沙棘熊果酸对酒精性肝损伤大鼠肝FXR信号通路的影响

目的:初步探讨沙棘熊果酸对酒精性肝损伤大鼠肝法尼醇X受体(Farnesoid X receptor,FXR)信号通路关键蛋白表达的影响。方法:6周龄SPF级SD大鼠随机分为4组,每组9只,分别为正常对照组、酒精模型组、熊果酸对照组和熊果酸+酒精组,干预时间为8周。采用苏木精-伊红(H&E)染色法观察大鼠肝组织病理学变化;测定大鼠血清中谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartateaminotransferase,AST)活力和血清总胆汁酸(Total bile acid,TBA)、肝脏甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)含量;酶联免疫吸附(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清细胞因子肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(Interleukin 1β,IL-1β)、白细胞介素10(Interleukin 10,IL-10)含量;免疫印迹法(Western blotting)测定大鼠肝FXR信号通路相关蛋白表达情况。结果:与正常对照组相比,酒精模型组大鼠肝脏存在大小不一的脂肪空泡和大量炎性细胞浸润;血清ALT、AST活力,TNF-ɑ、IL-1β水平,TBA含量和肝脏TG、TC含量均显著升高(P<0.05)、IL-10水平显著下降(P<0.05)。经熊果酸干预后,肝脏脂肪变性得到明显改善,炎性细胞浸润减少;血清ALT、AST活力,TNF-α、IL-1β水平,TBA含量和肝脏TG含量均有不同程度的显著下降(P<0.05),IL-10水平显著提高(P<0.05)。Western blotting结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠肝脏FXR蛋白表达显著降低(P<0.05),CYP7A1和SREBP-1c蛋白表达均显著升高(P<0.05);而经熊果酸干预后,FXR蛋白表达明显提高,CYP7A1及SREBP-1c蛋白表达明显下调,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:沙棘熊果酸能够明显改善酒精诱导的肝脏损伤,其作用机制可能与上调肝FXR、抑制CYP7A1和SREBP-1c的蛋白表达,从而维胆汁酸稳态、调节脂质代谢有关。

沙棘熊果酸对大鼠坐骨神经损伤修复作用

目的探讨沙棘熊果酸对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。方法2月龄Wistar大鼠30只,坐骨神经损伤模型制备后随机分为熊果酸组和对照组,每组15只。熊果酸组以熊果酸150 mg/(kg·d)灌胃,对照组给予同样剂量的生理盐水,连续灌胃6周。6周后,H&E染色法观察大鼠坐骨神经病理学变化,并计算大鼠SFI、MNCV;免疫组织化学法检测坐骨神经组织NGF的表达,蛋白免疫印迹法检测L_(4)~L_(6)脊髓中GAP-43的表达情况。结果术后6周后,与对照组相比,熊果酸组再生神经纤维数目有所增多,排列相对规则,毛细血管结构丰富,增生的成纤维细胞减少;SFI和MNCV%明显增高(P<0.05),NGF蛋白阳性表达显著增高(P<0.05),坐骨神经组织中GAP-43的蛋白表达量明显上升(P<0.05)。结论沙棘熊果酸干预能够使大鼠坐骨神经损伤后功能得到改善,这可能与增加大鼠NGF蛋白阳性的表达,提高GAP-43蛋白的表达水平有关。

沙棘熊果酸调控NLRP3/caspase-1轴在抗结核药物致人肝细胞损伤中的作用

目的探究沙棘熊果酸调控NLRP3/caspase-1轴在抗结核药物致人肝细胞损伤中的作用。方法正常肝细胞株HL-7702分正常组、模型组及沙棘熊果酸低、中、高浓度组。除正常组外,其余各组120μg/mL异烟肼和240μg/mL利福平联合处理构建抗结核药物致人肝细胞损伤模型,沙棘熊果酸低、中、高浓度组同时添加0.018、0.18、1.8μmol/L沙棘熊果酸共培养。CCK-8法检测细胞增殖能力;ELISA检测上清液中TNF-α、白IL-1β水平;SOD活性检测试剂盒、MDA检测试剂盒检测上清液中SOD、MDA水平;流式细胞术检测细胞凋亡能力;蛋白免疫印迹检测细胞中NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1(p10)蛋白水平。结果与正常组比较,模型组(12、24、36 h)细胞存活率、上清液中SOD水平降低(P<0.05);上清液中TNF-α、IL-1β、MDA水平,细胞凋亡率,细胞中NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1(p10)蛋白水平升高(P<0.05)。与模型组比较,沙棘熊果酸低、中浓度组(24、36 h)、沙棘熊果酸高浓度组(12、24、36 h)细胞存活率,沙棘熊果酸低、中、高浓度组上清液中SOD水平升高(P<0.05);沙棘熊果酸低、中、高浓度组上清液中TNF-α、IL-1β、凋亡率、细胞中NLRP3蛋白水平,沙棘熊果酸中、高浓度组上清液中MDA,细胞中pro-caspase-1、caspase-1(p10)蛋白水平降低(P<0.05)。随着沙棘熊果酸浓度的升高,(12、24、36 h)细胞存活率、上清液中SOD水平逐渐升高(P<0.05);上清液中TNF-α、IL-1β、MDA、凋亡率,细胞中NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1(p10)蛋白水平逐渐降低(P<0.05),呈浓度依赖效应。结论沙棘熊果酸在抗结核药物致人肝细胞中抑制NLRP3/caspase-1通路从而抑制炎症和氧化应激,抑制细胞病变发生,从而促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,实现对肝细胞的保护。