沙冬青生物碱对MDCC-MSB1细胞增殖抑制与诱导凋亡的影响

采用体外细胞培养技术、噻唑蓝(MTT)还原法、透射电子显微镜观察及流式细胞技术检测梯度浓度沙冬青总生物碱对体外培养鸡马立克氏病肿瘤HDCC-MSB1细胞的增殖抑制及诱导凋亡的作用。结果显示,沙冬青生物碱可显著抑制HDCC-MSB1细胞增殖,且这种抑制具有剂量和时间效应关系。经沙冬青生物碱作用的HDCC-MSB1细胞培养样本中有明显的DNA低含量颗粒("亚G1期"峰),细胞周期各时相分布发生改变,细胞增殖在G1被阻滞,并进一步诱导HDCC-MSB1细胞凋亡。电子显微镜观察也表明,经沙冬青生物碱作用的HDCC-MSB1细胞培养样本中,大量HDCC-MSB1细胞凋亡。结果表明,沙冬青生物碱对HDCC-MSB1细胞增殖有显著抑制效应,其抑制机理为诱导HDCC-MSB1细胞凋亡。

沙冬青生物碱对MDCC-MSB1端粒酶活性和细胞凋亡的影响

采用单管法一步完成端粒重复序列扩增(TRAP)方法检测沙冬青总生物碱(50、100、150及200μg/mL)对体外培养的鸡马立克氏病肿瘤HDCC-MSB1细胞株作用前后端粒酶活性变化的影响,并采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期的改变。结果显示,沙冬青生物碱可显著抑制HDCC-MSB1细胞的端粒酶活性,且这种抑制有剂量和时间效应关系。同时,经沙冬青生物碱作用的HDCC-MSB1细胞培养样本中有明显的DNA低含量颗粒("亚G1期"峰),细胞周期各时相分布发生改变,细胞增殖在G1被阻滞。上述结果表明,沙冬青生物碱对HDCC-MSB1细胞端粒酶活性具有显著的抑制效果,并进一步诱导了细胞凋亡。

沙冬青生物碱对MDCC-MSB1细胞增殖及细胞线粒体膜电位的影响

采用体外细胞培养技术、噻唑蓝(MTT)还原法、流式细胞技术检测梯度浓度沙冬青总生物碱对体外培养鸡马立克氏病肿瘤HDCC-MSB1细胞株的增殖抑制及对线粒体膜电位的影响。结果显示,沙冬青生物碱可显著抑制HDCC-MSB1细胞增殖,且这种抑制具有剂量和时间效应关系。经沙冬青生物碱作用的HDCC-MSB1细胞培养样本中有明显的DNA低含量颗粒("亚G1期"峰),细胞周期各时相分布发生改变,细胞增殖在G1被阻滞。细胞线粒体膜电位(△Ψm)明显下降,也呈现出剂量和时间效应关系。结果表明,沙冬青生物碱对HDCC-MSB1细胞增殖有显著抑制效应,且抑制依赖于诱导HDCC-MSB1细胞线粒体膜电位(△Ψm)的下降,并进一步诱导了该细胞的凋亡。

沙冬青总生物碱体外抗牛病毒性腹泻病毒

为了探讨沙冬青总生物碱抗牛病毒性腹泻病毒的作用,采用药毒同加、先药后毒、先毒后药3种不同途径进行体外抗病毒试验,观察病毒致牛肾原代细胞病变,并采用MTT比色法测定D492值,计算病毒抑制率。结果表明,病毒的TCID50为10-5.29/0.1mL;沙冬青种子总生物碱的药物安全质量浓度为0.39g/L;与病毒对照组相比,当质量浓度为0.16g/L和0.32g/L时,沙冬青种子总生物碱对牛病毒性腹泻病毒有较强的直接杀伤作用,可抑制病毒的复制,能有效保护经病毒感染的牛肾原代细胞,使细胞活性增强,并减弱病毒导致的细胞病变效应,但对病毒没有明显的阻断作用。综上所述,沙冬青种子总生物碱具有较强的抗牛病毒性腹泻病毒的作用。

沙冬青总生物碱体外抗牛副流感病毒3型的试验研究

采用沙冬青总生物碱对MDBK细胞的4种作用方式,观察牛副流感病毒3型(BPIV3)引起的细胞毒性效应,并通过MTT检测细胞活性,计算病毒抑制率、半数毒性浓度(TC50)、半数抑制浓度(IC50)和治疗指数(TI)等,以检测沙冬青总生物碱体外抗BPIV3的活性。结果显示,沙冬青总生物碱的安全质量浓度为0.31mg/mL,TC50=2.19mg/mL,病毒半数细胞感染量(TCID50)=10-7.733/0.1mL。采用直接作用方式给药时IC50=0.25mg/mL,最高病毒抑制率为66.15%,TI为8.76。采用抑制作用方式给药时IC50=0.203mg/mL,最高病毒抑制率为52.91%,TI为10.79。采用阻断作用方式给药时IC50=0.16mg/mL,最高病毒抑制率为63.38%,TI为13.69。综合作用方式给药时IC50=0.085mg/mL,最高病毒抑制率为86.49%,TI为25.76。结果表明,沙冬青总生物碱具有较强的体外抗牛副流感病毒3型的作用。