福建沿海城市鼠腺病毒和沙粒病毒调查及进化分析

目的了解福建省沿海城市鼠类携带病毒及病毒基因特征情况。方法采集宁德、福州、泉州和漳州4市鼠肠道组织样本,采用巢式PCR扩增腺病毒DNA polymerase(DPOL)基因,RT-PCR扩增沙粒病毒large(L)基因,采用生物信息学软件进行同源性和遗传特征分析。结果本调查共捕获152只鼠,腺病毒阳性率为4.61%,野鼠阳性率为5.26%,家鼠阳性率为4.21%。司氏屋顶鼠、褐家鼠、黄胸鼠和黄毛鼠检出腺病毒,首次在司氏屋顶鼠中检出鼠腺病毒。相关因素分析显示,不同鼠种、性别、鼠龄和生境,鼠腺病毒感染率差异无统计学意义。序列分析表明福建沿海城市鼠类感染的腺病毒为鼠2型腺病毒(Murine adenovirus 2)和鼠3型腺病毒(Murine adenovirus 3),与其他地区的鼠腺病毒序列差异较大,核酸同源性介于72.25%~91.01%。所有鼠标本均未检测出沙粒病毒。结论福建沿海城市鼠类存在腺病毒感染,但尚未发现沙粒病毒感染,这为我省进一步开展鼠腺病毒和沙粒病毒的调查研究提供有益的本底资料。

宁波野生鼠类携带的沙粒病毒检测和种系进化分析

目的对宁波地区野生鼠类携带的沙粒病毒进行检测并分析病毒基因序列特征。方法设计沙粒病毒L、S基因的简并引物,采用RT-PCR方法对宁波口岸捕获的鼠类样品进行沙粒病毒检测,分离病毒,对PCR产物进行测序及系统发生分析。结果共检测73份鼠类样品,其中12份褐家鼠经检测为阳性,分离获得沙粒病毒株DX1401,该病毒株S片段扩增片段大小为413bp,L片段扩增大小1 204bp。S片段的系统发生分析显示DX1401与Mobala病毒株ACAR3080位于同一分支,与Mobala病毒株ACAR3080遗传距离最为接近,值为0.467;L片段的系统发生分析显示DX1401与Lassa病毒株Josiah、NL、Z148、Bamba-R114、Soromba-R、Nig08-A37、Nig08-A47,Mobala病毒株ACAR3080,Morogoro病毒株13017/2004,Mopeia病毒株Mozambique、AN 21366-BNI位于同一组,与Mobala病毒株ACAR 3080遗传距离最为接近,值为6.953。结论本研究证实了宁波地区野生鼠类中存在沙粒病毒流行。

南非和赞比亚发生的不明病属沙粒病毒科新病毒感染

2008年10月,世界卫生组织报告南非和赞比亚发生了不明疾病。迄今,南非和赞比亚爆发该病的4例病人均死亡。南非国家传染病研究所(NICD)特殊病原组和美国CDC实验室分析获得了初步证据,认为本病是沙粒病毒科新病毒感染。本病毒可发生人际间传播,病死率高。作为全科医生或社区医生,需要了解相关病毒、实验室诊断、传播途径、临床表现、诊断与鉴别诊断、治疗方案、防护措施等知识,学习新型疾病,做好知识的储备工作。

沙粒病毒及所致人类疾病的研究进展

沙粒病毒(Arenaviruses)属于沙粒病毒科(Arenaviridae),现分为爬行动物沙粒病毒属(Reptarenavirus,RARV)、哈特曼病毒属(Hartmanivirus,HARV)和哺乳动物沙粒病毒属(Mammarenavirus,MARV)3个属,分别以爬行动物和啮齿动物为宿主。沙粒病毒,特别是MARV可引起人类病毒性出血热,主要分布于非洲和美州,近几年来,亚洲也有病例报道,特别是我国鼠类中也证实存在一类新型沙粒病毒的感染,引起人们的关注。本文就沙粒病毒的结构、分类、疫苗、治疗及所致人类疾病的研究进展进行了综述。

沙粒病毒科烈性病毒研究领域的文献计量和知识图谱分析

目的为全面了解国际沙粒病毒科烈性传染病病毒领域研究现状及态势,为本国新发和烈性传染病防控及生物安全提供情报参考。方法利用文献计量法和科学知识图谱分析方法,以本国《人间传染的病原微生物名录》规定的危害程度为第一类的8种沙粒病毒科烈性传染病病毒为研究对象,进行热点和趋势分析。结果共采集到8种沙粒病毒科烈性病毒领域的相关文献1840篇,其中对拉沙热病毒研究的文献最多,达1243篇。国际上对沙粒病毒科烈性传染病病毒研究始于20世纪60年代,美国、阿根廷、德国等在该领域参与度很高,发表相关文献数分别为892、387、186篇,本国在该领域的研究论文共33篇,排名第13;研究机构发表相关文献数居前三位的分别是美国国立卫生研究院、阿根廷布宜诺斯艾利斯大学、美国疾病控制与预防中心,分别发表237、229、164篇。该领域研究方向和热点主要有:病毒流行病学和生物安全问题,病毒遗传及致病机制,病毒治疗,病毒药物、疫苗研发以及病毒快速检测技术。结论沙粒病毒科烈性传染病在本国发生较少,但世界尤其是西方发达国家对该科病毒高度关注,本国对该领域的研究较落后,需加强相关研究以防范疫情及潜在的国家生物安全风险。

沙粒病毒的研究进展

沙粒病毒属于小RNA病毒科,可以通过多种方式感染人类并导致不同程度的疾病病死率。沙粒病毒主要以啮齿类动物为宿主,人类致病性沙粒病毒包括引起人类淋巴细胞脉络丛脑膜炎的淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和导致人类出血性疾病的拉沙热病毒和塔卡里伯病毒群。啮齿动物约占哺乳动物种类的43%,目前在啮齿目动物体内发现30余种高致病性的病毒,其中就包括沙粒病毒。啮齿类动物主要受到沙粒病毒科的哺乳动物沙粒病毒属的感染。本文对沙粒病毒的基因蛋白结构、临床特点、流行病学情况和预防控制等做一综述,为沙粒病毒的研究和预防机制建立提供参考。

加利福尼亚发现新的致病沙粒病毒

出血热可使人们的脑海中浮现出这样一种恐怖的情景:在遥远的地方,一些病人有可能死于一种象埃博拉病毒感染和拉萨热(Lassa fever)的疾病。目前,研究人员报道的一种类似的病毒感染性疾病正在美国的西部地区流行,但流行率较低。加利福尼亚卫生服务部近日宣布,最近发现的一种由森林鼠(Wood rats)和北美鼠(pack rats)携带的病毒导致一名14岁的女孩死亡;此外,该部门还宣称现有充分的证据表明,在过去的14个月内。

鼠类感染沙粒病毒CODEHOP RT-PCR检测方法的建立

目的建立鼠类感染沙粒病毒的CODEHOPRT—PCR检测方法。方法依据沙粒病毒N蛋白氨基酸序列设计1对CODEHOP引物，建立沙粒病毒一步RT—PCR检测方法，分析该引物在对不同种沙粒病毒基因序列上的结合位点及所能获得的产物序列大小；通过检测分离自鼠类的沙粒病毒属淋巴细胞脑膜炎病毒（LCMV）株MS111013，评价方法的特异性和灵敏度；对MS111013扩增产物进行Blast同源性比对。结果从GenBank获得的22种沙粒病毒均存在CODEHOP引物结合位点，扩增产物大小在406～429bp之间。建立的CODEHOPRT—PCR方法可特异性扩增LCMV病毒核酸，目的片段大小与预期结果相符，核酸的最小检出量为11．8Pg。经Blast比对，MS111013与LCMV病毒株Douglas strain（4707）同源性较高，为86％。结论建立的沙粒病毒CODEHOPRT—PCR检测方法敏感、特异，可用于鼠类沙粒病毒感染检测。

沙粒病毒的研究进展

沙粒病毒是一科由啮齿动物为宿主、能够以多种方式感染并引起人类不同程度病死率疾病的RNA病毒,近来在非洲及南美出现局部流行,本文从病原学、生态学、流行病学、临床病理及预防控制等方面回顾了该病毒的研究进展。

沙粒病毒属四步法一致-简并杂合寡核苷酸引物实时荧光PCR检测体系的建立

目的建立沙粒病毒属四步法一致-简并杂合寡核苷酸引物（CODEHOP）实时荧光PCR（Real-time PCR）检测体系。方法设计1对沙粒病毒属的一致-简并引物,分析Real-time PCR的扩增曲线和熔解曲线,根据引物二聚体（PDs）和扩增产物的熔解温度（Tm）值,在通用的三步法延伸步骤之后,增加5 s的恒温荧光检测步骤,在PDs和特异性扩增产物的熔解温度之间进行荧光检测温度的优化,建立四步法CODEHOP Real-time PCR方法,评价其灵敏度、特异性和重复性。结果 PDs的Tm值为75.32-76.86℃,特异性扩增产物的Tm值为86.84℃,增加一步温度为84℃,荧光检测步骤可有效去除PDs对检测结果的影响,该方法特异性为100%,病毒RNA检测灵敏度为59.6 pg,重复性良好,变异系数〈5%,12份鼠肺盲样的检测结果符合预期。结论建立的沙粒病毒四步法CODEHOP Real-time PCR检测方法敏感、特异,可用于鼠类沙粒病毒感染检测。

与人类疾病有关的沙粒病毒研究进展

沙粒病毒为单股负链分节段的RNA病毒，迄今已知仅一个科一个属，分为旧世界沙粒病毒（Old World Arenaviruses）和新世界沙粒病毒（New World Arenaviruses）两大类，有20余种血清型，其中大多数种类可引起人类严重疾病，如拉沙病毒（Lassavirus）引起拉沙热，胡宁病毒（Juninvirus）引起阿根廷出血热，马秋博病毒（Machupovirus）和Chapare病毒引起玻利维亚出血热，瓜纳瑞托病毒（Guanaritovirus）引起委内瑞拉出血热，沙比亚病毒（Sabiavirus）引起巴西出血热，淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）引起淋巴细胞脉络丛脑膜炎。本文对沙粒病毒及其引起的主要疾病的研究进展作一综述。

Flexal和Whitewater Arroyo两种高致病沙粒病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立

Flexal病毒(Flexal virus,FLEV)和Whitewater Arroyo病毒(Whitewater Arroyo virus,WWAV)属沙粒病毒,经鼠传播,可引起人类严重传染病,主要分布于美洲,有因野外工程而感染或国际物流和人员往来而输入的风险。本研究通过检索、分析FLEV和WWAV基因组序列,参照同科属病毒遗传进化特征,确定病毒基因组保守区,筛选分子检测靶基因,设计PCR扩增引物和检测探针,建立两种沙粒病毒的实时荧光RT-PCR检测方法,并进行灵敏性、特异性和重复性初步评价。结果表明,所建立的FLEV和WWAV检测方法与其他病毒无交叉反应,扩增效率大于95%,检出限分别为100copies/μL和20copies/μL,变异系数在2%以内。上述结果显示,本研究所建立的FLEV和WWAV检测方法的特异性强,灵敏性与重复性均处于常规病毒性传染病分子诊断可接受范围,可应用于疑似病例的快速检测和相关病原的筛查和流行病学调查。

琉球病毒、索尔韦齐病毒、苏里斯病毒等三种沙粒病毒实时荧光RT-PCR检测方法研究

建立可检测琉球病毒(Ryukyu virus,RYKV),索尔韦齐病毒(Solwezi virus,SOLV)以及苏里斯病毒(Souris virus,SOUV)等三种沙粒病毒的实时荧光定量RT-PCR检测方法。分析三种病毒流行病学分布特征,从国际公共数据库搜索下载基因组序列,进行比对分析,确定检测靶标,借助primer premier 6.0生物信息学软件,设计引物和探针,建立实时荧光定量RT-PCR检测方法,利用化学合成和体外转录方法制备模拟样本,比较评价三种方法的检测限、特异性、重复性特征。所建实时荧光定量RT-PCR检测方法均可有效扩增检测病毒RNA靶标,检测限分别为40拷贝/μL、7拷贝/μL和15拷贝/μL,检测汉城病毒、汉滩病毒、登革病毒Ⅰ~Ⅳ型分离株、发热伴血小板减少综合病毒及30份健康人血清样本无非特异性扩增,三种病毒相互间以及其他8种出血热相关沙粒病毒RNA间无交叉反应,重复性比较分析显示变异系数均在2%以内。本研究建立的检测RYKV、SOLV和SOUV三种沙粒病毒的实时荧光RT-PCR方法具备用于相关疑似感染者临床样本、宿主动物标本以及进出口物品的筛查检测的潜力,但因未经基于实际病毒感染样本的比较评价,检测结果的解释仍具有一定的局限性。

两种沙粒病毒核衣壳蛋白的交叉反应研究

目的了解沙粒病毒的温州病毒(WENV)与淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)之间的抗原交叉反应情况。方法分别利用原核细胞表达系统及昆虫细胞表达系统,对WENV、LCMV的核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白进行表达、纯化;然后用纯化的原核细胞系统表达的蛋白免疫小鼠,制备抗血清。用纯化的昆虫细胞系统表达的蛋白作为检测抗原,与抗血清之间进行western-blot鉴定,分析WENV与LCMVN蛋白之间的交叉反应。结果WENV与LCMV的N蛋白之间存在双向交叉反应。结论LCMV与WENV的N蛋白之间存在抗原交叉反应,为进一步进行WENV的血清学研究提供重要的实验依据。

广谱沙粒病毒抑制剂的3D-QSAR分析

沙粒病毒(Arenaviruses)遍布全球,其中的拉沙热病毒可引起致命的拉沙热.通过应用比较分子场分析(CoMFA)和比较相似性指数分析法(CoMSIA)对47个广谱沙粒病毒抑制剂进行了三维定量构效关系(3D-QSAR)分析.使用立体场、静电场、疏水场和氢键受体场组合获得最优模型CoMSIA的统计结果为Q2=0.518,R2ncv=0.972,R2pre=0.911,说明该模型的可靠性和较好预测能力.此外,模型等势线图直观地解释了分子结构与其活性的关系,为进一步设计新型高效的沙粒病毒抑制剂提供了理论依据.

沙粒病毒进入宿主细胞阻断剂3,5,6,7,4'-五甲氧基黄酮的发现及机制研究

沙粒病毒是有包膜的RNA病毒,现已知其家族中的8种病毒可致人出血热。除胡宁病毒疫苗外,目前尚无针对其他沙粒病毒的疫苗或特效药物批准上市。本研究是在首次发现黄酮类化合物桔皮素的抗沙粒病毒活性的基础上,从34个桔皮素类似物中发现并确认了3,5,6,7,4'-五甲氧基黄酮的抗拉沙病毒的活性(EC_(50):5.2μmol·L^(-1)),并初步探讨了其构效关系。研究结果表明, 3,5,6,7,4'-五甲氧基黄酮对拉沙病毒的抑制活性是通过阻断病毒融合过程实现的,该化合物对除拉沙病毒外的另外7种致出血热沙粒病毒进入宿主细胞过程也有阻断活性(EC_(50):0.84～10.2μmol·L^(-1)),其抗毒谱与现有沙粒病毒进入抑制剂相比有明显优势。本研究结果为应对致出血热沙粒病毒的药物研发提供了物质储备,也为寻找和发现广谱抗沙粒病毒活性物质提供线索。

沙粒病毒进入抑制剂体外药效学评价模型的建立

沙粒病毒是一类有囊膜的RNA病毒。以哺乳动物为宿主的沙粒病毒(mammarenavirus)中,有9种可致人疾病,其中8种可致人出血热。拉沙病毒(Lassa virus,LASV)感染人所致拉沙出血热(Lassa hemorrhagic fever)流行范围广,有引发疾病大流行的可能,因此拉沙病毒被列为第一类病原微生物。目前针对沙粒病毒的疫苗和药物极为有限。本研究应用重组病毒技术,以HIV-1为核心,共构建了以9种沙粒病毒外壳蛋白包裹的重组病毒(arenavirus-GP/HIV-luc),在考察了它们对17株人、猴、鼠及蝙蝠的不同组织来源细胞进入水平的基础上,建立了沙粒病毒进入抑制剂药理活性评价模型,并用工具药验证。本研究建立的重组沙粒病毒进入抑制剂体外药效学评价模型特异性好,安全性高,可在生物安全二级(BSL-2)实验室进行实验,可为抗沙粒病毒药物和疫苗的活性评价提供技术平台,促进针对沙粒病毒出血热的药物及疫苗的研发。