沙门氏菌传统血清凝集分型和分子血清分型试剂盒方法比较

目的验证沙门氏菌血清分型试剂盒的适用性,考核本实验室传统沙门氏菌血清分型技术,扩充沙门氏菌的分型方法,寻找更有效、更快捷的沙门氏菌分型方法。方法保存的样品菌株库中随意挑选33株沙门氏菌和6株标准菌株,首先确证为沙门氏菌,然后分别采用传统的玻片血清凝集方法和分子血清分型试剂盒对其进行分型,最后采用16S rRNA系统发育树对试验菌株进行聚类分析。结果2种分型手段的匹配率高达94.9%,其中YP 281 Salmonella havana和YP 639 Salmonella liverpool没有匹配到,这2株菌在试剂盒数据库中不存在,但本实验利用传统血清分型手段可以对这2株菌进行准确分型,其中YP 281是本实验室对GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》表B.1外成功分型的沙门氏菌。结论本实验室传统血清凝集分型技术合格。沙门分子血清分型试剂盒具有较好的适用性,能更快速、更方便对沙门氏菌进行分型。

2017-2021年辽宁省市售食品中沙门菌的血清型、分子分型及耐药性分析

目的了解2017-2021年辽宁省市售食品中沙门菌的污染状况、血清型分布、PFGE分子分型特征及耐药特点,为沙门菌感染引起的疾病溯源工作提供科学依据。方法依据GB4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门菌检验》检验方法对收集的样品进行检测及生化实验鉴定,采用玻片凝集法进行血清学实验,利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对分离到的菌株进行分子分型,使用BioNumerics 7.6软件对PFGE图谱进行聚类分析,采用微量肉汤稀释法进行药物敏感性实验。结果89株沙门菌包含32种血清型,以肠炎沙门菌为主;经XbaⅠ酶切分为81种带型,同源性为47.4%~100%。同一血清型菌株的PFGE带型相似度较高,且出现成簇现象。药物敏感性分析中,89株沙门菌对萘啶酸(NAL)的耐药率最高,为52.8%(47/89),共发现有35种多重耐药谱,多重耐药率为43.8%(39/89)。结论辽宁省食品中沙门菌血清型呈现出多样化趋势,不常见血清型较多,PFGE指纹图谱呈多样性,整体耐药水平较高,多重耐药情况严重,应尽快建立高效的管控机制,加强耐药性监测,避免滥用抗生素。

西藏拉萨市鸡源沙门氏菌分子生物学鉴定与血清分型

鸡源沙门氏菌作为重要的食源性病原菌,其血清型分布和致病性研究对于维护公共卫生安全具有重要意义。本研究分别在西藏拉萨市养鸡密集的城关区、曲水县、达孜县、墨竹工卡县、堆龙德庆县5个地区,选择12个养鸡场,采集疑似发病鸡样品121份,最终分离鉴定出104株沙门氏菌。血清学鉴定结果显示,这104株沙门氏菌分属于4个血清群,其中A群(O2)13株、C1群(O7)29株、C2群(O8)9株、D群(O9)53株;优势血清群为D群(51%),其次为C1群(27%)。PCR扩增结果显示,这104株沙门氏菌和标准阳性对照均扩增出inv A基因片断,表明均为致病性沙门氏菌。动物致病性试验结果显示,7日龄雏鸡接种后感染率可达100%。上述结果表明,拉萨市鸡源沙门氏菌流行较为普遍,且均有致病性,会对当地禽产品卫生安全带来威胁,因此西藏地区需要加强鸡源沙门氏菌的控制。

宝安地区感染性腹泻沙门氏菌耐药性与分子分型研究

了解宝安地区感染性腹泻沙门氏菌耐药性与分子分型情况特征。方法 选取2020年1月-2022年12月宝安地区某医院采集感染性腹泻患者150例粪便标本,并且需要对部分标本进行相关检查工作,其中包括:药敏试验、分子分型等。结果 2020年1月-2022年12月期间内的150例标本中(来源于感染性腹泻病患者),共检查出21例沙门氏菌,分离率高达14.00%。对于年龄在15岁以下的患者而言,期该项指标高于年龄在15-45岁及>45岁患者(P<0.05);对分离21株沙门氏菌进行血清分型,共鉴定5种血清型,肠炎沙门氏菌数量最多(47.62%),其次为鼠伤寒沙门氏菌(23.81%)、罗森沙门氏菌(23.81%)、鸭沙门氏菌(9.51%)、伤寒沙门氏菌(4.78%);21例沙门氏菌中对抗生素敏感的种类为7种,总耐药率在50%以上的仅包含氨卡西林药物,其次依次为复方新诺明、头孢曲松、头孢噻肟、环丙沙星、左氧氟沙星及氯霉素分为42.85%、38.09%、33.33%、23.80%、14.29%、4.76%;21株沙门氏菌中只有10株对7种抗生素完全敏感,其余11株均有不同程度的耐药,其中最强耐药谱为氨苄西林-头孢曲松-头孢噻肟-复方新诺明-环丙沙星-左氧氟沙星-氯霉素。 将21株分离的沙门氏菌进行 PFGE分析,得到19个PFGE型别,带型相同的有3组(1株鼠伤寒沙门氏菌,2株肠炎沙门氏菌),其它沙门氏菌PFGE图谱完全不同,21株沙门氏菌带型相似度在49%~100%之间,同一血清型沙门氏菌 PFGE图谱成簇带型出现,但各带与耐药谱之间未见明显关联。结论 本研究初步建立了宝安地区感染性腹泻沙门氏菌PFGE分子分型数据库,为今后流行病防控预警奠定基础。与此同时,发现宝安地区沙门氏菌的耐药现象严重,多重耐药率高,临床应合理规范使用抗生素并加强耐药监测。

沙门氏菌的血清分型及分子鉴定研究进展

沙门氏菌(Salmonella)是常见的食源性致病菌,该菌属型别繁多。沙门氏菌血清型的划分对菌株的分类与鉴定有着重要的意义。本文主要介绍了沙门氏菌的O抗原、H抗原和Vi抗原的特性及结构特征,阐述了多种分子鉴定方法在血清分型检测中应用的进展情况,这些方法大多是以PCR为基础建立的,如多重PCR、基因芯片、高分辨率熔解曲线技术等,使用的引物是根据沙门氏菌的O抗原、H抗原和Vi抗原的编码基因设计的。此外,本文还介绍了两种高通量鉴定方法,通用探针沙门氏菌血清分型法和PremiTest沙门氏菌分型法,但是这两种方法的探针设计比较复杂,使用的设备较为特殊,不易推广。环介导等温扩增(LAMP)方法是等温扩增方法之一,虽然简单、快速、灵敏,但是只适合于单一血清组或血清型的检测。

183株沙门菌属细菌的血清型分布、分子分型特征及耐药性分析

目的分析沙门菌属细菌的血清型分布、分子分型特征及耐药性。方法183株沙门菌属细菌来自宝鸡市中心医院2016年2月至2020年10月门诊及住院患者的临床送检标本,分析沙门菌属细菌的血清型分布、分子分型特征和耐药性情况。结果183株沙门菌属细菌中鼠伤寒沙门菌占65.03%,为最常见血清型,其次为肠炎沙门菌26.78%,副伤寒沙门菌、伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、斯坦利沙门菌、德尔卑沙门菌分别占1.64%、1.64%、1.09%、1.09%、1.09%;119株鼠伤寒沙门菌可见81个脉冲场凝胶电泳(PFGE)型,29株肠炎沙门菌可见21个PFGE型;沙门菌属细菌对四环素、头孢哌酮、链霉素、萘啶酸、氨苄西林的耐药率较高,耐药率分别为89.62%、73.77%、78.14%、85.79%、88.52%;对卡那霉素、头孢他啶、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢曲松、阿莫西林/克拉维素的耐药率较低,耐药率分别为15.85%、10.93%、8.74%、18.03%、13.66%、12.57%;对环丙沙星、头孢西丁、亚胺培南均敏感,敏感率均为100%。结论沙门菌属细菌的血清型分布和PFGE分型较多,且对多种抗生素耐药,临床应结合药敏试验结果,指导合理用药。

3M MDS沙门氏菌分子检测试剂盒的评价

在食品沙门氏菌的检测中,评估3M MDS沙门氏菌分子检测试剂盒的准确性和适用性。以国家标准GB 4789.4—2016为参考方法,测试5类15种具有代表性的食品,评估试剂盒的包容性、排他性和准确度;同时评估试剂盒的耐变性和批间变异。3M MDS沙门氏菌分子检测试剂盒方法和国家标准比较,检测结果无显著性差异,证明该检测试剂盒完全能够满足食品检测的要求。

2015-2017年聊城市腹泻病例中沙门氏菌分子分型及耐药性研究

目的对2015-2017年聊城地区主动监测哨点医院腹泻患者中分离到的沙门氏菌进行病原学分析,了解沙门氏菌的感染现状及血清型分布、分子分型特征和耐药情况。方法对2015-2017年分离自腹泻患者的41株沙门氏菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)和药物敏感性测试,并用BioNumerics软件分析菌株之间的相似度,用微量肉汤稀释法进行菌株耐药性检测。结果腹泻患者中沙门氏菌总分离率为7.16%,且不同年龄段分离率存在差异。分离的沙门氏菌共有8个血清型,其中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌分别为18株和7株,为优势血清型;PFGE分析发现41株菌共产生了34种不同的PFGE带型,相同血清型的沙门氏菌的PFGE带型比较相近,不同血清型的PFGE带型具有多态性,未发现菌株成簇存在现象。测试菌株对四环素耐药率最高为73.17%,多重耐药率达68.29%,发现6株携带不同耐药基因类型的产广谱β-内酰胺酶的鼠伤寒沙门氏菌。结论聊城地区沙门氏菌具有一定的血清型及遗传的多样性,高耐药和多重耐药现象严重,应加强病例及环境联合耐药监测。

云南省食源性沙门菌血清分型及脉冲场凝胶电泳的指纹图谱

目的研究云南省食源性沙门菌的血清型,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对优势血清型进行分子分型,建立云南省食源性沙门菌PFGE指纹图谱资料库,为食源性疾病溯源提供数据.方法对2013年至2016年从云南省食源性疾病监测中分离到的322株食源性沙门菌进行血清学分型,采用Bio Numerics软件对148株沙门菌DNA酶切图谱进行类聚分析,通过聚类比较分析菌株间的相关性,建立指纹图谱库.结果 322株沙门菌血清分型主要包括A、B、C、D、E、F、G群等7个群,鼠伤寒沙门氏菌是主要血清型,占11.4%(37/322).采用Bio Numerics软件对148株沙门菌DNA酶切图谱进行类聚分析,根据电泳产生条带的位置和数量的不同,共分为102个不同的PFGE带型.按照90%的相似度,这些PFGE带型可以分为39个大小不一的聚类群,呈现多样性.结论云南省食源性沙门菌分子分型复杂,以鼠伤寒沙门氏菌为主,PFGE带型呈现多样性.

兰州地区腹泻患儿沙门菌耐药性与分子分型分析

目的了解兰州地区腹泻患儿沙门菌的血清型分布特征,耐药状况及分子分型特征,为儿童沙门菌感染的防治提供依据。方法2018-2020年收集兰州地区哨点医院腹泻患儿粪便标本中分离的149株沙门菌菌株进行血清学分型、药物敏感试验和脉冲场电泳分型。结果腹泻患儿感染沙门菌以夏秋季为主,1~3岁幼儿居多,占59.73%。149株沙门菌分为33个血清型,其中肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为优势血清型,分别占30.87%和28.19%。沙门菌对氨苄西林耐药率最高为79.87%,多重耐药率为78.52%,其中鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌多重耐药率分别为80.95%、76.09%。经PFGE分子分型将肠炎沙门菌分为20个带型,包含2株及以上的带型有6种;鼠伤寒沙门菌分为30个带型,ST1带型包含2株菌。结论兰州市腹泻患儿中沙门菌以非伤寒沙门菌为主,耐药率呈上升趋势,多重耐药严重,肠炎沙门菌PFGE分型同源性较高,鼠伤寒沙门菌带型呈多样性分布。

北京市昌平区临床分离沙门菌株分子分型与耐药分析

目的了解北京市昌平区沙门菌临床菌株血清型、分子特征及耐药性。方法对2017年昌平区分离的沙门菌进行血清分型、脉冲场凝胶电泳分型分析及药敏实验。结果42株沙门菌主要血清型为肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌。PFGE分析得到31种PFGE带型,菌株相似系数为56.9%~100.0%。沙门菌对萘啶酸、链霉素、氨苄西林和磺胺异恶唑的耐药率较高,分别为57.14%、42.86%、40.48%和40.48%;19株(45.24%)沙门菌同时耐受3种及以上抗生素。结论北京市昌平区引起腹泻的沙门菌主要为肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌,对萘啶酸、磺胺异恶唑、链霉素和氨苄西林等抗生素耐药率高,多重耐药严重,且PFGE带型呈高度多态性。

淮安地区食源性沙门氏菌耐药性及分子分型研究

目的了解分离自食品的沙门氏菌的血清型分布、耐药特性以及分子分型特征。方法对分离自食品的沙门氏菌进行血清凝集分型，利用MIC法测定分离株的耐药性，通过脉冲场凝胶电泳技术对分离株进行基因分型。结果39株分离自食品的沙门氏菌分属于5个群，9种血清型，优势血清型为肠炎沙门氏菌。经脉冲场凝胶电泳分型，按照80％相似度，39株沙门氏菌聚类为15个簇群。39株沙门氏菌中具有耐药性的菌株占69．23％，耐药率由高到低依次为氨苄西林、萘啶酸、头孢唑啉、庆大霉素、四环素、氯霉素、环丙沙星、甲氧苄氨嘧啶／磺胺甲嚼唑、头孢噻肟、头孢他啶和头孢西丁。结论本地区食源性沙门氏菌分离株的血清型和基因型呈多样性分布，并且具有多重耐药的特点。

肠道沙门菌O:4(B)菌群脉冲场凝胶电泳分子分型

为了明确2010年食源性疾病监测中分离的肠道沙门菌O:4(B)菌群的PFGE分子型别,探讨其多态性及其与分子流行病学关系,我们将分离获得的29株O:4(B)血清型沙门菌进一步鉴定培养,挑取单个菌落增菌,供试菌株基因组DNA用限制性内切酶XbaⅠ消化酶切后进行脉冲场凝胶电泳分型,所得结果用Bionumerics5.1软件进行聚类分析。实验结果表明,根据电泳指纹图谱,可将29株肠道沙门菌O:4(B)菌群分为24个PFGE型别,菌株间的相似值在56.31%～100%之间,同一血清型别的沙门菌有多个PFGE型别。脉冲场凝胶电泳对O:4(B)群沙门菌有较高的分型能力,可有效的应用于食物中沙门菌溯源分析及分子流行病学研究。

瑞安市腹泻患者沙门菌耐药性和分子分型研究

目的了解瑞安市腹泻患者沙门菌的血清型、耐药性和分子分型特征。方法收集2016—2019年从瑞安市人民医院收治的腹泻患者中分离的沙门菌进行血清学分型,采用K-B纸片法进行药物敏感性试验,利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果共收集到134株沙门菌,分为24个血清型,其中鼠伤寒沙门菌52株(38.8%),肠炎沙门菌31株(23.1%),伦敦沙门菌13株(9.7%)。沙门菌血清型分布在12岁以下组和21~60岁组患者间存在统计学差异(P<0.05)。沙门菌对氨苄西林的耐药率最高,达73.1%;肠炎沙门菌对萘啶酸耐药率达到100%;鼠伤寒沙门菌对萘啶酸的耐药率为48.1%;相比肠炎沙门菌,鼠伤寒沙门菌对复方新诺明、氯霉素、甲氧苄啶、四环素的耐药率更高。随机抽取40株沙门菌进行PFGE,结果得到29种带型,菌株相似度为63%~100%。结论不同年龄组患者分离的沙门菌血清型构成不同。沙门菌多重耐药形势严峻,鼠伤寒沙门菌的耐药性普遍高于其他血清型;对阿莫西林/克拉维酸、头孢他啶、亚胺培南、氨曲南具有较高敏感性。鼠伤寒沙门菌在分子水平存在一定程度的分化,而肠炎沙门菌分化程度不高。

2010-2018年安徽省马鞍山市腹泻患者中非伤寒沙门菌的分子分型与耐药性研究

目的了解马鞍山地区腹泻监测人群非伤寒沙门菌的感染状况、血清学分布、分子分型与耐药性等特征。方法对2010-2018年腹泻患者中分离的非伤寒沙门菌进行血清学分型、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和药物敏感性试验。结果从2998例腹泻患者中检出非伤寒沙门菌腹泻263例(8.8%),其中2例为2种非伤寒沙门菌混合感染;6-7月份非伤寒沙门菌感染率较高,05岁年龄组感染率最高(15.9%)(χ^2=72.98,P<0.001);265株非伤寒沙门菌分为36个血清型,优势血清型为阿贡纳沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌;阿贡纳沙门菌的PFGE带型分布较集中,有菌株成簇存在的现象;测试菌株总耐药率为95.6%(66/69),多重耐药率为82.6%(57/69);测试菌株对AMP(79.7%)、STR(75.3%)和Sul(66.6%)耐药率较高,对AMI和AZI完全敏感;发现2株ESBLs的菌株,均为多重耐药菌株;鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌对不同药物的敏感性有所不同,前者对喹诺酮类药物较敏感,而后者对四环素类药物较敏感。结论马鞍山地区优势血清型为阿贡纳沙门菌,与其他地区不同。阿贡纳沙门菌有成簇存在的情况,提示有既往暴发的可能。总耐药及多重耐药现象严重,应谨慎用药并加强对病例的耐药监测。

沙门菌传统检测与应用快速检测试剂盒的比较

目的比较二者所用时间,检出限,找出比较好的沙门检测方法。方法分别用传统检测方法和沙门氏菌快速检测试剂盒对几种沙门菌标准菌株进行检测,对两者结果进行比较。结果 OXOID沙门氏菌快速检测试剂盒所用时间比传统检测方法短,但其检出限较传统检测方法高。结论实际工作中为保证工作准确,节省时间,最好应用传统检测方法与快速检测试剂盒相结合。

沙门菌属特异性检测靶点碱基差异位点的识别及其血清型决定力

以美国国家生物技术信息中心(NCBI)已公布的28株沙门菌(14个血清型)全基因组序列为研究对象,对前期研究获得的7个沙门菌属特异性检测靶点在不同血清型间的单核苷酸多态性进行比较分析,结果表明,S9和S69为碱基差异位点最多的两个靶点,具有沙门菌分子血清分型的潜在能力。随后,通过分析S9和S69在沙门菌不同血清型菌株中的差异位点,分别绘制两个血清分型靶点的差异位点表,从而获得了这两个靶点同时用于14个沙门菌血清型的快速分子血清分型的差异位点组合。在这些组合中,同一血清型具有相同的差异位点,不同血清型可以通过差异位点得以区分。最后,采集食品样品192份,用国标方法获得疑似沙门菌21株;利用血清分子分型靶点S9和S69进行快速分型,并同时用传统玻片凝集反应鉴定方法进行验证,两种方法鉴定结果的符合率为100%。鉴定结果为:21株沙门菌共包括4个不同血清型,其中肠炎沙门菌10株、鼠伤寒沙门菌7株、鸡沙门菌2株、纽波特沙门菌2株。基因组序列分析结果和分离株分型结果均表明,沙门菌特异分子检测靶点S9和S69相结合具备沙门菌的分子血清分型能力,以差异位点表为基础建立的血清分型方法有望替代传统的玻片凝集血清分型这一繁杂步骤,从而降低沙门菌血清鉴定的时间与成本,为聚合酶链式反应技术应用于沙门菌分子血清分型提供新思路。

猪源沙门氏菌毒力基因检测及脉冲场凝胶电泳分型研究

为了解上海及周边地区猪源沙门氏菌的血清型分布、毒力基因及分子分型情况，我们对21株临床分离到的猪源沙门氏菌用沙门氏菌属诊断血清鉴定血清型；采用多重聚合酶链式反应，检测17个主要的毒力基因；应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术进行分子分型，探寻21株沙门氏菌之间的亲缘关系。结果显示，21株沙门氏菌中，19株血清型为7：c：5，1株为4：i：2，1株未鉴定出；21株沙门氏菌的17个毒力基因中检出16个，菌株之间无差别；经PFGE后，每个菌株产生13～18条电泳务带，用Bionumerics软件进行聚类分析表明，21株猪源沙门菌相似度在77％～100％，可分为2种不同的基因型，其中A型有19株、B型2株，亲缘关系较近。本次实验分离的沙门氏菌血清型以7：c：5为主，含有16个主要的毒力基因，A型为优势基因型。

2017-2021年温州市腹泻患者沙门菌血清学和耐药谱及分子分型特征分析

目的探究温州市食源性腹泻患者沙门菌的血清学、耐药性和分子分型特征,为食源性疾病的预防控制和临床治疗提供科学依据。方法对从温州市2017—2021年食源性腹泻病例中分离出的567株沙门菌进行病患信息整理以及血清分型,使用微量肉汤稀释法对15种抗菌药物进行敏感性试验,运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对菌株进行分子分型。结果567株沙门菌腹泻患者含男性326人,女性241人,分别占57.5%和42.5%,多为6岁以下的儿童,共分离出119株,占21.0%;其次为60岁以上的老年人,共分离出111株沙门菌,占19.6%。567株沙门菌共分为50种血清型,其中位居前两位血清型是鼠伤寒沙门菌(33.5%,190/567)和肠炎沙门菌(23.6%,134/567)。567株沙门菌对氨苄西林耐药率最高,为73.5%(417/567),其次四环素为63.3%(359/567);鼠伤寒沙门菌对四环素的耐药率最高为84.2%(160/190),而肠炎沙门菌对萘啶酸的耐药率最高为95.5%(128/134)。多重耐药率为62.6%,共产生178种耐药谱,其中最多的耐药谱为AMP-AMS-CFZ-CT-NAL。201株鼠伤寒沙门菌及其单相变种产生70种带型,带型差异度较大,相似度在1.5%~100%之间;127株肠炎沙门菌产生32种带型,相似度在35.8%~100%之间。50株伦敦沙门菌共产生24种带型,相似度在40.0%~100%之间。结论温州市食源性沙门菌呈现广泛的血清型分布,并存在不同程度的耐药性及多重耐药趋势。为了有效防控沙门菌引起的食源性疾病,应加强对食源性腹泻患者沙门菌的监测,及时了解温州市血清型分布趋势和耐药特点,并采取必要的预防措施。

全基因组测序在食源性沙门氏菌监测中的应用

沙门氏菌是重要的食源性致病菌,给社会带来了严重的公共卫生和经济影响。随着高通量测序技术的发展,全基因组序列分析在沙门氏菌的监测中显示出了极大的发展潜力和价值。本文综述了全基因组序列分析在沙门氏菌血清型鉴定、分子分型以及耐药研究领域中的应用前景。利用高通量测序技术与沙门氏菌抗原相关基因数据库比对进行血清型的预测,在血清凝集方法难以确定血清型的情况下发挥重要作用。与传统的细菌分子分型方法相比,全基因组测序技术速度更快、分辨率更高,且易于实现实验室间比较,在公共卫生事件中可用于快速识别病原体并进行溯源分析。利用耐药基因数据库从基因水平上发现其携带的耐药基因,结合耐药表型进一步探索其耐药机制。随着高通量测序技术和生物信息技术的不断成熟,更多的共享数据库平台不断出现,全基因组序列分析将应用于更广泛的领域。