反义寡核苷酸介导的miRNA沉默研究

miRNA是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,长度约为22个核苷酸,参与多种生理过程及多种疾病的发生、发展过程。miRNA沉默技术是研究miRNA生物学功能的重要工具,也为以miRNA为靶点的疾病诊断和治疗提供可能。多种化学修饰的反义寡核苷酸和相应的提呈系统被用于miRNA的研究。

共沉默miR-221-3p/222-3p表达抑制骨髓间充质干细胞增殖及促成软骨分化

背景:基于干细胞的组织工程技术作为治疗骨关节损伤修复的有效手段,具有广泛的应用前景。研究表明miRNA在调控干细胞向软骨分化过程中具有重要的作用。目的:探讨共感染慢病毒介导的反义miR-221-3p/222-3p(microRNA-221-3p,microRNA-222-3p)对人骨髓间充质干细胞成软骨分化的作用,为临床软骨损伤修复提供新的策略。方法:利用miRNA基因芯片技术筛选转化生长因子β3诱导人骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中不同阶段表达差异的miRNA,并利用荧光实时定量PCR(RT-q PCR)验证;构建慢病毒人反义miR-221-3p/222-3p载体(Lv-miR-221-3p-inhibition,Lv-miR-222-3p-inhibition)并共转染人骨髓间充质干细胞,空载体组(Lv-GFP)以及未转染组作为对照。利用CCK-8法检测沉默miR-221-3p/222-3p 6 d后细胞的增殖情况;通过番红O染色法、免疫组织化学方法以及RT-PCR验证各组软骨诱导21 d后软骨分化相关标志物的表达。结果与结论:构建的Lv-miRNA-221-3p/222-3p inhibition共转染人骨髓间充质干细胞,成功沉默了细胞中的miR-221-3p/222-3p表达水平;miRNA基因芯片与RT-q PCR验证结果显示miR-221-3p/222-3p在软骨分化后期表达明显降低;转染组与未转染组以及空载体组相比:1细胞增殖明显受到抑制。2番红O染色以及免疫组织化学显示软骨分化特征标志物硫酸软骨素以及Ⅱ型胶原表达增强。3RT-qPCR也证实硫酸软骨素以及Ⅱ型胶原的mRNA表达也明显上调。结果显示沉默人骨髓间充质干细胞miRNA-221-3p/222-3p,抑制了细胞增殖并促进了成软骨分化。

miRNA153反义核酸上调肺癌细胞对辐射敏感性的体外实验

目的探讨反义核酸沉默microRNA 153(miRNA153)对电离辐射杀伤肺癌细胞株的影响。方法利用脂质体转染miRNA153的反义核酸;使用60Co-γ射线照射肺癌细胞;使用CCK-8实验、软琼脂成集落实验(锚定非依赖性生长)和Trans-well实验检测mi RNA153反义核酸对电离辐射杀伤肺癌细胞的影响;RT-PCR和Western blot实验检测miRNA153的反义核酸对mi RNA153、其靶标蛋白PTEN以及细胞存活/凋亡耐受调控蛋白Survivin表达的影响。结果 CCK-8实验结果显示,中等剂量射线(4 Gy)照射能够杀伤肺癌细胞A549、H460、H1299和H358,下调mi RNA153的表达能够增强辐射对肺癌细胞的杀伤作用;软琼脂成集落和Transwell实验进一步证实mi RNA153的反义核酸能够上调辐射对A549细胞锚定非依赖性生长和侵袭的抑制作用。分子机制实验结果表明,mi RNA153的反义核酸能够显著降低mi RNA153的表达水平,提高肿瘤抑制因子PTEN并降低细胞存活因子Survivin的表达。结论降低miRNA153的表达能够上调辐射对肺癌细胞系的体外杀伤作用。

水稻病毒与其宿主miRNAs相互作用的研究进展

miRNAs(micro RNAs)是真核生物中一类大小约为21 nt,并具有调控功能的非编码小分子单链RNA。miRNAs能够调控水稻基因的表达,对水稻的发育和生理机能至关重要。miRNA沉默途径可以抵御水稻病毒的入侵,减小病毒侵染带来的危害。然而,一些病毒也会编码各种针对miRNA沉默途径的沉默抑制子来对抗这种机制。于是,miRNAs和水稻病毒之间就形成了一种抑制与反抑制的动态平衡体系。现对水稻病毒与其宿主miRNAs之间的相互作用进行了系统的阐述,以期深入理解水稻病毒与宿主相互作用的机制并为水稻病害的防治提供新的思路与方法。