质的多功能蛋白质,与细胞周期密切相关,可通过多种信号通路调节细胞增殖和凋亡,在肿瘤的发生发展中起着重要作用。文章主要阐述NPM异常表达,包括基因突变、过表达和沉默表达等3种形式对细胞增殖或凋亡的影响,以及对肿瘤发生发展的作用。

过表达或沉默微小RNA-146a对人CD19^(+)B淋巴细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究微小RNA-146a (miRNA-146a)过表达或沉默表达后对人CD19^(+)B淋巴细胞增殖、凋亡、活化及靶基因白细胞介素受体相关激酶1(IRAK1)的影响。方法 将人CD19^(+)B淋巴细胞随机分为空白组(正常培养)、模拟物对照组(转染mimics)、miRNA-146a-5p模拟物组(转染miRNA-146a-5p-mimics)、抑制物对照组(转染inhibitors)、miRNA-146a-5p抑制物组(转染miRNA-146a-5p-inhibitors)。将混合后的miRNA/lipofectamin RNAiMAX复合物转染到各组细胞培养板孔中。用细胞计数-8(CCK-8)法检测细胞的增殖情况;用流式细胞仪检测细胞凋亡率、活化及分化情况;用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞miRNA-146a表达及其靶基因IRAK1表达水平。结果 空白组、模拟物对照组、miRNA-146a-5p模拟物组、抑制物对照组、miRNA-146a-5p抑制物组的增殖率分别为(100.00±0.00)%、(105.38±11.30)%、(104.50±18.09)%、(97.63±14.44)%和(103.13±13.50)%;凋亡率分别为(7.41±1.36)%、(7.12±0.52)%、(7.66±0.11)%、(7.54±0.61)%和(7.25±0.10)%,各组B淋巴细胞的增殖率和凋亡率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);CD23+细胞比例分别为(18.69±0.77)%、(19.09±0.95)%、(24.06±1.89)%、(20.25±0.48)%和(15.41±0.55)%;CD80+细胞比例分别为(31.03±0.58)%、(31.47±0.58)%、(43.22±0.37)%、(32.42±0.58)%和(24.86±0.83)%;IRAK1表达水平分别为1.02±0.21、1.08±0.21、0.51±0.08、1.03±0.08和1.68±0.36;miRNA-146a表达水平分别为1.03±0.28、1.03±0.41、2.25±0.52、1.07±0.24和0.46±0.12。上述指标,miR-146a-5p模拟物组、miR-146a-5p抑制物组与空白组比较,miR-146a-5p模拟物组、miR-146a-5p抑制物组与模拟物对照组比较,抑制物对照组、miR-146a-5p抑制物组与miR-146a-5p模拟物组比较,miR-146a-5p抑制物组与抑制物对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 miRNA-146a可升高CD23+、CD80+细胞比例,促进人CD19^(+)B淋巴细胞的活化和分化,下调IRAK1表达水平。

MeCP2特异性shRNA真核细胞表达质粒的构建与鉴定

目的构建MeCP2特异性SiRNA表达质粒pSilence-MeCP2。方法根据人MeCP2mRNA序列设计作用靶序列,化学合成两条互补的DNA寡核苷酸链,该序列中包含靶序列正义链、反义链,两者间的连接序列及与质粒相匹配的酶切位点序列,连接质粒后转化感受态细胞(E.Coli),使其在大肠杆菌内大量复制,提取质粒,PCR鉴定。结果合成的寡核苷酸序列与要求的序列完全相符,且以正确的方向插入。结论成功构建两个MeCP2特异性SiRNA表达质粒psilence-MeCP2/Ⅰ和psilence-MeCP2/Ⅱ。

SLC7A11基因ShRNA表达载体的构建及喉癌稳定细胞株的筛选

目的:构建ShRNA沉默SLC7A11基因,并转染喉癌细胞株,为研究SLC7A11基因在喉鳞状细胞中作用提供基础。方法:针对SLC7A11基因构建3个表达特异性的ShRNA的真核表达载体,通过与包装质粒共转染293T细胞包装慢病毒。将病毒感染喉癌UMCC-5和Hep-2细胞,48h后加入puromycin抗生素进行筛选细胞3代以上,使用荧光显微镜观察筛选后的稳定表达对应shRNA细胞,直至无抗性细胞全部去除。通过RT-PCR及Westernblot的方法比较实验组及空白对照的各组细胞SLC7A11基因mRNA和蛋白的表达水平。结果:筛选后的喉癌UMCC-5和Hep-2细胞中全部表达荧光标签,暗示ShRNA-SLC7A11成功感染喉癌细胞系内,然后使用RT-PCR及Westernblot检测,两组喉癌细胞中发现Sh-SLC7A11转染后SLC7A11mRNA水平及蛋白的含量,明显低于Sh-CTRL组(p<0.05),结果显示,与空载质粒组相比,ShRNA慢病毒载体可有效沉默SLC7A11在UMCC-5和Hep-2细胞系中的表达。结论:成功构建并筛选出ShRNA-SLC7A11基因表达的喉癌细胞株,为进一步研究SLC7A11基因在喉癌中的作用奠定了基础。

Bcl2促进UMR-106细胞BMP-2、OPG表达及补肾健脾活血方对其影响

目的基于构建Bcl2沉默和过表达腺病毒观察Bcl2对成骨细胞骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)蛋白的调节作用及补肾健脾活血方对其影响。方法将培养的UMR-106细胞分为空载腺病毒组(沉默Bcl2空载腺病毒NC-bcl2,过表达Bcl2空载腺病毒WT-bcl2)、Bcl2腺病毒组(沉默Bcl2腺病毒sh-bcl2,过表达Bcl2腺病毒Ad-bcl2),空载腺病毒+空白血清组(NC-bcl2,WT-bcl2)、空载腺病毒+补肾健脾活血方含药血清组(NC-bcl2+ME,WT-bcl2+ME)、腺病毒+空白血清组(sh-bcl2,Ad-bcl2)、腺病毒+补肾健脾活血方血清组(sh-bcl2+ME,Ad-bcl2+ME),用RT-q PCR检测Bcl2、OPG mRNA的变化、应用免疫印迹(Western Blot)检测Bcl2、OPG、BMP-2的变化。结果 (1)荧光倒置显微镜观察包装腺病毒转染UMR-106细胞;(2)在正常培养基中,与NC-bcl2比较,sh-bcl2可以降低Bcl2、OPG、BMP-2蛋白的表达(P均<0.05),与WT-bcl2比较,Ad-bcl2可以提高Bcl2、OPG、BMP-2蛋白的表达(P均<0.05);(3)与NC-bcl2比较,RTq PCR显示sh-bcl2可以降低Bcl2 mRNA的表达,但OPG mRNA无统计学意义;(4)在大鼠血清干预中,与空载腺病毒比较,补肾健脾活血方含药血清均可以增加BMP-2、OPG蛋白表达(P均<0.05);在sh-bcl2干预的细胞中,补肾健脾活血方含药血清提高BMP-2、OPG蛋白的表达(P均<0.05);在Ad-bcl2干预的细胞中,中药干预后,BMP-2、OPG未见明显变化。结论 Bcl2可以影响BMP-2、OPG蛋白的表达,补肾健脾活血方可能通过作用于Bcl2影响成骨细胞成骨相关蛋白的表达。

维生素对人类基因表达调控的研究

本文综述了维生素对人类基因表达与沉默的调控以及相关代谢机制的初步研究,并介绍了人体摄入维生素A、B、C、D、E等对部分基因表达产生的重要影响。

ATM基因与胰腺导管腺癌发病及放疗增敏研究进展

DNA损伤促修复基因ATM基因在保持机体DNA的完整性及稳定性方面起着重要作用,是重要的抑癌基因。ATM基因在胰腺导管腺癌(PDAC)的发病中同样扮演着重要的角色,在PDAC组织标本中观察到ATM基因缺失或沉默表达的概率显著升高。ATM基因的缺失或沉默表达可促使正常胰腺导管组织中的上皮-间质转化(EMT),EMT被认为是PDAC的初始病变;另外,ATM基因的缺失或沉默表达,其相关信号通路中的p53和Mdm2基因将呈现过表达,与较短的总体生存期显著相关。同时,ATM基因被认为是胰腺癌放疗的潜在靶点,通过抑制ATM基因能显著提高胰腺癌细胞对放射线的敏感性,值得开展下一步的临床研究。

HLA-A2表达沉默的MSCs对兔桡骨缺损修复的影响

目的探讨沉默人白细胞抗原-A2(HLA-A2)基因后的骨髓间充质干细胞(MSCs)对兔桡骨缺损修复的影响。方法将HLA-A2沉默后的MSCs经体外诱导成骨后,与羟基磷灰石(HA)复合培养,形成MSCs/HA复合体,并植入骨缺损中。将日本大耳白兔24只分为2组:HLA-A2沉默后的MSCs/HA复合体修复桡骨缺损为实验组(n=12),自体MSCs/HA复合体修复桡骨缺损为对照组(n=12)。于术后2、4、8周比较两组饮食与伤口的愈合情况、X线检测、HE染色结果,综合评价HLA-A2沉默后的MSCs/HA复合体对桡骨缺损修复的影响。结果实验组和对照组的伤口无明显渗出、红肿,愈合好;X线结果显示,2、4周骨缺损处有纤维骨痂形成,8周骨缺损处密度增高,骨痂形成;两组细胞钙结节数量、X线评分、组织学评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HLA-A2沉默后的MSCs免疫原性低,不影响其成骨能力及骨缺损的愈合,为同种异体骨缺损修复提供了新的依据。

RNA干扰用siRNA的体外转录合成

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)作为一种特异性沉默基因表达的方法,正在成为研究基因功能、胚胎发育及病毒性疾病治疗的重要工具,而获得符合干扰要求的短双链干扰RNA(smallinterferenceRNA,siRNA)是进行RNA;研究的首要步骤。本研究建立了体外转录合成siRNA方法,并用其生成的siRNA干扰鸡成纤维细胞外源绿荧光蛋白(GFP)基因和内源3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的表达。结果显示,siRNA能特异性降低鸡成纤维细胞中内外源基因的表达。本实验认为这种以DNA为模板体外转录合成siRNA方法操作简单、成本低、产物得率高,值得从事RNA研究者参考借鉴。

银屑病中miRNA的研究进展

银屑病是一种慢性的炎症性皮肤病，其与遗传、免疫和感染等多种因素相关。在组织病理上以表皮角质形成细胞增殖加速、细胞分裂周期和表皮更替时间缩短为重要特点。miRNA属于一类长约19～24个核苷酸的非编码RNA，并广泛存在于从细菌、真菌到人类的各生命体中。其通过招募RNA干扰途径中的蛋白组分或与染色体重排相关的蛋白因子到启动子区域抑制翻译，导致表达沉默，从而发挥控制基因表达的作用。近年来MicmRNA（miRNA）对于银屑病诊断治疗的研究越来越受到人们的关注。

‘法兰地’草莓LDOX基因的克隆及其过表达与沉默载体的构建

花色素苷是草莓果实的主要呈色物质,无色花色素双加氧酶(LDOX)是花色素苷合成途径中的关键酶。为探究LDOX基因在草莓花色素苷合成途径中的功能特性,构建‘法兰地’草莓LDOX基因的过表达与沉默载体。本试验用RT-PCR方法克隆出‘法兰地’草莓LDOX基因的CDS序列(1 152 bp)及干扰片段(468 bp),并成功用植物表达载体pRI101-An-EGFP及干扰载体pK7GWIWG2(Ⅱ)构建了过表达载体及沉默载体,同时对LDOX基因序列进行了生物信息学分析。经农杆菌介导瞬时转化后,可以观察到绿色荧光蛋白,表明过表达载体及沉默载体已成功转染草莓果实。qRCR验证表明,相比对照组果实,LDOX基因过表达的草莓果实基因表达量增加了3.7倍,沉默果实下降了70%,表明LDOX基因过表达与沉默成功。本研究为进一步探究LDOX基因的功能特性提供指导。

CARM1维持羊水干细胞干性的机制

背景:研究表明,CARM1催化的组蛋白H3R17/R26的甲基化修饰对于胚胎干细胞干性的维持起着非常重要的作用,但其在羊水干细胞干性维持中的作用及机制目前尚不明确。目的:初步探讨CARM1在维持羊水干细胞干性中的作用及其分子机制。方法:分离、培养人妊娠晚期羊水干细胞,RT-PCR鉴定干细胞标志物及CARM1基因的表达。利用CARM1的两条shR NA慢病毒表达载体,沉默羊水干细胞中CARM1基因的表达。RT-qP CR检测CARM1基因的表达沉默效率,Western blot检测组蛋白H3R17的甲基化水平。RT-qP CR检测干细胞标志物OCT4,SOX2和NANOG基因的表达水平。结果与结论:(1)人妊娠晚期羊水干细胞能够表达干细胞标志物,包括OCT4、SOX2、Nanog和KLF4,并表达CARM1基因;(2)CARM1的两条shR NA均能够有效沉默CARM1基因的表达;(3)CARM1表达沉默后,羊水干细胞中组蛋白H3R17的甲基化水平降低,OCT4和SOX2的表达也降低,而NANOG的表达没有发生变化;(4)结果表明,CARM1可能通过调控OCT4和SOX2基因的表达,进而起到维持羊水干细胞干性的作用。

沉默NLRP3基因对促炎剂诱导大鼠脑微血管内皮细胞表达炎症因子的影响研究

目的研究沉默NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NOD-like receptor family,pyrin domain containing protein 3,NLRP3)基因对大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cell,BMEC)经促炎剂脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)诱导产生炎症因子的影响,及NLRP3炎症小体信号通路是否在BMEC经促炎剂作用形成的脑小血管病细胞模型中发挥作用。方法体外提取雄性Wistar大鼠BMEC并鉴定内皮细胞的形态和纯度。将正常培养的BMEC分为空白对照组和LPS+ATP组,利用蛋白质印迹法和实时聚合酶链反应检测NLRP3炎症小体及下游炎症因子胱天蛋白酶(Caspase)-1的表达,采用独立样本t检验进行组间比较;采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)分子对BMEC内的特定基因NLRP3进行沉默,将siRNA NLRP3和siRNA质粒阴性对照分别转染BMEC后,再将转染后的细胞分为4组,即siNC组(未沉默目的基因,不加促炎剂)、siNLRP3组(沉默目的基因,不加促炎剂)、siNC+LPS+ATP组(未沉默目的基因,加促炎剂)、siNLRP3+LPS+ATP组(沉默目的基因,加促炎剂),利用蛋白质印迹法和实时聚合酶链反应检测各组NLRP3和Caspase-1的表达,采用析因设计的方差分析进行组间比较。结果大鼠BMEC分离培养24 h后脑微血管段呈“串珠状”,48 h后“岛屿状”细胞团形成,72 h后“铺路石”样单层细胞贴壁生长,后细胞逐渐密集达汇合度80%。免疫荧光染色检测BMEC阳性率达96%。在正常培养的细胞中,LPS+ATP组NLRP3和Caspase-1的蛋白及mRNA表达较空白对照组升高(P<0.05)。在RNA干扰培养的细胞中,siNLRP3组较siNC组、siNLRP3+LPS+ATP组较siNC+LPS+ATP组NLRP3、Caspase-1的蛋白及mRNA表达量均降低(P<0.05),siNC+LPS+ATP组较siNC组、siNLRP3+LPS+ATP组较siNLRP3组NLRP3、Caspase-1的蛋白及mRNA表达量均升高(P<0.05);对于NLRP3、Caspase-1的mRNA相对表达量,给予转染质粒和促炎剂干预的交互效应有统计学意义(P<0.05)。结论促炎剂LPS和ATP共同诱导能够促进大鼠BMEC中NLRP3和Caspase-1的释放。沉默NLRP3基因表达能够降低促炎剂的诱导作用。NLRP3炎症小体信号通路可能在大鼠BMEC经促炎剂作用形成的脑小血管病细胞模型中发挥作用。