沙地葡萄茎痘相关病毒在‘阳光玫瑰’葡萄树不同物候期和不同部位的变化规律

【背景】沙地葡萄茎痘相关病毒(grapevine rupestris stem pitting associated virus,GRSPaV)是皱木复合病中最常见的一种病毒,主要通过无性繁殖传播,灵敏的检测技术和培育无病毒植株是预防GRSPaV危害的关键。【目的】建立GRSPaV检测体系,确定适宜样品采集时期及部位,为病毒检测和无病毒材料培育及样品采集提供参考。【方法】建立基于AugeGreen染料法和外壳蛋白(coat protein,CP)基因区域设计引物的RT-qPCR检测方法,对携带GRSPaV的‘阳光玫瑰’葡萄树地上部不同物候期、不同部位的样品进行GRSPaV检出率及基因表达量分析。【结果】以GRS q CP1为引物的GRSPaV RT-qPCR检测方法灵敏度较RT-PCR高10倍。GRSPaV在萌芽期、新梢生长期和花期的检出率均为100%,果实膨大期为91.7%;成熟卷须为94.4%,成龄叶片、成龄叶柄和幼嫩枝条均为100%。检测为阴性的样品均为幼嫩部位。GRSPaV CP基因表达量在花期幼嫩卷须中最高,其次为花期成龄叶片;成龄叶中表达量在果实膨大期至成熟期均为同物候期内表达量最高部位;当年冬芽的萌芽期及二次枝的新梢生长期表达量均较低。【结论】‘阳光玫瑰’葡萄GRSPaV检出率和GRSPaV CP基因表达量随物候期进程表现差异,检出率在萌芽期至花期最高,果实成熟期最低;GRSPaV CP基因表达量在花期最高。综合检出率及表达量因素,花期成龄叶适合作为GRSPaV病毒检测样品;果实膨大期至成熟期当年冬芽及萌发的二次枝适合作为脱除病毒材料。

沙地葡萄茎痘相关病毒RT-PCR检测

为建立快速、灵敏、可靠的沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)检测方法,以总RNA为模板,采用2组GRSPaV特异性引物对29个品种52株葡萄样品进行RT-PCR检测,并对扩增产物进行了测序和分析。结果表明,从20个品种25株葡萄样品中检测到GRSPaV,平均带毒株率为48.1%。外壳蛋白基因片段引物F1/R1从25个样品中扩增到905bp的特异片段,复制酶基因片段引物F2/R2从20个样品中扩增到498bp的特异片段,表明GRSPaV外壳蛋白基因比复制酶基因更加保守,RT-PCR检测时采用F1/R1则更为适宜。PCR产物测序结果与GenBank中登录的GRSPaV序列比较,同源性为97.90%～98.11%。

漆酶诱导北美沙地葡萄抗毒素Res合成及代谢研究

为明确真菌漆酶(laccase)对北美沙地葡萄Vitis rupestris抗毒素白藜芦醇(Resveratrol)合成及代谢的影响,采用高效液相色谱(HPLC)法,对白腐菌云芝漆酶与白藜芦醇的体外催化反应条件及产物进行研究;并通过病原菌harpin蛋白预诱导抗病沙地葡萄细胞悬浮系后,采用漆酶处理或非处理,检测白藜芦醇合成及代谢情况。试验结果显示,漆酶在醋酸缓冲液pH 4.5、25℃、150r·min-1、黑暗条件下,与白藜芦醇催化反应2h,可将白藜芦醇氧化形成二聚体葡萄素(δ-viniferin)。漆酶作为一种真菌致病因子能诱导Vitis rupestris细胞合成反式白藜芦醇(trans-resveratrol),并迅速将其氧化为抗性更强的δ-viniferin。同时,漆酶能与病原菌致病蛋白harpin协同诱导葡萄白藜芦醇合成及代谢,以提高沙地葡萄抗性。

沙地葡萄茎痘伴随病毒双重巢式RT-PCR检测方法的建立与应用

根据GenBank数据库中的沙地葡萄茎痘伴随病毒(grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)全基因组序列设计了2组巢式RT-PCR检测引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2,扩增片段分别为902 bp和438 bp。通过对第1轮PCR扩增中引物组合repF1/R1-cpF1/R1、dNTPs、Taq DNA聚合酶和cDNA用量的优化,以及第2轮PCR扩增中引物组合repF2/R2-cpF2/R2、dNTPs和Taq DNA聚合酶用量的优化,建立了GRSPaV双重巢式RT-PCR检测方法。采用该方法对109份葡萄样品进行检测,结果显示,2对普通PCR引物RSP 52/53和RSP 9F/9R的合计检出率为65.1%,2组单一巢式PCR引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2的检出率总和为93.6%,而双重巢式PCR引物组合repF1/R1-cpF1/R1→repF2/R2-cpF2/R2的检出率也达到93.6%。该技术在保证检测效率的基础上降低了检测成本,适用于大量田间样品的检测。

流沙地葡萄滴灌试验初报

沙地葡萄园采用滴灌与沟灌进行比较试验.并测定沙地水分状况和滴灌对葡萄生长发育的影响。

香槟尼、沙地葡萄和河岸葡萄可作为母本用于耐盐性强的杂交育种

据《西北农业学报》2019年第4期《21份葡萄砧木品种资源耐盐性鉴定》(作者袁军伟等)报道,为了准确鉴定21份葡萄砧木品种资源的耐盐性,采用营养钵基部盐液浸泡法,设置100mmol/L盐处理(以不加盐作为对照),以盐害指数为指标,通过聚类分析对21份葡萄砧木进行了耐盐性鉴定。

沙地葡萄栽培技术

沙地栽培的葡萄,不仅色质纯正,口味绝佳,而且病虫危害小,确保了沙地葡萄高产、稳产。我们在试验区栽植了龙眼、京巨峰、户太8号、红地球、"早香甜"等品种。植后3年开花结果,产量较高。在沙区大量栽培葡萄,不仅可以防风治沙,还可以带动广大农民朋友脱贫致富。

塑料薄膜滴灌带在沙地葡萄节水中的应用研究

水资源对于植物生长而言具有十分重要的意义,但是在某些区域内水资源比较缺乏,因此生产工作开展就需要利用技术从而实现节水目标,在确保生产活动能够开展的情况下,节约资源从而实现长远发展。通过滴灌技术应用能够使葡萄种植节约大量水资源,尤其是对于沙地种植而言,节水是生产成本控制的重要方面。在实现节水的前提下才能够使其它技术良好发挥。

关于科尔沁区发展沙地葡萄的几点建议

根据沙地葡萄的栽培实践,提出关于沙地葡萄的从整地到品种选择、栽培技术以及水肥管理等一整套技术措施,为沙地葡萄推广应用提供技术支撑。

我国部分地区沙地葡萄茎痘相关病毒分离物外壳蛋白序列变异分析

为明确我国葡萄中沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)的感染情况及病毒外壳蛋白(coat protein,CP)基因的变异特点,从而为其致病性、病害的防治以及抗病毒基因工程等研究提供依据,本研究对采自我国16个省市自治区的65个葡萄品种305株葡萄样品中的GRSPaV进行RT-PCR检测,根据地区与品种差异选取了24个阳性样品进行cp基因克隆与测序分析,并对不同RNA提取方法进行了比较。结果显示,114株样品被GRSPaV侵染,平均带毒株率为37.4%;分离物间及同一分离物不同克隆间的序列差异较大,从24个分离物克隆获得的37条cp基因序列与来源于不同国家的12个GRSPaV分离物的核苷酸序列同源性为80.5%~99.7%,氨基酸序列同源性为88.8%~100%;各个分离物的遗传距离无明显地域差异;SiO2吸附法比SDS法和CTAB法更适宜葡萄样品RNA的提取。

沙地葡萄茎痘相关病毒的RT-LAMP检测方法

本研究建立了一种用于沙地葡萄茎痘相关病毒(Grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)的RT-LAMP检测方法。以GRSPaV的RdRp基因序列(GenBank登录号:GQ478314)为靶序列,设计3组RT-LAMP引物,从中筛选出1组有效引物,并确定了适宜的反应温度和反应时间。对RT-LAMP产物进行HhaⅠ酶切,酶切片段与理论片段大小一致,证明了RT-LAMP产物的特异性。RT-LAMP方法能够检测出GRSPaV的RNA最大稀释倍数为10-4,与RT-PCR方法相比更为灵敏。田间葡萄样品RT-LAMP检测结果与已知样品带毒情况相同,表明RT-LAMP检测GRSPaV具有较好的可靠性。在RT-LAMP反应产物中加入染料SYBR GreenⅠ(×1000)可直接观察反应结果。建立的GRSPaV RT-LAMP检测方法具有简便、快速、灵敏、可视化等特点,尤其适合基层使用,具有良好的应用前景。

沙漠边缘新垦酿造葡萄园土壤贮水及作物耗水特性研究

分析2002、2003年甘肃武威新地滩沙漠边缘新垦葡萄园0～100cm不同深度土壤储水量观测资料，发现由浅向深土壤含水量呈升-降-升-趋于稳定的变化态势。用土壤水分平衡方程估算沙地葡萄年生长期平均耗水423．2mm，比本地种植小麦平均耗水量少35．2mm，比玉米少151．8mm。沙地葡萄不同生育阶段耗水量，萌芽-展叶期耗水最小，平均耗水31．5mm，最大时期出现在盛花-成熟期，平均耗水260mm，展叶-盛花期、成熟-落叶期耗水量大致相当，分别为66mm和65．7mm。试验证明沙漠边缘地区开垦种植葡萄是可行的，这里种植的葡萄用水少，病虫危害和污染小，品质好，是发展酿造葡萄生产基地的理想区域。

沙漠边缘酿造葡萄生长气象条件及生态响应

根据沙漠边缘新开发酿造葡萄生长发育的试验观测资料,分析了"梅鹿辄"、"品丽珠"等7个酿造葡萄品种生育进程和气象条件。结果表明:沙地酿造葡萄果实生长关键期在7月上旬到8月上旬,含糖量累积关键期为8月份。影响葡萄含糖量的气象因子主要有积温、阶段温度日较差累积值和相对湿度。在分析沙地葡萄园土壤水分随时间、深度变化的基础上,估算出沙地葡萄年生长期平均耗水423.2mm,萌芽到展叶期耗水最少,盛花到成熟期耗水最多,展叶到盛花期和成熟到落叶期耗水量大致相近。试验结果表明在沙漠沿线种植酿造葡萄具有耗水少、效益高的优势,既不减少耕地,又能增加当地农民经济收入,具有良好的生态和经济效益,对绿洲生态环境保护有积极促进作用。

酿酒葡萄延迟采收及经济效益的初探

河南省民权县地处黄河故道沙区,是我国解放后新发展起来的葡萄基地。现有葡萄面积近8万亩,其中结果面积4万亩;栽植品种已有73个,并以佳酿、白羽为主,仅这两个品种就有6万亩,占总面积的75％;年产果3500万公斤,居全国县级之首,成为我国四大葡萄基地县之一。前几年,由于该区果农受传统采摘习惯的影响。

加利福尼亚州的葡萄根瘤蚜

葡萄根瘤蚜Viteus vitifoliae是一种类似蚜虫的害虫,原产美国东部和南部,寄生于野生葡萄属植物中,那里的葡萄品种不一,所以对其抗性亦有不同。上个世纪,根瘤蚜随接穗传到欧洲和加州,由于加州及欧洲系的酿酒葡萄品种Vitis vinifera易受该虫的危害。

葡萄4种病毒多重RT-PCR检测体系的建立

以复合感染4种病毒的‘红地球’(Red Globe)葡萄样品为试材,对影响多重PCR的dNTPS浓度、Taq酶浓度、引物浓度、退火温度及模板量进行了调整和优化,建立了能同时检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leafroll-associated virus-3,GLRaV-3)、沙地葡萄茎痘相关病毒(Grapevine rupestris stem pitting associated virus,GRSPaV)、葡萄病毒B(Grapevine virusB,GVB)和葡萄病毒A(Grapevine virusA,GVA)的多重RT-PCR方法。灵敏度测验结果显示,多重RT-PCR与单一RT-PCR检测灵敏度基本一致。多重RT-PCR获得的特异性片段大小分别为905、546、460和196bp,经过克隆、测序及序列比对,表明其序列与已报道的病毒序列具有较高的同源性。对7个已知带病毒的葡萄样品进行检测验证的结果表明,所建立的多重RT-PCR技术可用于大量田间样品中这些病毒的检测。