畜禽肉沙门氏菌和大肠杆菌O157多重PCR检测研究

沙门氏菌和大肠杆菌O157都是目前世界公认引起食源性疾病的重要致病菌。本研究针对致病菌传统检测方法耗时长、过程繁琐的缺点,建立了同时检测畜禽肉及其制品中沙门氏菌和大肠杆菌O157的多重PCR分子检测方法。结果表明:分别针对沙门氏菌侵袭基因invA、大肠杆菌O157抗原基因rfbE建立的多重PCR方法可简便、快速、灵敏地实现对沙门氏菌和大肠杆菌O157的同时检测,整个过程在9h^10h内完成,人工污染猪肉检测限分别达到2.4×102cfu/mL(沙门氏菌)和2.2×102cfu/mL(大肠杆菌O157);为食源性致病菌的检测提供了理想手段,有良好的应用前景。

绿荧光蛋白基因在猪霍乱沙门氏菌C500株asd^-缺失株平衡致死载体系统中的表达

猪霍乱沙门氏菌C500株是用化学方法致弱用于预防仔猪副伤寒病的弱毒疫苗株,毒力弱且免疫原性良好。为将猪霍乱沙门氏菌开发为适于粘膜免疫的疫苗活载体并保持原有免疫原性,构建了以C500为亲本菌,用负向选择的重组自杀性质粒介导接合转移的方法构建了无抗性标记的asd-缺失株。首先构建asd(天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶)基因缺失1408bp的带有蔗糖敏感基因sacB的重组自杀性质粒,与C500接合转移,两步法筛选无抗性的asd-缺失株,通过PCR鉴定。该缺失株在无外源DAP(二氨基庚二酸)条件下溶菌死亡,它的生长必需外源DAP。PCR扩增绿荧光蛋白突变体4基因,克隆到带有asd基因的原核表达载体pYA3493中,电转化C500asd-缺失株,转化子在LB中生长,并激发强的绿荧光。上述结果表明,该asd-缺失株的构建是成功的,并且可以用来作为宿主载体平衡致死系统来高效表达外源基因,为开发C500为载体的口服多价疫苗奠定了基础。

三种方法检测沙门氏菌的比较研究

目的探讨建立快速、准确的沙门氏菌检测方法。方法采用常规方法、Vitek免疫诊断分析系统(VI-DAS)和荧光RT-PCR对沙门氏菌进行检测,并对其灵敏性和特异性进行比较。结果荧光RT-PCR的灵敏度最高,VIDAS及荧光RT-PCR检测沙门氏菌的特异性均达100%。结论VIDAS及荧光RT-PCR均能对沙门氏菌进行快速检测,在应对突发公共卫生事件中将能发挥重要作用。

HPV16重组减毒沙门氏菌表达质粒的构建及其诱导免疫

将人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)16 L1E7基因插入携带霍乱毒素基因的pET CTA2B载体,获得HPV16L1E7与CTA2B融合表达质粒pET L1E7CTA2B。在此基础上,通过PCR基因克隆技术,将pET载体的T7启动子与pTETnir15载体的大肠杆菌硝酸盐还原酶基因B启动子nirB进行分割重组,将nirB启动子的厌氧调控元件和启动子基本元件FNR TATA盒与T7 启动子的核糖体结合位点(SD)序列融合,形成nirB T7 杂合启动子。最后获得HPV16重组减毒沙门氏细菌疫苗表达载体pNir 16L1E7CTA2B,并进一步构建对照质粒pNir 16L1E7。Western blot结果证实以上质粒nirB T7杂合启动子能够在沙门氏细菌中表达L1E7 融合蛋白。口服免疫接种小鼠可成功诱导小鼠生殖道产生HPV16 特异性粘膜免疫,且霍乱毒素CTA2B可以增强粘膜免疫诱导能力,为开发廉价有效的HPV16预防性疫苗打下了基础。

IFN-γ调节THP-1细胞应答沙门氏伤寒菌

目的：为了探讨ＩＦＮγ在增强宿主防御沙门氏伤寒菌感染中的作用机制。方法：采用体外细胞培养方法研究了ＩＦＮγ对ＴＨＰ１细胞应答沙门氏伤寒菌的调节作用。结果：发现ＩＦＮγ显著促进ＴＨＰ１细胞及ＰＭＡ分化的ＴＨＰ１细胞内化和杀伤沙门氏伤寒菌，并明显增强沙门氏伤寒菌诱导ＰＭＡ分化的ＴＨＰ１细胞产生ＴＮＦα和增强诱导ＴＨＰ１细胞及ＰＭＡ分化的ＴＨＰ１细胞产生ＩＬ１２。

快速检验食品中沙门氏菌和 O1 5 7∶H7大肠杆菌(英文)

利用沙门氏菌快速检验装置 (Oxoid公司出品 )和可视免疫沉淀物 (VIP)试剂盒 (Bio Control Systems公司出品 )对广西桂林市的七星区某农贸市场的 2 0种食品进行了沙门氏菌和 O1 5 7∶ H7大肠杆菌的快速抽样检验 .结果发现 ,其中的 1 1种食品的沙门氏菌呈阳性反应 ,4种食品的 O1 5 7∶H7大肠杆菌也呈阳性反应 .与目前国内普遍使用的传统检验方法相比 ,该方法具有快速、简便、高效、准确的特点 .

茶树油制剂对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的体外抑菌试验

确定茶树油制剂的最低抑菌浓度(MIC),为茶树油制剂作为饲料添加剂提供重要的参考依据,使茶树油有望被开发成为一种可缓解全球"抗菌药物危机"的天然抗菌剂。本试验以茶树油作为抑菌剂,以金黄色葡萄球菌和沙门氏菌分别作为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的代表,进行体外抑菌试验,测定混合抑制培养后的光密度值(OD600nm)并对其进行分析。研究发现茶树油制剂对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌均具有显著的抑菌效果(P<0.05),且对二者的抑菌效果一致,在二者浓度为106cfu/ml时的最低抑菌浓度(MIC)相同,均是0.1×2-1×2%,茶树油制剂对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有显著的抑菌效果(P<0.05)。

儿科病房感染鼠伤寒沙门氏菌肠炎的临床分析

本文对西安某职工医院儿科病房中医院感染的26例鼠伤寒沙门氏菌肠炎进行了临床分析。结果显示:治愈12人,好转9人,自动出院5人。严重威胁了儿童的身心健康和家长的经济负担,应引起儿科医护人员的高度关注。指出恢复儿科门诊的分诊制度;加强病房管理;严格执行消毒隔离制度和患儿出院后病房的终末消毒等,是减少儿科病房内鼠伤寒沙门氏肠炎交叉感染的有力措施。

PhoQ基因重组鼠伤寒沙门氏菌株的构建及毒力研究

应用PCR技术从鼠伤寒沙门氏菌基因组DNA中克隆phoQ基因片段,构建原核表达pUC18重组质粒,测定序列(GenBank登录号为DQ787014),并转入鼠伤寒沙门氏菌,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,进行高效表达。对重组菌株、野生菌株进行毒力检测对比实验,通过口腔注入45日龄健康无菌KM小鼠,测定其半数致死量(LD50)。结果发现:重组菌株与野生菌株的毒力存在显著差异,其半致死量分别为3.981×107cfu/mland5.012×102cfu/ml,PhoQ基因重组菌株的毒力远远低于非重组菌株。说明phoQ基因是调节鼠伤寒沙门氏菌致病机制中一个重要的调节因子。

沙门氏致病菌标准阳性模板的构建及实时荧光定量聚合酶链式反应检测

目的:构建重组质粒作为标准阳性模板,建立食品中沙门氏致病菌实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法。方法:以致病性沙门氏菌inv A基因上特异性片段为目标,设计并合成引物和Taq Man探针,将目标片段连接到PGM-T载体上构建重组质粒,建立实时荧光定量检测体系,并考察方法的灵敏性、特异性、重复性和准确性。结果:构建出致病性沙门氏菌特异性基因片段的重组质粒,能够作为实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法的标准阳性模板,标准曲线方程为Y=-3.151 lg X+42.86(R2=0.999),灵敏度80拷贝反应体系,能特异区分沙门氏菌与类型的细菌,同时,批内和批间的变异系数均小于5%,具有良好的重复性。结论:本方法能够实现对食品中致病性沙门氏菌进行定性定量检测。

联用检测仪器与显色培养基对食品和水产品中沙门氏菌的检验

采用全自动荧光酶免疫分析仪(mini VIDAS)进行初筛,用沙门氏菌显色培养基进行复筛,再用全自动微生物鉴定仪(VITEK 2 Compact)进行阳性菌株的生化性状鉴定。经过30 h增菌之后,VIDAS可在45 min之内检测结果,阳性菌株经显色培养基分离与纯化后根据VITEK检测结果和血清学凝集试验的结果判定是否属于沙门氏菌。采用联用法与国标法对参考菌株、395种食品和水产品进行检测,结果完全一致。结果表明,联用法快捷、有效,能在最短60h内检测结果,适用于食品和水产品沙门氏菌的检测。

从雏禽分离134株沙门氏菌的鉴定及药敏试验

近年来,四川省的某些地区雏禽(鸡、鸭、鹅)死亡率较高。由于在生产统计中,雏禽不计入存栏数,因此对雏禽疾病所造成的危害,有关部门往往未加重视。雏禽疾病造成较大的经济损失,挫伤了农户的养禽积极性。雏禽死亡的原因较为复杂,除饲养管理外,肠道致病菌和条件致病菌也是造成雏禽病死的原因。其中沙门氏菌感染导致死亡。

沙门氏伤寒菌感染致肝脓肿1例报道

笔者在门诊跟随老师临床中,遇到1例沙门氏伤寒菌感染导致肝脓肿,现报道如下。

两种沙门氏菌显色培养基在水产品检验中应用比对研究

目的:在水产品沙门氏菌检验过程中,我们采用国外进口的科马嘉显色培养基和国产环凯显色培养基同时进行检验,从菌落特征、检出率、假阳性率、假阴性率等指标进行比较得出两者有无区别的结论。方法:GB4789.4-2010食品安全国家标准-沙门氏菌检验。结果:两种显色培养基检验结果无差异。结论:环凯沙门氏显色培养基可以替代科马嘉沙门氏显色培养基在水产品微生物检验中的应用。

婴儿沙门氏菌感染42例临床分析及流行病学研究

本文报告婴儿沙门氏菌感染42例,均为新生儿及患重症原发病的婴儿。临床症状多不典型,以中度弛张型热和腹泻为主,腹泻平均13.2天。应用痢特灵、复方新诺明、丁胺卡那霉素及综合疗法效果较好。在细菌学鉴定中将本菌与鼠伤寒沙门氏菌进行对比,在对环境污染调查中,本菌检出率18.82%。

鸡沙门氏菌病防治新进展

鸡沙门氏菌病防治新进展朱其太张运凤（连云港动植物检疫局）（连云港畜牧兽医站）鸡沙门氏菌病是由沙门氏菌引起鸡的一种较为常见的肠道传染病，是严重影响雏鸡成活率的因素之一，又是成鸡减产的不可忽视的隐患。目前，我国各种类型的养鸡场都有不同程度的发生。该病目前...

嘉定区职业人群沙门氏菌携带状况分析

１９９４－１９９５年，从６４０２８名预防性健康检查对象中，共检出１８０名沙门氏菌携带者，携带率为２．８１。每年３月份起，携带者人数逐渐增多，６、７月份达高峰，后渐渐下降，至１－１２月份完全消失。携带者以从事食品的生产、经营者为多，携带的沙门氏菌以Ｂ群为主。

有机磷农药分子片段诱发沙门氏菌回复突变的计算机辅助评价

用计算机辅助分子片段评价程序分析了５９种有机磷化合物诱发沙门氏菌回复突变的资料。发现：有机磷诱发沙门氏菌回变与带甲基的分子片段有关，而带乙基分子片段的有机磷的阳性概率极低；磷酰基上的氧原子似有增强诱变性的作用，硫代磷酰基上的硫原子则似有减弱作用。提示：在这些相关片段中，甲氧磷酰基片段与有机磷诱发沙门氏菌回变相关，可推荐为有机磷诱发阳性的特征描述符；而乙基硫羰磷酰基阳性的概率极低，为阴性结果的描述符。