沙眼衣原体小鼠肺炎株呼吸道感染诱导肺组织中性粒细胞浸润及活化

目的：探讨小鼠沙眼衣原体肺炎感染中中性粒细胞（ polymorphonuclear neutrophils， PMN）的募集、活化及诱导其趋化的免疫学机制。方法 C57BL/6（C57）小鼠鼻腔吸入3×10^3 IFU（in-clusion-forming units）沙眼衣原体小鼠肺炎株（Chlamydia muridarum，Cm）建立小鼠沙眼衣原体肺炎模型。取感染后不同时间点小鼠肺组织进行组织病理学染色；通过检测肺组织内髓过氧化物酶（ myelo-peroxidase，MPO）的含量，检测 PMN 在肺组织聚集；分离小鼠肺组织单个核细胞，Giemsaˊs 染色计数肺组织炎症细胞种类；流式细胞术检测 CD11b^＋ Gr1^＋ PMN 细胞百分率及 CD11b^＋ PMN 活性水平；应用RT-PCR 技术检测 Cm 感染后肺组织内与 PMN 募集相关的趋化性细胞因子（MIP-2、LIX、KC、MCP-1）的表达，探讨小鼠 Cm 呼吸道感染过程中 PMN 趋化机制。结果一定剂量的 Cm 呼吸道吸入诱导C57小鼠衣原体肺炎，与对照组（感染第0天）比较，肺组织内有大量炎性细胞浸润，主要包括 PMN、单核细胞、淋巴细胞，其中 PMN 在肺内的聚集早于单核细胞；Cm 感染诱导小鼠肺组织 MPO 含量升高，在感染第7天达到高峰，第14天虽然有所下降，但仍明显高于对照组；流式结果显示，Cm感染后，CD11b^＋Gr1^＋细胞百分比、PMN 总数均显著高于对照组，同时 PMN CD11b 分子的表达在感染后也显著升高，说明 Cm 感染能诱导小鼠肺组织内 PMN 大量聚集并活化。RT-PCR 结果显示，Cm 感染后小鼠肺组织内与 PMN 募集相关的趋化性细胞因子（MIP-2、LIX、KC、MCP-1）的含量明显升高，提示Cm感染上调 PMN 相关趋化性细胞因子的表达，从而吸引大量 PMN 在肺部聚集参与炎症反应。结论一定剂量的 Cm 可以诱导感染小鼠肺组织内 PMN 相关趋化性细胞因子的分泌，从而使 PMN 在肺组织内大量浸润并活化，在抵抗衣原体感染中发挥重要作用。

沙眼衣原体小鼠肺炎株呼吸道感染诱导巨噬细胞浸润并向M1极化

目的探讨沙眼衣原体小鼠肺炎株(Chlamydia muridarum,Cm)呼吸道感染对巨噬细胞浸润及向M1/M2极化的影响。方法经鼻腔给予C57BL/6小鼠1×103包涵体形成单位(inclusion-forming units,IFU)Cm建立小鼠沙眼衣原体呼吸道感染模型。流式细胞术检测肺组织中F4/80+总巨噬细胞及CD86、主要组织相容性复合体Ⅱ(major histocompatibility complexⅡ,MHCⅡ)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、CD206表达情况;实时荧光定量聚合酶链反应检测肺组织中iNOS、CD206、CCL2 mRNA表达。结果Cm呼吸道感染诱导小鼠肺组织中巨噬细胞增加,与未感染组比较,感染后第3天F4/80+巨噬细胞显著增加,并且持续到第7天;Cm感染后,M1型巨噬细胞表面标志CD86、MHCⅡ及M1型巨噬细胞相关趋化因子CCL2表达增加,巨噬细胞向M1型极化;M2型巨噬细胞表面标志CD206逐渐降低。进一步研究发现,M1型巨噬细胞活化指标iNOS在感染后增加,第7天达到高峰。结论Cm呼吸道感染后可诱导巨噬细胞在肺组织大量浸润,且向M1型巨噬细胞极化。

树突状细胞在沙眼衣原体小鼠肺炎株呼吸道感染中免疫保护作用的研究

目的探讨树突状细胞(dendritic cells,DC)在沙眼衣原体小鼠肺炎株(Chlamydia muridarum,Cm)呼吸道感染中的作用以及对适应性免疫应答的影响。方法C57BL/6小鼠经鼻腔吸入1×10^(3)包涵体形成单位(inclusion-forming units,IFU)Cm建立小鼠呼吸道感染模型。流式细胞术检测感染后0、3、7 d脾组织中总CD11c^(+)MHCⅡ^(+)DC比例和共刺激分子(CD40、CD80和CD86)表达情况;qPCR检测小鼠脾组织中DC细胞因子IL-12p40、IL-10和IL-6 mRNA的表达;磁珠分选出Cm感染后7 d的小鼠脾组织DC并过继转移给受体小鼠,于感染后14 d利用细胞内细胞因子染色检测受体小鼠Th1应答水平。结果Cm感染诱导小鼠脾组织DC大量浸润并且共刺激分子表达增加;脾组织DC细胞因子IL-12和IL-10 mRNA的表达在感染后3 d达到高峰;将Cm感染小鼠脾组织DC过继转移给受体小鼠,受体小鼠感染Cm后疾病减轻,肺组织衣原体繁殖降低,且肺和脾组织中的Th1细胞比例显著升高。结论DC在Cm感染后成熟、活化并促进Th1细胞免疫应答,在衣原体呼吸道感染中发挥免疫保护作用。

沙眼衣原体鼠肺炎株外膜蛋白抗原特性的研究

用提纯的鼠肺炎株免疫Balb/C小鼠,建立了一株能分泌种特异单克隆抗体和一株能分泌型特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用电泳技术和兔疫印迹试验证实,所建立的种特异单克隆抗体可与各种沙眼衣原体血清型的外膜主蛋白(MOMP)抗原相反应,说明沙眼衣原体的种特异抗原决定簇位于各型MOMP上;而与型特异单克隆抗体有反应关系的型特异抗原决定簇只分布于鼠肺炎株的MOMP上。并用放射免疫法探讨了种特异单克隆抗体与鹦鹉热衣原体脑膜肺炎株外膜主蛋白抗原间的相互关系。

沙眼衣原体质粒在新生鼠肺炎中作用的初步研究

目的:以沙眼衣原体野生株(wild type,WT)及无质粒株(plasmid free,PF)感染新生鼠诱导肺炎,探究衣原体质粒对菌株致病力的影响。方法:将出生24 h内的48只BALB/c新生鼠随机分成4组,每组12只,WT组感染有质粒的沙眼衣原体血清型D野生菌株,PF组感染同型无质粒株,磷酸盐缓冲液(phosphate buffer,PBS)组予相同剂量PBS处理,正常组无处理。于4、7、11 d各处死4只取标本,逆转录PCR检测肺组织内omp A基因m RNA水平;肺组织苏木精-伊红(H&E)染色及病理评分;髓过氧化物酶(MPO)免疫组化染色分析肺中性粒细胞浸润情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)。报告基因分泌型胚胎碱性磷酸酶(SEAP)实验体外检测TLR2、NF-κB激活。结果:感染后肺组织衣原体培养阴性,而omp A基因m RNA检测及MPO免疫组化染色阳性,证实WT及PF菌株皆可感染新生鼠肺,引起间质性改变伴中性粒细胞浸润,PF组的肺组织病理评分(1.10±0.19)及PMN计数(21.06±10.92)均低于WT组分别为(1.44±0.17)和(43.90±17.17),P值分别为0.048和0.005;ELISA示WT组新生鼠肺内TNF-α(623.35±37.23)和IFN-γ(2206.83±854.22)水平较对照组分别为(470.93±20.83)和(737.97±79.89)升高(P值分别为0.000和0.038),而PF组分别为(531.59±34.14)和(1099.86±427.39)与对照组比较,无统计学差异(P值均>0.05);SEAP实验显示,PF株可激活TLR2信号(F=483.199,P=0.000),但程度较WT组有下降(P=0.000),激活NF-κB的能力明显受限(F=229.884,P=1.000),与对照组无统计学差异。结论:沙眼衣原体质粒缺乏使其感染肺部的致病力减弱,可能与衣原体质粒潜在的致病因子影响TLR2及NF-κB的活化有关。

鼠肺炎沙眼衣原体毒力因子Pgp3蛋白的分段克隆表达

目的获得鼠肺炎沙眼衣原体(CM)质粒编码蛋白Pgp3氨基端(n)、羧基端(c)和中间段(m)分别删除的蛋白Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc,为近一步研究其功能及沙眼衣原体(C.t)致病机制提供基础。方法用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc,分别将其定向插入原核表达载体PET-30a(+)中,连接产物转化入大肠埃希菌DH5α、涂板、挑取单克隆提取质粒进行酶切、测序鉴定。鉴定正确的重组质粒分别转化入大肠埃希菌BL21,15℃诱导表达16 h和37℃诱导表达4 h,考马斯亮蓝染色和蛋白质印迹法鉴定目的蛋白。结果PCR扩增的目的基因Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc的长度分别为597、525、324 bp,NdeI和HindⅢ双酶切重组质粒后电泳显示酶切片段大小符合预期,测序结果显示插入片段序列均与基因库中一致;考马斯亮蓝染色和蛋白质印迹显示目的蛋白分子量分别约为22000、18700和12000,3个蛋白片段均在15℃诱导表达16 h的条件下表达量更多。结论成功表达Pgp3Δn-His、Pgp3Δm-His和Pgp3Δc-His融合蛋白,为进一步研究Pgp3的功能位点和作用机制奠定基础。

阿奇霉素治疗沙眼衣原体感染孕鼠对其妊娠结局及免疫状态的影响

目的:了解沙眼衣原体感染孕鼠的妊娠结局与体内Th1型、Th2型细胞因子水平的关系,以及阿奇霉素干预治疗对其免疫状态及妊娠结局的影响,探讨沙眼衣原体致不良妊娠结局的免疫机理。方法:随机将孕鼠分成3组,于孕2、3、4天,对照组阴道内接种无感染衣原体由McCoy细胞制备的SPG悬液30μl,模型组阴道内接种1.0×106IFU/ml沙眼衣原体F型株的SPG悬液30μl,给药组阴道接种衣原体后于妊娠第8天腹腔注射阿齐霉素10mg/kg(单次给药)。孕12天用酶联免疫法检测各组小鼠血清中Th1型(IFN-γ、TNF-α)/Th2型(IL-4、IL-10)细胞因子表达水平,计算IL-4/TNF-α,IL-10/TNF-α比率。用方差分析和χ2检验比较3组的妊娠失败率、胚胎吸收率、胎重、孕期体重增加量等,以及3组之间细胞因子水平及Th1/Th2型免疫调节平衡的比率等。结果:模型组与对照组比较体内Th2型细胞因子下降(IL-10),而Th1型细胞因子上升(TNF-α),且代表Th1/Th2型免疫调节平衡的细胞因子比值:IL-4/TNF-α,IL-10/TNF-α模型组显著低于对照组,形成Th1型免疫偏倚。给药组降低了妊娠失败率并降低了Th1型免疫偏倚程度。模型组小鼠妊娠失败率及反复妊娠失败率显著高于对照组;给药组小鼠妊娠失败率较模型组低而较对照组高,反复妊娠失败率较模型组下降明显(P<0.05);3组的胚胎吸收率,胚重,孕期体重增加量无显著差异。结论:阴道接种沙眼衣原体使体内细胞因子向Th1型漂移,增加了小鼠的妊娠失败率;阿奇霉素干预可降低Th1型漂移程度,降低小鼠妊娠失败率。

肺炎支原体和沙眼衣原体致儿童急性下呼吸道感染的研究

本文旨在研究儿童社区获得性急性下呼吸道感染(ALRTI)中肺炎支原体(MP)和沙眼衣原体(CT)的感染特征。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测2006年10月～2008年2月因ALRTI收入复旦大学附属儿科医院的患儿呼吸道标本中MP和CT的DNA,并分析2种病原体感染患儿的临床特征与实验室检查结果。在1312份深部鼻咽分泌物标本中,MP和CT检出率分别为7.85%(103/1312)和2.97%(39/1312)。MP在5岁以上患儿中的检出率为33.33%(30/90),而CT在3个月以内患儿中的检出率为6.28%(31/494)。MP感染后易出现40℃以上高热,较少发生发绀与重症呼吸道感染;白细胞计数常无明显升高,但C反应蛋白升高较多见。CT感染后40℃以上高热和重症呼吸道感染少见,C反应蛋白升高也较少见。结果提示,在5岁以上儿童的社区获得性ALRTI中,MP是重要的病原体;而在3个月以内儿童中,CT为常见病原体之一。

睑结膜部炎症者肺炎衣原体、沙眼衣原体核酸检测

目的 探讨我国睑结膜部炎症者病灶部是否存在肺炎衣原体 (Cpn)。 方法 收集 39例慢性结膜炎、沙眼患者的睑结膜病灶部刮取物 ,应用nestedPCR(nPCR)技术检测肺炎衣原体 (Cpn)和沙眼衣原体 (Ct)核酸。并随机抽取 2例CpnnPCR阳性产物进行全自动DNA测序 ,加以佐证。 结果 39例患者中Cpn阳性 13例 ( 33 3% ) ,Ct阳性 5例( 12 8% )。慢性结膜炎和沙眼病例均有Cpn和Ct阳性者。 2例CpnnPCR阳性产物经全自动DNA测序与Cpn(CWL—2 9株 )高度同源。结论 我国睑结膜部炎症者病灶部存在Cpn。

小婴儿肺炎患者沙眼衣原体培养的临床探讨

目的 了解小婴儿肺炎患者沙眼衣原体感染情况及对应的临床症状。方法 用鼻咽拭子采集 2 2 6例标本 ,同时用此采集法与鼻咽抽吸物采集法同时采集 6 3名患儿标本 ,用细胞培养法。结果 除去污染酶菌 35例小婴儿鼻咽拭子细胞培养沙眼衣原体 2 0 .9% (4 0 / 191)阳性。鼻咽拭子与鼻咽部抽吸物 6 3例 ,培养阳性分别的 11例与 10例 ,前者更适宜于临床应用。回顾并总结了小婴儿沙眼衣原体肺炎常见的特征性症状体征。结论 儿科医师应对沙眼衣原体引起的小婴儿肺炎要给予的足够重视。

沙眼衣原体肺炎的临床分析

目的分析沙眼衣原体(CT)肺炎患儿的临床表现、实验室检查、影像学检查。方法选取福建医科大学附属泉州第一医院2015年1月—2016年1月收治的CT肺炎患儿88例,患儿入院后均给予对症支持治疗及抗生素治疗,回顾性分析其临床表现、实验室检查、影像学检查及治疗结果。结果 CT肺炎好发于年龄<3个月婴儿,发生率为87.5%,3~6个月患儿发病率为11.4%,>6个月患儿发病率为1.1%。咳嗽为CT肺炎患儿的最主要临床表现,其次为气促、肺部湿啰音、吸气性三凹征、气喘,患儿中均经检查显示CT-DNA阳性,淋巴细胞分数升高患儿占75%,白细胞计数升高患儿占30.68%,凝血功能异常患儿占5.68%。治疗后,患儿临床症状、体征2周内消失68例,占77.27%,2周~1个月消失12例,占1.64%,2~6个月消失6例,占6.82%,>6个月消失1例,占1.14%,治疗2周自动出院3例,2例合并金黄色葡萄球菌,1例合并巨细胞病毒感染,均失访,占3.41%。结论CT是儿童尤其是婴幼儿感染的重要病原体,大环内酯类抗感染治疗有效,部分病例症状可持续存在,需引起重视。

3月龄以下小婴儿沙眼衣原体肺炎64例临床分析

目的通过对3月龄以下小婴儿沙眼衣原体肺炎临床分析,提高对该病的认识,减少误治和过治。方法对2003年1月～2005年1月我科收治3月龄以下血清衣原体抗体IgM阳性肺炎患儿进行回顾性分析,探讨小婴儿衣原体肺炎的临床特点。结果该组患儿围生期衣原体感染史不明确;平均发病日龄在32.77±19.03天;以冬春季多发。临床以特征性咳嗽为主要表现,少数伴有发热、喘憋,肺部可有细湿啰音或无体征?喜⒑粑啦《靖腥静⒉谎映ぷ≡菏奔洹M庵苎紫赴咴颊?43.8%,中性粒升高不到20%,CRP少数升高,X线胸片以双肺受累为主。阿奇霉素在缓解咳嗽和减少肺部啰音方面优于头孢类抗生素,早期应用大环内酯类抗生素可明显缓解症状和体征并缩短住院时间。结论小婴儿单纯衣原体感染肺炎临床症状轻,一般不会造成脏器功能受损、衰竭甚至威胁生命。正确认识该病临床过程有助于对复杂临床情况进行准确的判断分析。

沙眼衣原体感染对大鼠着床期间子宫内膜E-cadherin的影响

目的研究沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)感染后大鼠着床期间子宫内膜上皮钙粘蛋白(E-cad-herin,E-cad)的变化。方法大鼠雌雄合笼建立早孕模型,取正常和CT感染后妊娠4-7d的子宫组织,免疫组化SP法检测E-cad的表达。结果正常和感染后妊娠组E-cad的表达均存在先上升后下降的趋势,表达峰值均在妊娠第6d,CT感染组低于正常组,且存在显著性差异(P<0.05);其表达部位在子宫内膜上皮细胞的胞膜或/和胞浆,蜕膜细胞无或少量表达。结论沙眼衣原体感染后可能通过影响子宫内膜黏附分子E-cad的表达,破坏子宫内膜微环境,进而干扰早期妊娠。

新生儿沙眼衣原体肺炎的临床研究

109例新生儿肺炎鼻咽拭培养沙眼衣原体22.9％(25/109例)阳性。与国外报道有3点不同:(1)称“无热肺炎”欠妥。因本组44％患儿仍偶有低热;(2)患儿嗜酸性细胞计数均未增高(66-198×lO^6/L);(3)63名患儿自身配对取鼻咽拭与鼻咽部抽吸物培养。前者18.2％阳性高于后者(15.8％)。我们认为任何新生儿肺炎体温<38℃·病程>1周,用青霉素族、氮基糖甙类、头孢菌素等无效时应考虑本症,可用红霉素50mg/kg·d治疗14天。

婴儿沙眼衣原体肺炎185例临床特征分析

目的:分析沙眼衣原体肺炎临床特征,以期为沙眼衣原体肺炎早期诊治提供参考。方法:回顾性分析我院2015年1月至12月诊治的185例沙眼衣原体肺炎住院患儿的临床资料。结果:185例患儿中男女比例为1.43∶1,<3月龄发病者170例(91.9%),顺产163例(88.1%)。185例患儿发热77例(41.6%),咳嗽183例(98.9%),其中痉挛性咳嗽26例(14.2%),138例(74.6%)可闻及密集细湿啰音,67例(36.2%)可闻及哮鸣音。113例(77.3%)嗜酸粒细胞增高。合并检出病原以革兰阴性菌为主,优势菌分别为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌。胸部X线以双肺弥漫性实质病变为主,高分辨率CT(HRCT)以近胸膜下小叶性实变(98.0%)和节段性实变(48.0%)和树芽征(36.0%)最常见。9例(4.9%)合并结膜炎。156例(84.3%)患儿给予阿奇霉素抗感染治疗,1例(0.5%)患儿行机械辅助通气,所有患儿预后良好,无死亡病例。结论:沙眼衣原体肺炎好发于3月龄以下小婴儿,经阴道分娩是主要感染途径,临床上可有痉挛性咳嗽,常合并嗜酸粒细胞升高,HRCT以肺节段性实变及近胸膜下小叶性实变为主。经阿奇霉素抗感染及积极对症治疗均预后良好。

TaqMan PCR技术同步检测沙眼衣原体及肺炎衣原体的DNA

我们自行设计了针对沙眼衣原体、肺炎衣原体的特异性引物、Taq Man荧光探针，对这2种病原体核酸进行双重扩增荧光探针杂交检测，取得满意结果。

沙眼衣原体感染后大鼠输卵管糖蛋白的变化

目的 研究沙眼衣原体 (chlamydialtrachomatis ,CT)感染后 ,输卵管粘膜的结构及糖蛋白的变化。方法 6 0只成年Wistar雌性大鼠随机分为实验组和对照组 ,实验组单侧卵巢囊接种沙眼衣原体E型株 ,对照组接种 2SP代替沙眼衣原体 ,分别于接种后第 0 5、 7、 14天取材 ,在光镜下观察输卵管的结构变化 ,并采用PAS Alcianblue染色显示输卵管内糖蛋白组分的变化。结果 对照组输卵管粘膜结构和糖蛋白组分无明显变化 ;实验组输卵管受损部位主要局限于粘膜层 ,PAS Alcianblue染色显示沙眼衣原体感染可导致中性糖蛋白分泌减少。结论 沙眼衣原体的感染可使输卵管糖蛋白组分发生改变 ,这可能与反复感染和宫外孕、输卵管性不孕的发生有关。

肥大细胞在大鼠输卵管急性沙眼衣原体感染中的作用

目的 为研究肥大细胞在大鼠输卵管急性沙眼衣原体 (Chlamydialtrachomatis,CT)感染中的作用。方法 选择成年雌性SD大鼠 6 0只 ,通过手术从一侧卵巢囊接种沙眼衣原体D型株 ,对照组接种 2 -SPA缓冲液。分别于感染后第 1/ 2d、第 7d、第 14d将大鼠处死 ,取手术侧的输卵管常规固定、脱水、包埋。结果 S -P法显示 :输卵管局部的CD4 + T细胞和血管内皮细胞粘附分子 (VCAM - 1)的表达均较对照组明显增强 (P <0 0 1)。改良的甲苯胺蓝染色法显示 :感染组肥大细胞较对照组数量有显著性增高 (P <0 0 5 ) ,并且其变化趋势与CD4 + T细胞和VCAM - 1表达的变化趋势一致。结论 可以推测 ,沙眼衣原体感染引起急性输卵管炎时 ,肥大细胞通过促进炎症局部小静脉内皮细胞上VCAM -1的表达 ,诱导CD4 + T细胞的浸润 ;然后分泌IL - 4等细胞因子促进CD4 + T细胞向TH2 细胞方向转化 ,不利于机体清除沙眼衣原体 ,从而使发生局部输卵管病理损伤的可能性增加。

新生儿沙眼衣原体肺炎的临床及实验研究

目的探讨新生儿沙眼衣原体(CT)肺炎的发病情况及临床特点。方法对128例新生儿肺炎应用细胞培养检测CT,同时应用PCR扩增其主要外膜蛋白(MOMP)检测CT,应用另一引物对原PCR阳性标本再确证,并分析CT肺炎的新生儿临床资料。结果128例标本中培养阳性29例,阳性率22.7%;两引物PCR均阳性36例,阳性率28.1%;新生儿CT肺炎大多数起病缓慢,临床症状、体征和X线表现无特异性。结论CT是新生儿肺炎常见的病原体,病情迁延,青霉素和头孢类抗生素治疗无效的肺炎应考虑到CT肺炎。细胞培养是诊断CT肺炎的“金标准”,两引物PCR方法的确证可减少因PCR敏感性所致的假阳性。