瑞芬太尼对BV⁃2小胶质细胞沉默调节蛋白2及炎症因子的影响

目的探讨瑞芬太尼对BV⁃2小胶质细胞沉默调节蛋白2(silent information regulator 2,SIRT2)及炎症因子的影响。方法将培养的BV⁃2小胶质细胞分为4组(每组1孔):空白对照组(C组)、瑞芬太尼10μmol/L组(R1组)、瑞芬太尼50μmol/L组(R2组)、瑞芬太尼100μmol/L组(R3组),待细胞基本贴满板底后,R1组、R2组、R3组分别将培养液更换为单纯DMEM/F12培养液配置的瑞芬太尼2 ml(R1组瑞芬太尼10μmol/L、R2组瑞芬太尼50μmol/L、R3组瑞芬太尼100μmol/L),孵育2 h。另取培养的BV⁃2小胶质细胞分为4组(每组1孔):空白对照2组(C2组)、15 min组(T1组)、1 h组(T2组)、2 h组(T3组),待细胞基本贴满板底后,T1组、T2组、T3组将培养液更换为单纯DMEM/F12培养液配置的100μmol/L瑞芬太尼2 ml(T1组刺激15 min、T2组刺激1 h、T3组刺激2 h)。Western blot法检测各组细胞SIRT2、离子钙接头蛋白1(ionized calcium binding adaptor molecule 1,Iba1)水平,ELISA法检测各组细胞TNF⁃α、IL⁃1β水平。结果与C组比较:R1组、R2组、R3组Iba1、IL⁃1β、TNF⁃α增加(P<0.05),SIRT2水平降低(P<0.05)。与R1组比较:R2组、R3组Iba1、IL⁃1β水平增加(P<0.05),R3组SIRT2水平降低、TNF⁃α水平增加(P<0.05)。与R2组比较:R3组SIRT2水平降低(P<0.05)。与C2组比较:T1组、T2组、T3组Iba1、IL⁃1β、TNF⁃α水平增加(P<0.05),SIRT2水平降低(P<0.05)。与T1组比较:T2组、T3组Iba1、IL⁃1β、TNF⁃α水平增加(P<0.05),SIRT2水平降低(P<0.05)。与T2组比较:T3组SIRT2水平降低(P<0.05),IL⁃1β、TNF⁃α水平增加(P<0.05)。结论瑞芬太尼可通过剂量依赖性和时间依赖性方式使BV⁃2小胶质细胞中的Iba1和炎症因子的表达显著增加,并显著抑制SIRT2表达,从而激活小胶质细胞。

烟酰胺磷酸核糖基转移酶及沉默信息调节因子2同源蛋白1在乳腺癌组织中的表达及与患者临床病理特征的关系

目的:探讨在乳腺癌组织中烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)及沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT-1)的表达率及与患者临床病理特征的关系。方法:选取手术成功切除乳房的381例乳腺癌患者为研究对象,均随访5年或随访至患者死亡,采用免疫组织化学方法检测三阴性乳腺癌患者、非三阴性乳腺癌患者NAMPT及SIRT-1的蛋白表达,并分析其与临床病特征的关系及NAMPT表达与SIRT-1表达的关系,分析NAMPT、SIRT-1表达与临床特征之间的相关性。结果:三阴性乳腺癌患者NAMPT高表达率高于非三阴性乳腺癌患者(P<0.05);年龄≥56岁、有淋巴结转移、无病生存期<55个月的乳腺癌患者NAMPT高表达率高于年龄<56岁、无淋巴结转移、无病生存期≥55个月的乳腺癌患者(均P<0.05);有淋巴结转移、无病生存期<55个月的乳腺癌患者SIRT-1高表达率高于年龄<56岁、无病生存期≥55个月的乳腺癌患者(均P<0.05);NAMPT高表达的乳腺癌患者SIRT-1高表达率高于SIRT-1低表达率(P<0.05),乳腺癌患者NAMPT、SIRT-1表达与淋巴结转移、无病生存期呈正相关(r=0.079、0.505;0.462、0.497,P<0.05)。结论:NAMPT在三阴性乳腺癌中表达上调,NAMPT可影响SIRT-1的表达,同时年龄可影响NAMPT及SIRT-1的表达,且两者高表达预示患者可能出现淋巴结转移、预后差。

沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)与阿尔茨海默病研究进展

沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)激动可通过抑制β淀粉样蛋白沉积、tau蛋白磷酸化、炎症反应,调节突触可塑性,以及与Akt/蛋白激酶B通路共同作用,改善阿尔茨海默病(AD)的认知功能障碍。该文就SIRT1与AD研究进展进行综述。

沉默信息调节因子2同源蛋白1在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义

目的研究沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法和组织芯片技术检测88例甲状腺乳头状癌组织中SIRT1的表达,分析SIRT1蛋白的表达情况及其与甲状腺乳头状癌临床病理特征的关系。结果SIRT1阳性染色主要集中在细胞核中,呈黄色或者棕色颗粒。根据免疫组织化学染色评分,88例甲状腺乳头状癌组织中SIRT1阳性率为48.9%。χ~2检验结果显示,SIRT1表达与颈部淋巴结转移、TNM分期显著相关(P<0.05),SIRT1表达与年龄、性别、肿瘤大小、癌灶多少、甲状腺包膜浸润不相关(P>0.05)。Logistic回归分析显示,SIRT1阳性是甲状腺乳头状癌颈部淋巴结转移的独立危险因素(P<0.05)。结论 SIRT1可能参与甲状腺乳头状癌的发生发展和颈部淋巴结转移,并可能成为甲状腺乳头状癌颈部淋巴结转移的治疗靶点。

顺铂耐药宫颈癌细胞中沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1的表达及其对细胞增殖的影响

目的探讨顺铂(DDP)耐药宫颈癌细胞中沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)的表达及其对细胞增殖的影响。方法将宫颈癌HeLa和SiHa细胞分别分为耐药组和敏感组。敏感组细胞不做任何处理;耐药组细胞在培养过程中逐步增加培养液中顺铂的浓度,建立对对顺铂耐药的HeLa/DDP和SiHa/DDP细胞系。再将HeLa/DDP和SiHa/DDP细胞系分为HeLa/DDP-NC组、HeLa/DDP-siRNA组以及SiHa/DDP-NC组、SiHa/DDP-siRNA组,并分别转染相应的siRNA。检测耐药组和敏感组细胞SIRT1蛋白及mRNA表达水平;检测DDP-NC组与DDP-siRNA组细胞SIRT1蛋白及mRNA表达水平及增殖情况。结果耐药组HeLa及SiHa细胞SIRT1蛋白及mRNA表达水平均高于敏感组(均P<0.05)。DDP-NC组HeLa及SiHa细胞增殖水平高于DDP-siRNA组(均P<0.05)。结论顺铂耐药宫颈癌细胞SIRT1表达水平升高,抑制SIRT1表达可以抑制耐药细胞的增殖。

沉默交配型信息调节因子2同源蛋白3在肿瘤中的双重作用

沉默交配型信息调节因子2同源蛋白3(SIRT3)是定位于线粒体的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖的去乙酰化酶,能够系统地调控线粒体蛋白的乙酰化水平,在调控活性氧水平、调节线粒体代谢、维持线粒体动态平衡等方面起着至关重要的作用。因此,SIRT3在癌症发生和发展中的作用也受到了学者们的广泛关注。研究发现,在不同的癌症类型中,SIRT3扮演着促癌或抑癌的双重角色,这与癌症的个体差异及SIRT3所调控的靶点不同有关。本文主要探讨SIRT3的生物学功能及其在不同癌症中的作用机制,为SIRT3作为肿瘤精准化治疗的潜在靶点提供理论参考。

SIRT2通过组蛋白H4K8去乳酸化修饰调控巨噬细胞趋化功能

目的·探讨沉默信息调节因子2(silent information regulator 2,SIRT2)通过组蛋白H4第8位赖氨酸(H4K8)去乳酸化修饰对早期感染后巨噬细胞免疫表型的调节作用及相应机制。方法·使用佛波醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导人单核细胞白血病THP-1细胞,使其分化为具有巨噬细胞特性的人血单核细胞株(PMA-primed THP-1,pTHP-1),再以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激建立巨噬细胞感染模型。将未经LPS处理的巨噬细胞(pTHP-1)设为对照(CTRL)组,经过LPS处理的巨噬细胞设为感染(LPS)组。通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测巨噬细胞中组蛋白乳酸化各位点修饰水平、组蛋白乙酰化各位点修饰水平及SIRT2蛋白水平;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测2组间糖酵解限速酶乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)、肝脏磷酸果糖激酶(phosphofructokinase liver type,PKFL),糖酵解调剂因子低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α),以及Sirtuin家族基因和HDAC家族基因表达水平;通过Transwell方法检测巨噬细胞趋化能力;使用慢病毒包装及细胞感染方法建立SIRT2过表达细胞系;使用RNA测序技术(RNA sequencing,RNA-seq)与染色质免疫共沉淀测序技术(chromatin immunoprecipitation sequencing,ChIP-seq)交互分析方法对组蛋白H4第8位赖氨酸乳酸化(lactylation of histone H4 lysine 8,H4K8la)特异性结合的基因进行差异性分析及通路富集分析。结果·相较于CTRL组,LPS组巨噬细胞糖酵解上调,组蛋白H4K8位点乳酸化水平显著增加(P<0.05),而组蛋白其余位点乙酰化水平未见显著变化。所有已知的具有去乳酸化修饰功能的酶中,仅SIRT2在LPS处理后出现显著降低(P<0.05),且SIRT2过表达可显著抑制巨噬细胞中组蛋白H4K8位点的乳酸化水平(P<0.05),但不影响组蛋白H4K8位点的乙酰化水平(P>0.05)。ChIP-seq与RNA-seq交互分析发现,组蛋白H4K8位点乳酸化修饰可调控巨噬细胞趋化相关基因,并且巨噬细胞的趋化能力在SIRT2过表达、H4K8la修饰水平下调后显著下降(P<0.05)。结论·SIRT2可通过去修饰组蛋白H4K8位点乳酸化改变趋化相关靶基因表达,从而降低巨噬细胞趋化能力。靶向SIRT2及H4K8la修饰将有助于控制巨噬细胞介导的炎症反应。

SIRT2调控自噬的作用机制研究现状

沉默调节蛋白2(Sirtuin 2,SIRT2)是一种能够调节蛋白质乙酰化修饰的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖性去乙酰化酶,是沉默信息调节因子(Sirtuins)家族成员之一,具有多种生物学功能,其在神经退化、细胞分化、葡萄糖和脂质代谢、肿瘤发生、细胞自噬等过程中均发挥调节作用。细胞自噬是一种通过清除异常蛋白或细胞器来维持机体稳态的保护机制,具有促进细胞更新和保持质量的作用。细胞自噬可分为3种主要形式,包括巨自噬、微自噬和分子伴侣介导的自噬,均通过溶酶体来对受损的细胞器、错误折叠和聚集的蛋白质及其他大分子物质进行降解或回收。其中,巨自噬研究最多,分为非选择性巨自噬(即常说的自噬)和选择性巨自噬。线粒体自噬是真核细胞中选择性去除或降解受损和多余线粒体的主要途径,也是SIRT2在细胞中主要调控的一种选择性巨自噬。作者主要综述了SIRT2在自噬及线粒体自噬上的调控作用及机制,以期为后续更深入地研究SIRT2在哺乳动物生理上的更多调控功能及其在各类疾病上的治疗作用提供参考和方向。

沉默信息调节因子2同源蛋白1与肿瘤

沉默信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1/sirtuin 1)为III型去乙酰化酶,依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)调控基因转录、细胞凋亡等一系列细胞功能。近年研究发现,SIRT1表达水平改变对于某些肿瘤具有很强的抑制作用,本文从SIRT1的基本结构以及在癌症中的研究现状和与癌细胞的侵袭与转移和凋亡机制两方面阐述SIRT1与肿瘤调节之间的关系。

SIRT2在小鼠1-细胞期受精卵中的表达和定位研究

目的:探讨沉默信息调节蛋白2(SIRT2)在小鼠1-细胞期受精卵的表达和定位。方法:利用qRT-PCR、Western blotting分别检测SIRT2在小鼠1-细胞期受精卵发育全过程中mRNA和蛋白表达谱;采用细胞免疫荧光法观察SIRT2和α-tubulin的共定位情况。结果:小鼠1-细胞期受精卵SIRT2 mRNA和蛋白表达变化趋势一致,均由G 1向G 2期过渡时表达水平升高;由G 2期向M期过渡时表达水平下降(P<0.05)。在G 2期向M期过渡过程中,SIRT2的定位由细胞质向细胞核转移,于M期中期进入细胞核并定位于纺锤体,在M期后期重新定位于细胞皮质。结论:SIRT2蛋白在小鼠1-细胞期受精卵中的表达呈细胞周期时相依赖性,在1-细胞期小鼠受精卵有丝分裂间期(G 1、S、G 2)中细胞质内表达增加,积累的SIRT2在某种条件下进入细胞核调节纺锤体微管动力学,在G 2/M过渡期发挥作用。

汉黄芩素调节SIRT1/Nrf2信号通路对子宫内膜异位症大鼠铁死亡的影响

目的探讨汉黄芩素(Wog)对子宫内膜异位症(EM)大鼠铁死亡的影响及其作用机制。方法构建EM大鼠模型,将SD大鼠分为空白组(CT组)、EM模型组(EM组)、Wog低剂量组(Wog L组)、Wog高剂量组(Wog H组)、Wog+沉默调节蛋白1(SIRT1)抑制剂(EX527)组。给药4周后,检测异位病灶体积,ELISA测定血清雌二醇(E2)、孕激素(P)、白介素-1β(IL-1β)、IL-6的含量,HE染色观察异位内膜组织病理损伤,普鲁士蓝染色检测铁离子聚集情况,铁离子比色法检测Fe^(2+)浓度,Western blot检测SIRT1、核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和铁蛋白轻链(FTL)蛋白表达水平。结果与CT组相比,EM组大鼠异位内膜组织腺体较少,大量炎性细胞浸润和铁离子沉积,异位病灶体积、E2、P、IL-1β、IL-6、Fe^(2+)水平升高,SIRT1、Nrf2、GPX4、FTL和SLC7A11蛋白表达水平下降(P<0.05);与EM组相比,Wog L、Wog H组异位内膜组织腺体增加,离子沉积少见,异位病灶体积、E2、P、IL-1β、IL-6、Fe^(2+)水平降低,SIRT1、Nrf2、GPX4、FTL和SLC7A11蛋白表达水平升高(P<0.05);与Wog H组相比,Wog+EX527组大鼠异位内膜组织炎性细胞浸润和铁离子沉积增加,异位病灶体积、E2、P、IL-1β、IL-6、Fe^(2+)水平升高,SIRT1、Nrf2、GPX4、FTL和SLC7A11蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论Wog可能通过激活SIRT1/Nrf2信号通路抑制EM大鼠铁死亡。

基于SIRT1/SOX2信号通路探究西黄丸抗乳腺癌作用及机制

[目的]基于沉默调节蛋白1(SIRT1)/性别决定区Y框蛋白2(SOX2)信号通路探究西黄丸抗乳腺癌作用及机制。[方法]将MDA-MB-231细胞分为对照组、西黄丸低剂量组(5 g/L)、西黄丸中剂量组(7.5 g/L)、西黄丸高剂量组(15 g/L)、SIRT1激活剂(SRT 1720)组(6μmol/L)、西黄丸高剂量+SRT 1720组(15 g/L+6μmol/L);CCK-8法和平板克隆实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell法检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、SIRT1、SOX2蛋白表达;体内移植瘤实验检测各组裸鼠肿瘤体积、质量及PCNA、MMP-2、MMP-9、SIRT1、SOX2蛋白表达。[结果]西黄丸可抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠体内移植瘤的生长,且呈剂量依赖性;SIRT1激活剂SRT 1720促进MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠体内移植瘤的生长;高剂量西黄丸加SIRT1激活剂组可以减弱高剂量西黄丸对MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠体内移植瘤的生长的抑制作用;同时西黄丸可呈剂量依赖性地抑制MDA-MB-231细胞及裸鼠移植瘤中SIRT1、SOX2蛋白表达,抑制SIRT1/SOX2信号通路活性,并通过降低PCNA、MMP-2、MMP-9表达来抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠体内移植瘤的生长。[结论]西黄丸可能通过抑制SIRT1/SOX2信号通路抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠体内移植瘤生长。

SIRT2沉默对胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究沉默信息调节蛋白2(SIRT2)对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测SIRT2在胃癌SGC-7901细胞和正常胃上皮GES-1细胞中的表达。采用RNA干扰技术处理SGC-7901细胞,SIRT2沉默组转染靶向SIRT2的干扰小RNA(SIRT2-siRNA1组、SIRT2-siRNA2组),阴性对照组转染SIRT2-si RNA阴性对照序列,空白对照组不转染。CKK-8法和平板细胞克隆形成实验检测SGC-7901细胞增殖, Transwell法检测SGC-7901细胞侵袭迁移能力,蛋白印迹检测SGC-7901细胞中SIRT2、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)和磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)蛋白表达。结果人胃癌细胞SNU-1、KATO III、SGC-7901中SIRT2m RNA和蛋白水平均高于正常胃上皮GES-1细胞(P<0.05)。转染SIRT2-si RNA的SGC-7901细胞中SIRT2m RNA和蛋白水平均低于阴性及空白对照组(P<0.05);转染SIRT2-si RNA后,SGC-7901细胞增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力均降低(P<0.05);转染SIRT2-siRNA后SGC-7901细胞中Akt、PI3K蛋白磷酸化程度显著下降(P <0.05)。结论 SIRT2在胃癌细胞中表达上调,沉默SIRT2可能通过调节PI3K/Akt通路抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,推测SIRT2可能作为潜在靶标应用于胃癌的基因治疗。

NLRP3炎性小体在治疗性浅低温后处理大鼠心肌缺血-再灌注中的作用

目的 分析NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体在治疗性浅低温(34℃)后处理的大鼠离体心肌缺血-再灌注模型中的作用并探讨其机制。方法 选择清洁级成年雄性SD大鼠60只,7~10周龄,体重250~300 g。采用随机数字表法将大鼠分为五组:空白对照组(S组)、心肌缺血-再灌注组(IR组)、34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注组(MH组)、34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注+3-TYP组(HT组)和34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注+3-TYP+MCC950组(HTM组),每组12只。S组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏180 min;IR组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min, 37℃灌注液再灌注120 min;MH组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min, 34℃灌注液再灌注120 min;HT组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,在灌注液中加入沉默信息调节因子2同源蛋白3(sirt3)抑制剂3-TYP后行34℃灌注液再灌注120 min;HTM组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,在灌注液中加入sirt3抑制剂3-TYP和NLRP3抑制剂MCC950后行34℃灌注液再灌注120 min。再灌注120 min后取离体心脏,采用ELISA法测定灌注后心脏漏液中IL-1β、IL-6浓度,Western blot法检测心肌组织中NLRP3和sirt3蛋白相对含量,1%氯化三苯基四氮唑染色计算心肌梗死面积,HE染色观察心肌病理变化。结果 与S组比较,IR组、MH组、HT组和HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显减慢,LVSP、dp/dt_(max)明显降低,LVEDP明显升高;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比明显升高(P<0.05);IR组、HT组和HTM组心肌组织中sirt3蛋白含量明显降低,NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05);MH组心肌组织中sirt3和NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05)。与IR组比较,MH组和HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显增快,LVSP、±dp/dt_(max)明显升高,LVEDP明显降低;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比明显降低(P<0.05);MH组心肌组织中sirt3蛋白含量明显升高,NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05);HTM组心肌组织中NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05)。与MH组比较,HT组再灌注30、60、90、120 min时HR明显减慢,LVSP、±dp/dt_(max)明显降低,LVEDP明显升高;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比、心肌组织中NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05);HT组和HTM组心肌组织中sirt3蛋白含量明显降低(P<0.05)。与HT组比较,HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显增快,LVSP、±dp/dt_(max)明显升高,LVEDP明显降低;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比、心肌组织中NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05)。结论 治疗性浅低温(34℃)可通过改善离体心脏血流动力学参数、降低IL-6、IL-1β浓度、心肌组织中NLRP3蛋白含量、心肌梗死面积百分比、改善心肌病理学改变,减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤,其机制可能与线粒体介导sirt3通路抑制炎性小体NLRP3的高表达有关。

电针联合天麻素对阿尔茨海默病大鼠海马CA 1区沉默信息调节因子2同源蛋白1和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1 ɑ表达的影响

目的:探讨电针联合天麻素治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组、天麻素组和针药联合组,每组10只。腹腔注射D-半乳糖联合双侧海马注射β淀粉样蛋白1-40制备AD大鼠模型。电针组和针药联合组给予"百会""大椎"、双侧"足三里"穴电针刺激,每次30min,1次/d,连续4周;天麻素组和针药联合组腹腔注射天麻素注射液,每日1次,连续4周。Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力;尼氏染色观察海马CA 1区神经元形态;免疫组织化学法检测各组大鼠海马CA 1区沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT 1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子(PGC-1ɑ)的表达。结果:Morris水迷宫结果显示,与正常组及假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),平台象限停留时间百分比、穿台次数降低(P<0.05);与模型组比较,电针与天麻素及联合使用均可降低AD大鼠的逃避潜伏期(P<0.05),提高平台象限停留时间百分比(P<0.05),增加穿台次数(P<0.05);针药联合组的效果优于电针组及天麻素组(P<0.05)。尼氏染色结果显示,与正常组及假手术组比较,模型组大鼠海马CA 1区神经元数量减少,排列紊乱;各治疗组CA 1区神经元数量较模型组明显增多,排列规则。与正常组及假手术组比较,模型组大鼠海马CA 1区SIRT 1和PGC-1ɑ阳性表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,电针组和天麻素组CA 1区SIRT 1和PGC-1ɑ阳性表达水平升高(P<0.05);针药联合组的表达水平高于电针组和天麻素组(P<0.05)。结论:电针与天麻素均能够改善AD大鼠的学习记忆能力,且电针联合天麻素的效果更为显著,提示其可能通过上调海马SIRT 1和PGC-1ɑ蛋白的表达,发挥对AD大鼠神经元的保护作用。

miR-455-3p调控sirt1表达对大鼠椎间盘髓核细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨miR-455-3p调控沉默信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,sirt1)表达对大鼠椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)细胞增殖及凋亡的影响。方法采用Ⅱ型胶原酶从大鼠腰椎椎间盘中分离NP细胞,并用甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)免疫荧光染色对其鉴定。NP细胞分成Ctrl组、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)组、IL-1β+NC inhibitor组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor+si-NC组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor+si-sirt1组,除Ctrl组外的五组细胞均使用10 ng/mL的IL-1β诱导NP细胞退变模型。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miR-455-3p及sirt1 mRNA水平;细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测增殖;JC-1染色检测线粒体膜电位;Hoechst染色检测凋亡;蛋白免疫印迹检测sirt1、增殖(PCNA、Ki67、Cyclin D1)和凋亡(Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 3)相关蛋白及CollagenⅡ、Aggrecan表达;双荧光素酶报告分析实验验证miR-455-3p与sirt1的靶向关系。结果大鼠椎间盘NP细胞被成功分离。与IL-1β组、IL-1β+NC inhibitor组比较,IL-1β+miR-455-3p inhibitor组miR-455-3p表达、凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3表达及Bax/Bcl-2比值下降,细胞活力、PCNA、Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、CollagenⅡ、Aggrecan表达升高(P<0.05)。miR-455-3p直接靶向负调控sirt1表达。干扰sirt1可逆转抑制miR-455-3p表达对NP细胞增殖、凋亡的影响。结论抑制miR-455-3p表达可通过靶向调控sirt1,抑制IL-1β诱导的NP细胞凋亡并促进NP细胞增殖。

大黄酸增加2型糖尿病大鼠肾组织SIRT1的表达

目的研究大黄酸对糖尿病大鼠肾组织沉默接合型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)表达的影响,探讨大黄酸对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用及可能机制。方法采用高糖高脂饮食联合链脲佐菌素(35 mg/kg体质量)诱导2型糖尿病大鼠模型,分为正常组,糖尿病组,低、中、高剂量(50、100、150 mg/kg)大黄酸治疗组及10 mg/kg吡格列酮对照组。灌胃给药,每日1次。16周末检测大鼠空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血肌酐(Scr)、24 h尿蛋白(24 h U-PRO);计算肾质量指数(KM/BM)、胰岛素抵抗指数;PAS染色光镜观察肾组织病理形态学的改变;病理图像分析系统分析平均肾小球面积(MGA)及平均肾小球体积(MGV);实时荧光定量PCR检测肾组织SIRT1 mRNA表达;Western blot法检测肾组织SIRT1蛋白表达。结果糖尿病大鼠肾组织SIRT1表达降低。与糖尿病组比较,各治疗组大鼠FPG、FINS、HOMA-IR、TG、TC、Scr、24 h U-PRO、肾质量指数、MGA、MGV显著降低,肾组织病理形态学明显改善;SIRT1 mRNA及蛋白表达显著增加;大黄酸高剂量组各指标改善较显著。相关性分析显示,SIRT1蛋白表达与24 h U-PRO、MGV呈显著负相关。结论糖尿病大鼠肾组织SIRT1表达降低,大黄酸可通过改善胰岛素抵抗和血脂紊乱,增加SIRT1的表达,改善糖尿病大鼠肾脏损害。

SIRT1信号通路对于骨代谢的调节作用

骨质疏松是一种以骨矿物含量下降、骨微细结构破坏为特征的骨骼疾病,其发病机制与骨骼系统衰老和能量代谢紊乱有关。沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(silent mating-type information regulator 2 homolog 1,SIRT1)是一类烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)依赖的去乙酰化酶,是生物体内细胞衰老、能量代谢和骨骼重塑3个重要生理过程的汇合点。SIRT1不仅能被单磷酸腺苷活化蛋白激酶[adenosine 5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]、c-Jun氨基末端激酶1(c-Jun N-terminal kinase 1,JNK1)和酪蛋白激酶2(casein kinase 2,CK2)等激酶激活,还能被白藜芦醇等小分子药物激活。这些激酶与药物均能影响骨代谢。且研究证实SIRT1信号通路也能直接调控骨代谢过程,但其中的具体调节机制尚不明确。该文就SIRT1的结构、功能和在骨代谢各个环节中的作用作一综述,并分析SIRT1信号通路作为骨质疏松治疗新靶点的潜力。

沉默信息调节蛋白2相关酶1预防早期血管老化及在高血压应用中的研究现状

早期血管老化是累及心血管疾病的渐进性病理过程。沉默信息调节蛋白2相关酶1(SIRT1)参与调控血管的发生发育,本文就SIRT1在预防早期血管老化中的作用及在高血压中的应用前景做一综述。

miR-217-5p在病毒性心肌炎患者血清中的表达变化及其对CVB3诱导的心肌细胞损伤影响

目的探讨微小RNA-217-5p(miR-217-5p)在病毒性心肌炎(VMC)患者血清中的表达变化及其对柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的心肌细胞损伤的影响。方法回顾性选取77例VMC患者为研究对象,同期77例健康体检者为对照。将大鼠H9c2心肌细胞分为Con组(未做任何处理)、CVB3组(含CVB3的DMEM处理)、CVB3+miR-217-5p组(H9c2细胞转染miR-217-5p模拟物后经含CVB3的DMEM处理)、CVB3+pcDNA-SIRT1组[H9c2细胞转染pcDNA-沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1后经含CVB3的DMEM处理)]、CVB3+miR-217-5p+si-SIRT1组(H9c2细胞转染miR-217-5p+si-SIRT1后经含CVB3的DMEM处理)。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-195-5p和SIRT1 mRNA在VMC患者及健康体检者血清中的表达水平;双荧光素酶报告实验验证miR-217-5p、SIRT1靶向关系;流式细胞术测定细胞凋亡率、Western blot检测细胞SIRT1、活化型半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase3)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8水平。结果miR-217-5p在病VMC患者血清中表达水平较健康体检者高,SIRT1 mRNA表达水平较健康体检者低(P<0.05)。miR-217-5p可靶向调控SIRT1蛋白的表达。与Con组相比,CVB3组心肌细胞中miR-217-5p表达水平、细胞凋亡率、cleaved-caspase3、Bax蛋白表达水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。与CVB3组相比,CVB3+anti-miR-217-5p组miR-217-5p表达水平、细胞凋亡率、cleaved-caspase3、Bax蛋白表达水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平降低,SIRT1、Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05);与CVB3组相比,CVB3+pcDNA-SIRT1组细胞凋亡率、cleaved-caspase3、Bax蛋白表达水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平降低,SIRT1、Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05);与CVB3+miR-217-5p组相比,CVB3+anti-miR-217-5p+si-SIRT1组细胞凋亡率、cleaved-caspase3、Bax蛋白表达水平、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平升高,SIRT1、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论miR-217-5p可能通过靶向调控SIRT1蛋白的表达进一步调控CVB3诱导的心肌细胞损伤。