沙棘籽粕蛋白肽的稳定性及分离纯化

以沙棘籽粕蛋白为原料,酶解制备具有抑制胰脂肪酶活性的多肽,通过超滤、大孔树脂分离、超高效液相色谱-串联质谱和分子对接对沙棘籽粕蛋白肽(seabuckthorn seed peptides from alcalase hydrolysates,SSPA)进行分离纯化、结构鉴定和筛选。以猪胰脂肪酶(porcine pancreatic lipase,PPL)抑制率为指标,稳定性分析表明,SSPA具有热稳定性和pH值稳定性,适量Na^(+)和Mg^(2+)可显著提高SSPA的PPL抑制活性,SSPA在短期贮藏过程中不会因暴露于空气而影响PPL抑制活性。超高效液相色谱-串联质谱鉴定得到31种多肽,结合分子对接筛选得到6个肽段,小于3 kDa组分中上述寡肽含量分别为VR(2.90%)、FR(7.40%)、RDR(1.10%)、APYR(1.50%)、NLLHR(1.40%)和EEAASLR(1.10%)。固相合成测定其IC_(50)值分别为VR(371.07μg/mL)、FR(243.07μg/mL)、RDR(250.50μg/mL)、APYR(350.41μg/mL)、NLLHR(220.70μg/mL)、EEAASLR(510.55μg/mL)。分子对接表明以上多肽通过氢键、π-π堆积与PPL结合。Pearson相关性分析表明,分子对接结合能与SSPA的PPL抑制率之间存在显著正相关(R^(2)=0.865,P<0.05)。

沙棘籽粕低聚原花青素的制备及结构与抗氧化活性分析

目的:以沙棘籽粕为原料,采用超高压前处理、超声波提取工艺制备低聚原花青素并进行结构分析和抗氧化性能测定。方法:通过单因素实验和响应面试验优化沙棘籽粕低聚原花青素制备工艺,采用红外光谱和超高效液相色谱-电喷雾-质谱分析其结构,并以DPPH、ABTS、FRAP法测定其抗氧化性。结果:最优工艺参数为料液比1∶15(g/mL)、超声时间28min、温度45℃、体系pH 2.85,沙棘籽粕原花青素得率为6.556%,平均聚合度为3.35,主要为二聚体、三聚体原花青素及部分黄酮类物质,二聚体包括3类B型二聚体和1类A型二聚体。低聚沙棘籽粕原花青素显示出良好的抗氧化活性,其DPPH、ABTS、FRAP值分别为2.205,1.307和0.8143 mmol Trolox/g DW。结论 :低聚沙棘籽粕原花青素有较强抗氧化性,其结构与葡萄籽粕原花青素存在差异。

超声辅助低共熔溶剂提取沙棘籽粕多酚的工艺优化

以一系列低共熔溶剂为提取剂,采用超声波辅助法从沙棘籽粕中提取多酚。在单因素试验结果基础上,利用Box-Behnken实验设计,运用响应面分析法对影响沙棘籽粕多酚得率的主要因素(超声功率、超声时间、超声温度)进行优化。结果表明,沙棘籽粕多酚最佳提取工艺条件为:以含水量为30%的氯化胆碱—草酸低共熔溶剂为最佳提取剂,液料比为14∶1,超声功率420 W,超声时间56 min,超声温度44℃。在此条件下,多酚得率为3.31±0.008%。对比试验发现:氯化胆碱—草酸低共熔溶剂对沙棘籽粕多酚的得率明显优于传统溶剂;与热回流提取相比,超声提取法具有明显的优势。

沙棘籽粕蛋白的功能性质研究

以沙棘籽粕为原料,采用碱提酸沉法制备沙棘籽粕蛋白,并对其溶解性、水合能力、吸油能力、乳化性和乳化稳定性、起泡性和泡沫稳定性等功能性质进行研究。结果表明:沙棘籽粕蛋白的功能性质受pH、温度、盐离子浓度等环境因素影响大,在等电点pH 5.0附近时功能性质数据均最低。

沙棘籽粕原花青素的提取与抗心肌细胞缺氧活性研究

研究沙棘籽粕中原花青素的提取与抗心肌缺氧活性。用乙酸乙酯萃取沙棘籽粕的乙醇提取物得原花青素乙酸乙酯萃取物,再经Sephadex LH-20柱层析50%乙醇洗脱得沙棘籽粕原花青素50%乙醇洗脱物。以乳鼠心肌细胞缺氧/复氧为模型,分别给予不同剂量的原花青素干预,采用MTT法检测心肌细胞的存活率。结果表明,乙酸乙酯萃取物和50%乙醇洗脱物能显著提高缺氧/复氧心肌细胞的存活率,对心肌细胞损伤有很好的保护作用。

沙棘籽粕原花青素制备、体外抗氧化及细胞活力评价

本实验优化了沙棘籽粕原花青素的提取方法,条件为80%乙醇,提取温度35℃,液料比8∶1 m L/g,时间1.5 h,p H3.0,在该条件下的原花青素提取率为(97.31±0.48)mg/g沙棘籽粕;对提取得到的原花青素提取物进行了DPPH自由基和羟自由基清除能力实验,并分析得到IC_50,发现沙棘籽粕原花青素提取物的DPPH自由基清除能力较维生素C强;羟自由基清除能力较弱;MTT法测定了沙棘籽粕原花青素提取物对小鼠B16黑色素瘤细胞活力的抑制作用,分析得到24、48、72 h处理时间下提取物IC_50分别为542.78、199.25、82.58μg/m L。结论:沙棘籽粕提取物对小鼠B16黑色素瘤细胞具有一定的抑制作用,随着剂量和时间的增加,呈逐渐增强的趋势。

沙棘籽粕中生物碱的提取及抗炎镇痛作用研究

从沙棘籽粕乙醇溶液中提取分离出总生物碱,分别采用蛋清所致大鼠足部肿胀、小鼠耳廓肿胀及皮肤毛细血管通透性通透模型、热板法和扭体法考察沙棘籽粕总生物碱的抗炎镇痛作用。结果表明,沙棘籽粕总生物碱对蛋清所致大鼠足部肿胀和二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用,一定剂量的沙棘籽粕总生物碱能有效减缓由醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增高,沙棘籽粕总生物碱对热刺激所致小鼠疼痛和醋酸所致小鼠疼痛具有明显的镇痛作用。

沙棘籽粕原花青素提取纯化工艺研究

对沙棘籽粕原花青素的提取工艺进行了研究。结果表明:以水作为提取溶剂,最佳提取工艺条件为料液比1∶10,提取温度50℃,提取时间1 h;静态和动态吸附解吸试验表明,AB-8大孔吸附树脂对沙棘籽粕原花青素有较好的吸附解吸能力,60%乙醇洗脱液经浓缩至干后原花青素含量为78.32%。

沙棘籽粕多酚提取工艺优化、组分分析及抗氧化性能研究

为提高沙棘籽粕中蛋白质和多酚的利用率,在确保蛋白质溶出率低的情况下,优化了沙棘籽粕多酚的提取工艺条件。同时,采用HPLC对沙棘籽粕多酚提取液的组分进行了分析,并研究了沙棘籽粕多酚的抗氧化性。结果表明,沙棘籽粕多酚提取的最佳工艺条件为:80%甲醇溶液为提取溶剂,超声提取方式,超声频率40 kHz,超声功率150 W,料液比1∶25,提取温度20℃,提取时间20 min。在最佳提取条件下,多酚得率为(7.83±0.03)%。沙棘籽粕多酚提取液共检出没食子酸、儿茶素、芦丁、杨梅素、槲皮素、山奈酚6种多酚类物质,其中芦丁含量最高,为(1.623±0.224)mg/g(以沙棘籽粕质量计)。沙棘籽粕多酚具有较强的抗氧化性,对DPPH自由基和羟自由基均具有显著清除能力,半数抑制浓度(IC50)分别为0.057、0.147 mg/mL。

沙棘籽粕蛋白的碱酶两步法提取工艺及功能性研究

以沙棘籽粕为原料,采用碱提酸沉法提取沙棘籽粕蛋白,得到最佳提取工艺参数为:pH10、料液比1:12、温度60℃、时间60min。后用碱性蛋白酶对碱提残渣中的蛋白进行水解,最适提取条件为:pH8.5、碱性蛋白酶加酶量240U/g、料液比1:10、60℃、60min。通过碱提、酶法两步提取后,总提取率为67.24%。并对其乳化活力和乳化稳定性等功能性质进行了研究,表明性质受pH、温度、盐离子浓度等环境因素影响大,在等电点pH5.0附近时乳化活力和乳化稳定性的数据最低。

不同发酵条件下红曲霉产Monacolin K的沙棘籽粕发酵菌质的特征性成分研究

以Monacolin K含量和菌丝的生长速度为指标,以红曲霉为发酵菌种,以沙棘籽粕为基质,探究不同固体发酵条件对菌丝生长速度、Monacolin K含量以及对发酵菌质中水溶性和醇溶性活性成分含量的影响。结果表明:燕麦米为所考察范围内的最优辅料;随着燕麦米所占比例的增大,Monacolin K的含量呈上升趋势,由最初的(32.77±12.83)μg/g DW升高至(2 972.18±15.66)μg/g DW,生长速度有先上升后降低的趋势;最优含水量为60%,生长速度最高,为(0.42±0.04)cm/d,Monacolin K的积累量也达到最高,为(1 836.88±17.73)μg/g DW;随着发酵时间的延长,Monacolin K的含量逐渐升高,并于第5天开始迅速积累,在第17天达到最高,为(2 418.53±86.20)μg/g DW;不同发酵条件下,发酵菌质中活性成分的含量与微生物的生长状态紧密相关。极端环境下,微生物的生长受到限制,使基质中的活性成分得以保留,但同时也因微生物对基质的分解作用微弱而不易被提取和检测;适宜环境下,微生物的生长状态良好,基质中的活性成分被分解消耗,但同时也因微生物本身数量的增加使最终发酵菌质中的活性成分含量升高。

沙棘籽粕生物碱的提取分离及对乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的:研究沙棘籽粕中生物碱的提取分离及其对乳鼠心肌细胞缺血/再灌注损伤的保护作用。方法:用乙醇提取、利用多种柱层析分离手段从沙棘籽粕中分离单体化合物,采用质谱、核磁共振法鉴定其结构;采用乳鼠心肌细胞缺血/再灌注损伤模型,利用MTT法测定心肌细胞存活率,检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)含量以反映心肌细胞受损的程度。结果:从沙棘籽粕分离得到SJ-A-Ⅰ组分,经鉴定为生物碱5,11-二羟基色胺;该物质能有效维持心肌细胞活力,减少培养心肌细胞缺血/再灌注损伤所致心肌酶(LDH、CK)的释放。结论:沙棘籽粕中的生物碱5,11-二羟基色胺对乳鼠心肌细胞缺血/再灌注损伤具有明显的保护作用,其最佳质量浓度为150mg/L。

沙棘籽粕中蛋白质提取工艺研究

目的:探讨沙棘籽粕中蛋白质提取工艺研究。方法:以蛋白质含量为24.97%的沙棘籽粕为原料,对沙棘籽粕进行粉碎,得到过80目标准药筛的沙棘粉末。将沙棘粉末进行醇提,其最佳工艺如下:乙醇浓度75%、料液比1∶6、提取温度50℃、提取3次每次60 min。然后用碱提酸沉法及双氧水脱色法对醇提沙棘蛋白进行精制,其工艺参数为:pH=10、料液比1∶12、碱提温度50℃、碱提3次每次50 min、30%双氧水与碱提液比例1∶20、脱色温度45℃、脱色时间60 min,酸沉pH=5。结果:经过粉碎过筛、醇、碱及脱色三步法提取后,得到了沙棘蛋白产品,其蛋白质纯度为84.18%,产品得率为11.39%。结论:该提取工艺效果更好。

沙棘籽粕原花青素的提取工艺研究

本文以沙棘籽粕为原料,以乙醇-水溶液为提取剂,通过5个单因素试验探讨对原花青素提取效果的影响,在此基础上选取4个因素经正交试验优化得到最佳提取工艺参数为:粉碎度80目、乙醇浓度70%、料液比1∶12、提取温度50℃、提取时间4h。在此条件下测得产品中的原花青素含量为27.20%,提取率为73.85%。

沙棘籽粕原花青素提取工艺研究

沙棘籽粕是沙棘生产过程中的下脚料，本文对沙棘籽粕原花青素的提取工艺进行了优化，结果表明各因素对原花青素的提取效果的影响为：温度〉料液比〉乙醇浓度〉提取时间，最佳提取溶剂为70％的乙醇，确定了沙棘籽粕最佳提取工艺为：料液比为1：10，提取温度为40℃，提取时间为1．5h。

发酵法制备沙棘籽粕总黄酮的初步纯化及抗衰老活性评价

研究大孔吸附树脂纯化沙棘籽粕发酵提取液的工艺条件以及抗衰老活性。对3种大孔吸附树脂分离纯化的效果进行了比较,考察了X-5大孔树脂分离的较佳工艺条件,并通过MTT法评价了提取物对细胞生长的影响,采用DPPH法、提取物对细胞内活性氧和MMP-1活性的抑制、促进胶原蛋白合成来评价提取物的抗衰老活性。结果表明,较佳工艺条件为:吸附时间2h,吸附温度15℃,洗脱剂体积分数60%,洗脱时间2.5h,洗脱温度45℃。在此条件下吸附量可达2.33 mg/g,解析率可达94.75%;MTT实验表明对成纤维细胞基本无毒副作用;对DPPH自由基清除率达到50%时的质量浓度(IC50)为1.06 mg/L,活性氧水平显著下降,MMP-1活性降低,胶原蛋白含量有所提高。沙棘籽粕发酵液有较好的抗衰老活性。

响应面法优化纤维素酶协同提取沙棘籽粕原花青素的工艺研究

利用单因素试验及响应面法优化纤维素酶协同甲醇超声提取沙棘籽粕中原花青素的工艺。通过单因素试验筛选出提取时间、料液比、及提取液p H三个主要因素,以沙棘籽粕原花青素提取得率为响应因子进行Box-Behnken中心组合试验计划,建立沙棘籽粕原花青素提取得率的二次回归方程,得到最优提取条件。响应面法分析结果表明,最佳提取工艺参数为:超声功率250 W,室温下,酶用量为3%,提取时间55 min,料液比1∶30g/m L,p H值为5.0,提取3次。在此条件下,沙棘籽粕原花青素提取得率为3.07%。

沙棘籽粕总黄酮提取及精制工艺研究

目的:通过响应面试验选取沙棘籽粕总黄酮的最佳提取工艺。在此基础上采用聚砜材质中空纤维超滤膜精制沙棘籽粕醇提液,优选最佳截留相对分子质量的超滤膜。方法:采用响应面法优选最佳提取工艺参数;进而采用截留相对分子质量分别为50 k D、10 k D和6 k D的中空纤维膜对最佳提取工艺的沙棘籽粕醇提液进行超滤精制,以超滤前后沙棘籽粕醇提液中指标成分总黄酮的透过率和共性高分子(多糖、蛋白质)的截留率为指标,优选最佳截留相对分子质量的超滤膜。结果:最佳提取工艺参数为:乙醇浓度75%,提取时间90 min,提取次数2次。综合考察沙棘籽粕总黄酮的透过率及共性高分子的截留率,优选获得最佳精制工艺参数为:截留相对分子质量为10k D的中空纤维超滤膜。结论:沙棘籽粕作为一种沙棘果油生产废弃物仍具有一定的经济价值,采用合适溶剂提取进而采用中空纤维膜精制药液,可获得较高纯度的沙棘总黄酮。

HPLC法测定沙棘籽粕中槲皮素山柰酚和异鼠李素的含量

目的:建立高效液相色谱测定沙棘籽粕中槲皮素、山奈酚和异鼠李素含量测定方法.方法:采用Kromasil C18(4.6㎜×250㎜,5μm)色谱柱,流速1 mL/min.流动相:甲醇-水(含磷酸0.04%)为50∶50;检测波长为360 nm;柱温35℃.结果:3种成分均达到基线分离,槲皮素、山奈酚和异鼠李素的线性范围分别为0.0895~1.79μg(r=0.9998),0.0565~1.13μg(r=0.9999),0.088~1.76μg(r=0.9997);回收率为100.7%(RSD=2.1%),98.5%(RSD=1.7%),100.5%(RSD=1.5%).结论:此方法简便、重现性良好、结果准确可靠,可用于槲皮素山柰酚和异鼠李素的含量测定.

沙棘籽粕蛋白提取工艺技术研究

通过沙棘籽粕蛋白的提取工艺研究,确定适用于产业化生产的提取工艺及参数,提高沙棘蛋白产品含量,改善口感和溶解性等特点,为沙棘蛋白的产业化生产奠定基础。方法 :采用醇洗+碱提酸沉+酶解的高效提取方法制备高质量的沙棘籽蛋白产品,以提取率和沙棘蛋白含量为考察对象,优化提取料液比、pH值、温度和时间等参数,确定最佳工艺及参数。结果:通过醇洗+碱提酸沉+酶解的方法可有效提高沙棘籽蛋白提取率和含量,产业化生产的最佳提取工艺参数为碱性蛋白酶加入量为240U/g,料液比为1:14,pH值为10.0,提取温度为45℃,提取时间为50min。在此条件下,沙棘籽粕蛋白提取率平均为78.45%,含量平均为82.04%。同时,通过醇洗去原花青素、油脂和部分色素,再将残渣进一步酶解,改善了沙棘籽蛋白色泽和口感。