沙眼衣原体小鼠肺炎菌株呼吸道感染诱导肺泡巨噬细胞和肺间质巨噬细胞浸润并极化

目的探讨沙眼衣原体呼吸道感染对肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AMs)和肺间质巨噬细胞(interstitial macrophages,IMs)浸润并向M1型或M2型极化的影响。方法C57BL/6小鼠以鼻腔吸入沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum,Cm)建立小鼠沙眼衣原体呼吸道感染模型。采用流式细胞术检测Cm呼吸道感染后0 d、3 d、7 d、14 d肺组织中AMs(CD45^(+)F4/80^(+)CD11c^(+))和IMs(CD45^(+)F4/80^(+)CD11c-)比例并分析细胞数目,同时检测AMs和IMs中M1型巨噬细胞(CD80^(+)、CD86^(+)、MHCⅡ^(+)、iNOS^(+)细胞)比例和M2型巨噬细胞(CD206^(+)、Arg1^(+)细胞)比例。结果(1)Cm呼吸道感染诱导AMs和IMs浸润,与未感染组(0 d)比较,感染后3 d AMs和IMs比例和数目显著增加(P<0.05和P<0.01),感染后7 d AMs和IMs数目均达峰值(P<0.001)。(2)与未感染组比较,感染后3 d AMs中CD80^(+)和CD86^(+)细胞比例明显升高(P<0.05和P<0.01);AMs中MHCⅡ^(+)细胞比例在感染后持续升高,于14 d达峰值(P<0.05),CD206^(+)细胞比例在感染后持续降低(P<0.05)。(3)与未感染组比较,感染后3 d IMs中CD80^(+)和CD86^(+)细胞比例显著升高(P<0.05和P<0.001),感染后14 d MHCⅡ^(+)细胞比例明显升高(P<0.01),CD206^(+)细胞比例变化差异无统计学意义。(4)AMs中iNOS^(+)细胞比例在感染后持续升高(P<0.01);AMs中Arg1^(+)细胞比例在感染后持续降低,与未感染组比较,感染后7 d和14 d显著降低(P<0.05)。IMs中iNOS^(+)细胞比例于感染后7 d达峰值(P<0.001),IMs中Arg1^(+)细胞比例变化差异无统计学意义。结论Cm呼吸道感染诱导AMs和IMs浸润并刺激AMs和IMs向M1型巨噬细胞极化,减弱AMs中M2型巨噬细胞极化水平,而对IMs中M2型巨噬细胞极化无显著影响。

IL-21/IL-21R介导的CD4^(+)T细胞在沙眼衣原体小鼠肺炎菌株呼吸道感染中的作用

目的:探讨IL-21/IL-21R介导的CD4^(+)T细胞在沙眼衣原体呼吸道感染中的作用。方法:利用C57BL/6小鼠(WT小鼠)和IL-21R-/-小鼠,鼻腔吸入沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum;Cm)建立小鼠沙眼衣原体呼吸道感染模型。流式细胞术检测小鼠Cm呼吸道感染后0、3、7、14 d小鼠肺、脾组织中CD4^(+)T细胞数量、活化程度和功能,ELISA分析脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4的含量。监测过继转移WT-CD4^(+)T细胞和IL-21R-/--CD4^(+)T细胞的na?ve WT小鼠Cm呼吸道感染后的体重变化,并分析感染后14 d的肺部细菌载量和病理情况,流式细胞术检测肺中性粒细胞(CD45+CD11b+Gr-1 high)、肺泡巨噬细胞(CD45+F4/80+CD11c high)、Th1(IFN-γ+CD4^(+))和Th2(IL-4^(+)CD4^(+))细胞的比例,ELISA分析脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4的含量。结果:Cm呼吸道感染后,与WT小鼠相比,IL-21R-/-小鼠脾、肺组织CD4^(+)T细胞数量和活化程度以及Th1细胞比例均升高,Th2细胞比例下降,脾细胞培养上清中IFN-γ含量升高,IL-4含量下降。过继转移IL-21R-/--CD4^(+)T细胞的受体小鼠在Cm呼吸道感染后体重下降幅度减小,肺组织细菌载量和病理情况减轻,肺Th1细胞比例升高,脾细胞培养上清中IFN-γ含量增加。结论:IL-21/IL-21R介导的CD4^(+)T细胞通过抑制Th1细胞免疫应答加重Cm呼吸道感染。

沙眼衣原体鼠肺炎株外膜蛋白抗原特性的研究

用提纯的鼠肺炎株免疫Balb/C小鼠,建立了一株能分泌种特异单克隆抗体和一株能分泌型特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用电泳技术和兔疫印迹试验证实,所建立的种特异单克隆抗体可与各种沙眼衣原体血清型的外膜主蛋白(MOMP)抗原相反应,说明沙眼衣原体的种特异抗原决定簇位于各型MOMP上;而与型特异单克隆抗体有反应关系的型特异抗原决定簇只分布于鼠肺炎株的MOMP上。并用放射免疫法探讨了种特异单克隆抗体与鹦鹉热衣原体脑膜肺炎株外膜主蛋白抗原间的相互关系。

沙眼衣原体质粒在新生鼠肺炎中作用的初步研究

目的:以沙眼衣原体野生株(wild type,WT)及无质粒株(plasmid free,PF)感染新生鼠诱导肺炎,探究衣原体质粒对菌株致病力的影响。方法:将出生24 h内的48只BALB/c新生鼠随机分成4组,每组12只,WT组感染有质粒的沙眼衣原体血清型D野生菌株,PF组感染同型无质粒株,磷酸盐缓冲液(phosphate buffer,PBS)组予相同剂量PBS处理,正常组无处理。于4、7、11 d各处死4只取标本,逆转录PCR检测肺组织内omp A基因m RNA水平;肺组织苏木精-伊红(H&E)染色及病理评分;髓过氧化物酶(MPO)免疫组化染色分析肺中性粒细胞浸润情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)。报告基因分泌型胚胎碱性磷酸酶(SEAP)实验体外检测TLR2、NF-κB激活。结果:感染后肺组织衣原体培养阴性,而omp A基因m RNA检测及MPO免疫组化染色阳性,证实WT及PF菌株皆可感染新生鼠肺,引起间质性改变伴中性粒细胞浸润,PF组的肺组织病理评分(1.10±0.19)及PMN计数(21.06±10.92)均低于WT组分别为(1.44±0.17)和(43.90±17.17),P值分别为0.048和0.005;ELISA示WT组新生鼠肺内TNF-α(623.35±37.23)和IFN-γ(2206.83±854.22)水平较对照组分别为(470.93±20.83)和(737.97±79.89)升高(P值分别为0.000和0.038),而PF组分别为(531.59±34.14)和(1099.86±427.39)与对照组比较,无统计学差异(P值均>0.05);SEAP实验显示,PF株可激活TLR2信号(F=483.199,P=0.000),但程度较WT组有下降(P=0.000),激活NF-κB的能力明显受限(F=229.884,P=1.000),与对照组无统计学差异。结论:沙眼衣原体质粒缺乏使其感染肺部的致病力减弱,可能与衣原体质粒潜在的致病因子影响TLR2及NF-κB的活化有关。

鼠肺炎沙眼衣原体毒力因子Pgp3蛋白的分段克隆表达

目的获得鼠肺炎沙眼衣原体(CM)质粒编码蛋白Pgp3氨基端(n)、羧基端(c)和中间段(m)分别删除的蛋白Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc,为近一步研究其功能及沙眼衣原体(C.t)致病机制提供基础。方法用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc,分别将其定向插入原核表达载体PET-30a(+)中,连接产物转化入大肠埃希菌DH5α、涂板、挑取单克隆提取质粒进行酶切、测序鉴定。鉴定正确的重组质粒分别转化入大肠埃希菌BL21,15℃诱导表达16 h和37℃诱导表达4 h,考马斯亮蓝染色和蛋白质印迹法鉴定目的蛋白。结果PCR扩增的目的基因Pgp3Δn、Pgp3Δm和Pgp3Δc的长度分别为597、525、324 bp,NdeI和HindⅢ双酶切重组质粒后电泳显示酶切片段大小符合预期,测序结果显示插入片段序列均与基因库中一致;考马斯亮蓝染色和蛋白质印迹显示目的蛋白分子量分别约为22000、18700和12000,3个蛋白片段均在15℃诱导表达16 h的条件下表达量更多。结论成功表达Pgp3Δn-His、Pgp3Δm-His和Pgp3Δc-His融合蛋白,为进一步研究Pgp3的功能位点和作用机制奠定基础。

喹诺酮类抗菌药对衣(支)原体抗菌作用研究进展

衣原体和支原体在临床上感染是全球性的传染病。这两类病原体在各年龄阶段的人体内均能引起感染,主要侵患呼吸系统和泌尿生殖系统。其中引起呼吸系统感染的病原体有肺炎支原体,肺炎衣原体和鹦鹉热衣原体;引起泌尿生殖系统感染主要病原体有沙眼衣原体,解脲支原体和生殖道支原体等。临床上衣原体和支原体感染的治疗主要应用四环素类和大环内酯类抗生素。近10多年来由于氟喹诺酮类抗菌药物不断研制和开发,有部分喹诺酮类抗菌药物在体外对衣原体和支原体有良好活性,对实验动物感染有优异治疗效果,有部分药物已应用于临床治疗衣原体和支原体感染,如氧氟沙星,司帕沙星和妥舒沙星等获得优异治疗效果。药物对衣原体和支原体的实验方法与细菌试验大致相似,但衣原体和支原本的体外试验的培养基的营养成分高于一般细菌,细胞膜中的蛋白质和胆固醇均需培养基提供,需补充血清,卵黄,酵母浸出液等,目前广泛应用于衣原体和支原体的基础培养基为Hagflick氏配方。

沙眼衣原体感染免疫和DNA疫苗的免疫效应

沙眼衣原体是沙眼和性传播疾病的主要病原体之一 ,沙眼衣原体感染还使HIV- 1更易传播。沙眼衣原体感染宿主能诱发机体保护性的体液免疫和细胞免疫 ,在初次感染 ,是细胞免疫而不是抗体起主要保护作用 ;对于继发感染 ,保护性免疫高度依赖Th1型CD4+ T细胞 ,并且诱导迟发型超敏反应。发展疫苗是预防沙眼衣原体感染的有效途径。

沙眼衣原体小鼠肺炎株呼吸道感染诱导巨噬细胞浸润并向M1极化

目的探讨沙眼衣原体小鼠肺炎株(Chlamydia muridarum,Cm)呼吸道感染对巨噬细胞浸润及向M1/M2极化的影响。方法经鼻腔给予C57BL/6小鼠1×103包涵体形成单位(inclusion-forming units,IFU)Cm建立小鼠沙眼衣原体呼吸道感染模型。流式细胞术检测肺组织中F4/80+总巨噬细胞及CD86、主要组织相容性复合体Ⅱ(major histocompatibility complexⅡ,MHCⅡ)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、CD206表达情况;实时荧光定量聚合酶链反应检测肺组织中iNOS、CD206、CCL2 mRNA表达。结果Cm呼吸道感染诱导小鼠肺组织中巨噬细胞增加,与未感染组比较,感染后第3天F4/80+巨噬细胞显著增加,并且持续到第7天;Cm感染后,M1型巨噬细胞表面标志CD86、MHCⅡ及M1型巨噬细胞相关趋化因子CCL2表达增加,巨噬细胞向M1型极化;M2型巨噬细胞表面标志CD206逐渐降低。进一步研究发现,M1型巨噬细胞活化指标iNOS在感染后增加,第7天达到高峰。结论Cm呼吸道感染后可诱导巨噬细胞在肺组织大量浸润,且向M1型巨噬细胞极化。

树突状细胞在沙眼衣原体小鼠肺炎株呼吸道感染中免疫保护作用的研究

目的探讨树突状细胞(dendritic cells,DC)在沙眼衣原体小鼠肺炎株(Chlamydia muridarum,Cm)呼吸道感染中的作用以及对适应性免疫应答的影响。方法C57BL/6小鼠经鼻腔吸入1×10^(3)包涵体形成单位(inclusion-forming units,IFU)Cm建立小鼠呼吸道感染模型。流式细胞术检测感染后0、3、7 d脾组织中总CD11c^(+)MHCⅡ^(+)DC比例和共刺激分子(CD40、CD80和CD86)表达情况;qPCR检测小鼠脾组织中DC细胞因子IL-12p40、IL-10和IL-6 mRNA的表达;磁珠分选出Cm感染后7 d的小鼠脾组织DC并过继转移给受体小鼠,于感染后14 d利用细胞内细胞因子染色检测受体小鼠Th1应答水平。结果Cm感染诱导小鼠脾组织DC大量浸润并且共刺激分子表达增加;脾组织DC细胞因子IL-12和IL-10 mRNA的表达在感染后3 d达到高峰;将Cm感染小鼠脾组织DC过继转移给受体小鼠,受体小鼠感染Cm后疾病减轻,肺组织衣原体繁殖降低,且肺和脾组织中的Th1细胞比例显著升高。结论DC在Cm感染后成熟、活化并促进Th1细胞免疫应答,在衣原体呼吸道感染中发挥免疫保护作用。

鼠肺炎沙眼衣原体质粒蛋白pgp5的克隆表达鉴定及免疫原性分析

目的获取鼠肺炎沙眼衣原体(Chlamydia muridarum)质粒蛋白pgp5的基因及纯化的蛋白并鉴定其免疫原性。方法设计引物,PCR扩增目的基因,将其定向插入到原核表达载体pET28a中,然后将重组质粒转化入大肠杆菌E.coli DH5α中,并用PCR扩增及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定。再将重组质粒转化入感受肽Rosetta(DE3)并诱导表达,用镍柱纯化pgp5-his融合蛋白。用纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体效价,Western blot、细胞免疫荧光方法检测抗体与pgp5蛋白的结合。结果所获得的pgp5基因片段经测序长度为795 bp,检索确认其序列与GeneBank一致。十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹实验均显示获得相对分子质量约29 000的纯化蛋白。ELISA检测多克隆抗体效价达1∶100 000。细胞免疫荧光检测结果显示抗体可与体外培养的鼠肺炎沙眼衣原体特异性结合。结论成功表达pgp5-his融合蛋白,并制备了高效价、高特异性的抗pgp5抗体,为进一步研究奠定了基础。

衣原体感染

肺炎衣原体感染致C57BL／6J小鼠内皮功能异常；肺炎衣原体感染和高脂血症对心肌细胞NF-kappa B和AP-1的影响；956例阴道分泌物标本沙眼衣原体检测结果分析；沙眼衣原体感染者输血传播病毒感染状况调查；三种沙眼衣原体检测方法的对比评价.

衣原体感染

肺炎衣原体感染与儿童急性缺血性脑血管病的相关性；沙眼衣原体感染后妊娠大鼠子宫组织C3和Crry mRNA的表达变化；女性生殖道沙眼衣原体感染的调查报告；沙眼衣原体感染与输卵管性不孕的相关性分析。

衣原体感染

沙眼衣原体和解脲支原体感染与输卵管性不孕症关系的研究，不孕和生育不良结局与妇女沙眼衣原体感染，肺炎衣原体感染对C57BL／6J小鼠动脉粥样硬化形成的影响。

不同抗菌药物体外对沙眼衣原体的单独和联合抗菌作用观察

目的观察大观霉素与头孢曲松体外对沙眼衣原体的单独抗菌作用以及分别与红霉素、氧氟沙星和多西环素的联合抗菌作用。方法采用培养液稀释法测定抗菌药物体外单独对沙眼衣原体的抗菌作用,棋盘格稀释法研究抗菌药物体外联合后的相互作用情况。受试沙眼衣原体株总共12例,临床株10例,质控株2例。Ridit检验比较不同抗菌药物联合间的差异有统计学意义。结果对沙眼衣原体而言,大观霉素与头孢曲松和几种抗菌药物体外联合后多数为无关作用。大观霉素与红霉素或多西环素联合时,分别有42%(5/12)和50%(6/12)的菌株表现出协同作用;头孢曲松与多西环素联合时8%(1/12)的菌株为拮抗作用;氧氟沙星与头孢曲松联合时8%(1/12)表现为协同作用。统计结果显示,与大观霉素或头孢曲松联合时,红霉素、氧氟沙星及多西环素三者之间差异无统计学意义(P值均>0.05)。与红霉素或多西环素联合时,大观霉素比头孢曲松更为有效,U值分别为2.46和2.83,P值均<0.5;与氧氟沙星联合时,大观霉素和头孢曲松之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究结果提示大观霉素与红霉素或多西环素体外联合对沙眼衣原体能产生更好的协同作用。

小鼠沙眼衣原体肺感染过程中Treg细胞与Th17反应关系

【目的】对沙眼衣原体在BALB/c小鼠肺部感染过程中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)与Th17反应关系进行初步探讨。【方法】取6-8周龄的BALB/c小鼠,鼻腔吸入25μL含5×103IFU的沙眼衣原体鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum,Cm),建立沙眼衣原体小鼠肺感染模型。监测感染后不同时期小鼠体重变化;检测肺组织衣原体包涵体形成单位(IFU)及肺组织病理改变;利用流式细胞术检测Cm感染后小鼠体内Treg细胞百分率;ELISA检测肺组织上清液IL-6、TGF-β、IL-17、IL-2细胞因子的的表达;qRT-PCR检测KC(keratinocyte derived chemokine)mRNA和MIP-2(macrophage inflammatory protein-2)mRNA的表达差异。【结果】用5xl03IFU Cm经鼻腔吸入感染后小鼠发生沙眼衣原体肺炎,表现为体重下降、肺组织大量炎症细胞浸润并可检测到衣原体繁殖。Cm感染后第3天,小鼠体内Treg细胞占CD4+T细胞的百分比明显降,随后开始恢复,第7天恢复原来水平,一直持续到衣原体清除。TGF-β、IL-2的表达与Treg细胞动态变化一致。与Th17相关细胞因子IL-6、IL-17和Th17相关趋化因子KC、MIP-2的表达于第3天开始升高,至第7天达到最高水平,随后逐渐减少。【结论】在衣原体感染BALB/c小鼠过程中,Treg可能通过提供TGF-β并在IL-6帮助下促进Th17应答产生。

肺炎

0040270 机化肺炎副流感病毒2型抗体值上升1例[日]/权田秀雄//日气食会报.-1999,50(3).-438～442 冀医情0040271 内源性 IL-13对急性肺炎损伤的调节/Lentsch A B//J Immunol.-1999,162(2).-1071～1076 四军大0040272 IL-10基因敲除小鼠在沙眼衣原体肺感染后显示增强的 Th1样保护免疫且无肉芽肿形成炎症/Yang X//J Immunol.-1999,162(2).-1010～1017 四军大0040273 胃吸引术后吸入大剂量 NO 增加肺损伤/Nader N D//Anesthesiology.-

儿童社区获得性肺炎管理指南（2013修订）（节选）（四）

如何选择抗菌药物 β-内酰胺类和大环内酯类均是儿童CAP最常用的抗菌药物。首选哪一类应根据年龄及其CAP可能的优势病原：〈3个月儿童有沙眼衣原体肺炎可能，而〉5岁者MP肺炎、CP肺炎比率较高，故均可首选大环内酯类，尤其是新一代大环内酯类，其抗菌谱广，可以覆盖大部分儿童CAP病原菌。

医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学)

9931258 1994年～1996年分离的肺炎球菌药敏性和血清型:1μg苯甲异噁唑青霉素圆盘法检查的意义[日]/城裕之∥感染志.-1998,72(3).-307 冀医情 9931259 沙眼衣原体抗菌药抗药化的研究[日]/高桥聪∥感染志.-1998,72(3).-320

产生IL-17的γδT细胞在沙眼衣原体呼吸道感染早期促进中性粒细胞的募集

目的探讨沙眼衣原体呼吸道感染早期产生IL-17的γδT细胞对中性粒细胞募集的影响及其机制。方法WT（C57BL/6）与TCRδ－/－小鼠鼻腔吸入3×103 IFU（inclusion-forming units）沙眼衣原体小鼠肺炎菌株（Chlamydia muridarum, Cm），建立沙眼衣原体小鼠肺炎模型。分离感染不同时间点小鼠肺组织单个核细胞，流式细胞术检测肺组织CD11b＋Gr1＋中性粒细胞（PMN）百分率；细胞内因子染色检测γδT细胞IL-17的合成；RT-PCR检测小鼠肺组织IL-17及KC（中性粒细胞趋化因子）、IL-6 mRNA表达。结果一定剂量的Cm呼吸道感染诱导小鼠肺组织γδT细胞分泌大量IL-17，与未感染组比较，感染后第3天小鼠肺组织CD3＋ γδT＋细胞分泌的IL-17显著增加（P〈0.001），并且持续到感染的第7天（P〈0.05）；TCRδ－/－小鼠Cm呼吸道感染后第3天肺组织IL-17 mRNA的表达以及PMN百分率显著低于WT鼠；进一步研究显示TCRδ－/－小鼠在感染后第3天及第7天中性粒细胞趋化因子KC和IL-6在小鼠肺组织的表达显著降低。结论产生大量IL-17的γδT细胞可能通过上调KC和IL-6的表达在沙眼衣原体呼吸道感染中发挥PMN募集作用。