畜禽肉沙门氏菌和大肠杆菌O157多重PCR检测研究

沙门氏菌和大肠杆菌O157都是目前世界公认引起食源性疾病的重要致病菌。本研究针对致病菌传统检测方法耗时长、过程繁琐的缺点,建立了同时检测畜禽肉及其制品中沙门氏菌和大肠杆菌O157的多重PCR分子检测方法。结果表明:分别针对沙门氏菌侵袭基因invA、大肠杆菌O157抗原基因rfbE建立的多重PCR方法可简便、快速、灵敏地实现对沙门氏菌和大肠杆菌O157的同时检测,整个过程在9h^10h内完成,人工污染猪肉检测限分别达到2.4×102cfu/mL(沙门氏菌)和2.2×102cfu/mL(大肠杆菌O157);为食源性致病菌的检测提供了理想手段,有良好的应用前景。

绿荧光蛋白基因在猪霍乱沙门氏菌C500株asd^-缺失株平衡致死载体系统中的表达

猪霍乱沙门氏菌C500株是用化学方法致弱用于预防仔猪副伤寒病的弱毒疫苗株,毒力弱且免疫原性良好。为将猪霍乱沙门氏菌开发为适于粘膜免疫的疫苗活载体并保持原有免疫原性,构建了以C500为亲本菌,用负向选择的重组自杀性质粒介导接合转移的方法构建了无抗性标记的asd-缺失株。首先构建asd(天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶)基因缺失1408bp的带有蔗糖敏感基因sacB的重组自杀性质粒,与C500接合转移,两步法筛选无抗性的asd-缺失株,通过PCR鉴定。该缺失株在无外源DAP(二氨基庚二酸)条件下溶菌死亡,它的生长必需外源DAP。PCR扩增绿荧光蛋白突变体4基因,克隆到带有asd基因的原核表达载体pYA3493中,电转化C500asd-缺失株,转化子在LB中生长,并激发强的绿荧光。上述结果表明,该asd-缺失株的构建是成功的,并且可以用来作为宿主载体平衡致死系统来高效表达外源基因,为开发C500为载体的口服多价疫苗奠定了基础。

三种方法检测沙门氏菌的比较研究

目的探讨建立快速、准确的沙门氏菌检测方法。方法采用常规方法、Vitek免疫诊断分析系统(VI-DAS)和荧光RT-PCR对沙门氏菌进行检测,并对其灵敏性和特异性进行比较。结果荧光RT-PCR的灵敏度最高,VIDAS及荧光RT-PCR检测沙门氏菌的特异性均达100%。结论VIDAS及荧光RT-PCR均能对沙门氏菌进行快速检测,在应对突发公共卫生事件中将能发挥重要作用。

茶树油制剂对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的体外抑菌试验

确定茶树油制剂的最低抑菌浓度(MIC),为茶树油制剂作为饲料添加剂提供重要的参考依据,使茶树油有望被开发成为一种可缓解全球"抗菌药物危机"的天然抗菌剂。本试验以茶树油作为抑菌剂,以金黄色葡萄球菌和沙门氏菌分别作为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的代表,进行体外抑菌试验,测定混合抑制培养后的光密度值(OD600nm)并对其进行分析。研究发现茶树油制剂对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌均具有显著的抑菌效果(P<0.05),且对二者的抑菌效果一致,在二者浓度为106cfu/ml时的最低抑菌浓度(MIC)相同,均是0.1×2-1×2%,茶树油制剂对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有显著的抑菌效果(P<0.05)。

PhoQ基因重组鼠伤寒沙门氏菌株的构建及毒力研究

应用PCR技术从鼠伤寒沙门氏菌基因组DNA中克隆phoQ基因片段,构建原核表达pUC18重组质粒,测定序列(GenBank登录号为DQ787014),并转入鼠伤寒沙门氏菌,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,进行高效表达。对重组菌株、野生菌株进行毒力检测对比实验,通过口腔注入45日龄健康无菌KM小鼠,测定其半数致死量(LD50)。结果发现:重组菌株与野生菌株的毒力存在显著差异,其半致死量分别为3.981×107cfu/mland5.012×102cfu/ml,PhoQ基因重组菌株的毒力远远低于非重组菌株。说明phoQ基因是调节鼠伤寒沙门氏菌致病机制中一个重要的调节因子。

从雏禽分离134株沙门氏菌的鉴定及药敏试验

近年来,四川省的某些地区雏禽(鸡、鸭、鹅)死亡率较高。由于在生产统计中,雏禽不计入存栏数,因此对雏禽疾病所造成的危害,有关部门往往未加重视。雏禽疾病造成较大的经济损失,挫伤了农户的养禽积极性。雏禽死亡的原因较为复杂,除饲养管理外,肠道致病菌和条件致病菌也是造成雏禽病死的原因。其中沙门氏菌感染导致死亡。

肉鸡沙门氏菌感染的防治策略分析与研究

本文通过系统性的对肉鸡沙门氏菌的阐述,对肉鸡中沙门氏菌的感染风险进行介绍,通过与肉鸡中沙门氏菌的传播途径相结合,探讨如何防治肉鸡沙门氏菌的感染,主要以保障肉食鸡安全以及人们饮食健康为主要目的。

用相应噬菌体快速鉴定鼠伤寒沙门氏菌的报告

用自已分离的鼠伤寒沙门氏菌(STM)噬茵体 L_1对136株 STM 和20余株非 STM 进行了裂解试验,结果130株 STM 被裂解,裂解率为95.6%。其它伤寒、痢疾杆菌20余株均不裂解。证明噬菌体裂解试验具有特异、快速、简易等特点,适合各种环境的检验。

复合酸化剂对肉鸡空肠有害菌群定植定量的影响

分析了复合酸化剂对艾维因肉鸡空肠内Escherichiacoli和Salmonellatyphi定植定量的影响。结果表明,日粮中添加复合酸化剂后,肉鸡空肠内Escherichiacoli和Salmonellatyphi数量显著减少,肉鸡生长速度显著提高,死亡率降低13.3%。

犊牛疑似副伤寒报告

本文是目前基层报道犊牛疑似沙门氏茵较为详细的一篇，文章以胎衣、脐带、日龄、体温、兼症、关节、体重、温度等为突破口，从中论述沙门氏菌病的治疗及疗效、发生与防范、环境与流行、病因与病症等，阅后令人耳目一新。

携带猪流行性腹泻病毒S基因的减毒鼠伤寒沙门菌的构建与鉴定

为构建可有效抵抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)入侵的诱导黏膜免疫反应的核酸疫苗,采用RTPCR方法扩增了PEDV SC-L株的S基因主要抗原编码区域(简称S1),插入pMD19-T载体,构建载体pMD19-T-S1,再将S1基因片段插入双启动子真核表达载体pVAXD中,构建了pVAXD-S1表达载体。经免疫荧光法鉴定S1基因可在COS-7细胞中正常表达后,将pVAXD-S1电转入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207中,构建了携带S1基因的重组减毒沙门菌SL7207(pVAXD-S1),并对该重组菌株的生长曲线、携带质粒的稳定性、口服小鼠的安全性及目的基因在体内转录等特性进行了鉴定。结果显示,SL7207(pVAXD-S1)在含卡那霉素(100μg/mL)的培养环境中稳定性良好,以每只1×109 CFU口服免疫BALB/c小鼠具有良好的安全性,携带的S1基因能在小鼠回肠末端组织内正常转录及表达。本研究为深入开展减毒沙门菌疫苗菌株SL7207(pVAXD-S1)的免疫评价及构建PEDV与其他抗原基因联合免疫DNA疫苗奠定了基础。