鸡源mcr-1阳性多重耐药沙门菌的鉴定和特征分析

试验旨在对1株鸡源mcr-1阳性多重耐药沙门菌株进行鉴定以及特征分析,从河南鸡场采集病死鸡样品总计187份,通过SS选择培养基进行沙门菌的分离,利用聚合酶链式反应(PCR)方法扩增16S rRNA和invA对菌株进行鉴定,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)复核鉴定结果,并采用PCR测序的方法检测黏菌素耐药基因mcr的携带情况。采用微量稀释法测定沙门菌对常见16种抗菌药的敏感性,通过全基因组测序分析沙门菌的特征。结果显示,共分离鉴定出32株鸡源沙门菌,分离率为17.11%,黏菌素耐药率为18.75%;在1株沙门菌中检测到了黏菌素耐药基因mcr-1,检出率为3.13%。mcr-1阳性鸡源沙门菌的黏菌素最小抑菌浓度为16μg/mL,多序列位点分型结果为ST9。药敏结果显示,该菌株对氨苄西林、头孢噻呋、庆大霉素、大观霉素、恩诺沙星、环丙沙星、氟苯尼考、氯霉素、磺胺异恶唑、甲氧嘧啶、四环素耐药;携带blaOXA-1、blaTEM-1B、oqxAB、tet(A)、floR、catB3、sul1、sul2、sul3、ant(3'')、dfrA等多种耐药基因。接合试验证实mcr-1基因可发生接合转移。该研究结果为临床治疗鸡源沙门菌感染中合理使用抗生素以及有效预防、控制耐黏菌素鸡源沙门菌的传播提供了科学依据。

沙门菌多重耐药基因岛研究进展

多药耐药基因组岛是指细菌染色体上一段具有典型特征的基因簇,携带有多种耐药基因,决定细菌的多药耐药性;多药耐药基因组岛具有移动元件的特征,如G+C百分比和密码子使用与宿主菌不同,常含移动基因,可以在同种甚至于不同种菌株间水平转移,加速了临床上多药耐药菌株的产生。目前已发现在沙门菌属和其他菌属的细菌中携带沙门菌多重耐药基因岛。由于沙门菌多重耐药基因岛1上的耐药基因具有可移动性,使其在细菌多重耐药获得与传播机制的研究中具有重要意义。

屠宰生猪多重耐药沙门菌I类整合子与耐药基因的检测

目的了解屠宰生猪沙门菌分离株多重耐药与I类整合子及耐药基因的携带关系。方法采用K-B纸片法对屠宰生猪78株沙门菌分离菌株进行22种抗生素敏感试验;应用PCR技术对沙门菌分离菌株进行I类整合子及耐药基因检测。结果78株沙门菌分离株中有41株(52.56%)对2种以上抗生素耐药,属于多重耐药株,强力霉素-四环素-卡那霉素-氯霉素是主要多重耐药谱;41株多重耐药菌中有19株(46.34%)携带I类整合子,tetB、aph(3)-IIa和Flor基因分别检出最高。结论沙门菌多重耐药性与整合子的携带之间关系密切,耐药表型测定结果与耐药基因检测结果一致。

多重耐药革兰阴性杆菌耐消毒剂基因qacE△1-sul1监测

目的了解某院临床常见革兰阴性(G^-)杆菌多重耐药株耐消毒剂基因qacE△1-sul1的产生情况。方法收集临床分离的G^-杆菌235株,包括155株多重耐药株和80株敏感株,采用聚合酶链反应(PCR)法检测qacE△1-sul1基因,并进行DNA测序。结果在50株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌、27株产ESBLs肺炎克雷伯菌、50株多重耐药的铜绿假单胞菌和28株多重耐药的鲍曼不动杆菌中,检出qacE△1-sul1株分别为37、24、46、28株,检出率分别为74.00%、88.89%、92.00%和100.00%,总的检出率为87.10%;在非产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌以及铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的敏感株(各20株)中,分别检出qacE△1-sul1株16、7、5、13株,检出率分别为80.00%、35.00%、25.00%和65.00%,总的检出率为51.25%。结论该院G^-杆菌多重耐药株耐消毒剂基因qacE△1-sul1的携带率较高,加强多重耐药菌对消毒剂耐药性的监测,对临床合理使用消毒剂具有重要意义。

沙门菌耐药基因多重PCR检测方法的建立

目的建立检测沙门菌耐药基因的多重PCR方法。方法在已有的单一PCR检测沙门菌耐药基因的基础上,采用正交试验设计法,对Mg2+、dNTPs和引物浓度比例以及退火温度进行优化,确定沙门菌耐药基因多重PCR最佳反应体系和条件,并运用多重和单一PCR同步比较检测细菌耐药基因。结果成功建立了氨基糖苷类药物耐药基因aph(3)-IIa、aadA2、aacC4三重PCR方法、氯霉素类药物耐药基因flor、cmlA和catI三重PCR方法、四环素类药物耐药基因tetA和tetB二重PCR方法,且多重和单一PCR同步检测相关耐药基因结果符合率达100%。结论建立的多重PCR具有特异、快速、简便的特点,可为沙门菌耐药基因的检测以及耐药性的监控提供技术支撑。

鸡源多重耐药沙门菌转座子与耐药基因的研究

为了解鸡源性沙门菌分离株多重耐药情况与转座子及耐药基因的携带关系,采用K-B纸片法对23株鸡源性沙门菌分离菌株进行10种抗菌药物敏感试验;应用PCR对分离菌株进行转座子及耐药基因检测。结果显示,23株分离株中有10株对2种以上抗菌药物耐药,属于多重耐药株,其中四环素-氨苄西林-甲氧苄啶-诺氟沙星-庆大霉素-环丙沙星是主要多重耐药谱;10株多重耐药菌中有8株分别携带不同种的转座子(tnpA、tn1721、tnp513、IS26),其中以转座子tnpA、tn1721和IS26的检出率最高,耐药基因中以blatem-1、tetA和tetB的检出率最高,携带转座子多的菌株中耐药基因检出率较高且耐药谱广。结果表明沙门菌多重耐药性与转座子的携带之间关系密切,耐药表型与耐药基因检测结果基本一致。

多重PCR技术检测沙门菌两种四环素耐药基因

应用两对特异性引物同时检测四环素耐药基因tetB和tetC。通过对35株沙门菌分离株的四环素耐药性检测,表明所有沙门菌分离株均含tetC基因,与药敏试验结果阳性符合率65.7%,8株同时含有tetB基因,与药敏试验结果阳性符合率100%,tetB基因和tetC基因双阳性的菌株与药敏试验结果阳性符合率也为100%。取其中部分菌株扩增出tetB和tetC基因片段进行序列分析,5株菌的tetB基因扩增产物序列完全相同,与质粒pRT11相应序列同源性达99.7%;14株菌的tetC基因扩增产物与质粒pBR322中的相应序列同源性为100%。证实沙门菌耐药基因普遍存在,且同时含有tetB和tetC基因的菌株表现耐药。多重PCR技术同时检测两种四环素耐药基因,适合大量样本的检测,对开展沙门菌四环素多种耐药基因的分子流行病学监测提供了有效途径。

甲型副伤寒沙门氏菌主动外排多重耐药基因与表达研究

目的调查临床分离甲型副伤寒沙门氏菌对常用抗生素的耐药情况与多重耐药主动外排基因acrB的检测、序列分析及其表达水平。方法用琼脂二倍稀释法测定7种抗生素对甲型副伤寒沙门氏菌的抗菌活性,以基因库序列为参考设计引物PCR扩增acrB、测序并用RT-PCR方法检测其表达。结果12株甲型副伤寒沙门氏菌对氧氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟、哌拉西林、氯霉素、四环素、庆大霉素的耐药率除氯霉素为0外,其余均为8.33%。对三类不同种类抗菌药物多种耐药者1株。所有细菌均检测到多重耐药外排基因acrB,测序结果与参考沙门氏菌序列(No.AL627267)比较,有1处碱基差异。与大肠埃希氏菌(No.ECU00734)比较,碱基同源性为84.41%(70/449),提示其碱基序列同源性均极高。分别选取对两类抗菌药物耐药及敏感甲型副伤寒沙门氏菌各一株进行RT-PCR检测,结果两株细菌均检测到多重耐药外排基因acrB的表达。结论甲型副伤寒沙门氏菌对喹诺酮类、第三代头孢菌素类等药物耐药率低,但有多重耐药。甲型副伤寒沙门氏菌中均存在acrAB主动外排系统,与大肠埃希氏菌同源性高,可检测到其表达。主动外排机制可能是甲型副伤寒沙门氏菌形成多重耐药的主要原因之一。

伤寒沙门菌多重耐药主动外排系统基因检测与序列分析

目的 :以聚合酶链反应 (PCR)检测伤寒沙门菌敏感株 2 75及其第 2代诱导耐药菌OM 2、182acrB主动外排基因并分析序列。方法 :参考伤寒沙门菌基因库序列 (No .AL6 2 72 6 7)设计引物 ,对伤寒沙门菌 2 75、OM 2、182PCR扩增acrB基因 ,以证实acrAB外排系统的存在 ,并对 3株伤寒沙门菌扩增所得的acrB测序并分析其序列。结果 :伤寒沙门菌 2 75、OM 2、182PCR均扩增出 4 4 9bp的产物带 ,序列分析示伤寒沙门菌 2 75、OM 2仅 2处碱基与参考序列不同 (同源性 99.5 5 % ) ,推定编码的氨基酸相同 (同源性 10 0 % ) ,伤寒沙门菌 182除 2处碱基不同外 ,另有 2处存在碱基插入 ,因其序列已被打乱 ,无法进行氨基酸推测。结论 :伤寒沙门菌存在主动外排系统 ,是产生高水平耐药及多重耐药的基础。

多重耐药伤寒沙门菌耐药基因的研究

目的检测多重耐药伤寒沙门菌对抗菌药物的敏感性及其耐药基因定位。方法随机选取实验室保存的5株耐药菌和1株敏感菌,用纸片扩散法检测对12种抗菌药物的敏感性。用利舍平抑制试验检测菌株是否存在药物外排系统。用聚合酶链反应(PCR)检测TEM型β内酰胺酶基因、aac(6′)-Ⅰb和aac3-Ⅱ型氨基糖苷类修饰酶基因、qacEΔ1-sul1耐消毒剂和磺胺基因、catA和catB氯霉素乙酰基转移酶基因以及cmlA氯霉素外排泵蛋白基因等7种耐药基因。结果5株多重耐药菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢呋辛、头孢西丁、卡那霉素、庆大霉素、复方磺胺甲唑及氯霉素等8种抗菌药物全部耐药,对美罗培南、头孢哌酮、头孢吡肟全部敏感;对头孢噻吩中度敏感。1株无质粒pRST98的菌株对上述药物全部敏感。利舍平抑制试验均为阴性。4株耐药菌TEM型β内酰胺酶基因检测为阳性。全部耐药菌株aac3-Ⅱ、qacEΔ1-sul1和catA基因均为阳性,而aac(6′)-Ⅰb、catB和cmlA基因均为阴性。结论多重耐药伤寒沙门菌质粒pRST98上同时存在多种耐药基因,是导致菌株同时对多种结构各异的抗菌药物耐药的原因。

黄鸡源沙门菌分离鉴定及毒力和耐药性分析

【目的】探究规模化黄鸡孵化场鸡沙门菌流行株的毒力和耐药情况。【方法】采集弱雏卵黄拭子,接种选择培养基分离细菌,挑取疑似菌落进行革兰氏染色镜检,并对沙门菌属特异性基因invA进行PCR扩增鉴定。采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行药敏试验,并通过PCR扩增耐药基因对其进行耐药性分析。利用SPF昆明小鼠对分离株进行致病性试验,并采用PCR法扩增相关毒力基因。【结果】分离菌株中有5株(JSS-Q3、JSS-Q4、JSS-Q5、JSS-Q8和ZJS-C1-11)疑似沙门菌,在伊红-美蓝培养基上形成无色透明的小菌落,在沙门菌显色培养基形成紫色透亮的小菌落,且镜检为短杆状革兰氏阴性菌。沙门菌特异性基因invA PCR扩增阳性,测序比对结果显示与沙门菌相似性达99%;鸡伤寒沙门菌特异性基因(IpaJ)PCR扩增阳性,分离到的5株菌株均为鸡伤寒沙门菌。分离菌株共检出15种毒力基因,其中11种毒力岛基因检出率为100%。耐药性分析表明,5株分离菌株耐药性较强,仅对部分抗菌药敏感,分离菌株对头孢吡肟、氟苯尼考、恩诺沙星表现敏感;另JSS-Q5、JSS-Q8分别对多黏菌素B、新霉素敏感,JSS-Q3对头孢他啶、大观霉素敏感性较好,ZJS-C1-11对头孢克洛、大观霉素以及多黏菌素B敏感性较好。部分菌株携带bla SHV、bla TEM、tet(A)、tet(B)等耐药基因。致病性分析发现JSS-Q8和ZJS-C1-11菌株毒性较强,对小鼠具有致死性。【结论】本研究涉及的黄鸡孵化场沙门菌分离株为鸡伤寒沙门菌,均表现多重耐药且部分致病性较强,可能是影响该孵化场孵化率和弱雏率的重要原因之一。研究结果为沙门菌病的检测、诊断及治疗提供一定的试验依据。

鸭沙门菌耐药性及耐药基因的检测与分析

为检测徐州地区鸭沙门菌耐药表型与耐药基因的分布情况,通过对不同来源分离的56株鸭沙门菌,用Kirby-Bauer(K-B)法测定对20种抗菌药物的耐药性,并设计19对引物,对6大类耐药基因进行检测。抗生素耐药性试验结果表明,分离的沙门菌对20种抗生素具有不同的耐药率和多重耐药现象,单一抗生素以链霉素耐药率(98.2%)最高,其次是氨苄青霉素(94.6%),耐药表型主要为AStAC、ANStOCSx和AAKDOCSx。检测的19种耐药基因中,blaTEM-1、aad A1、aad A2、aph(3′)-Ⅱa、tetA、gyrA、Sul2、drfⅫ基因的检出率超过50%以上,没有检测到tetC基因,其中aadA1基因检出率(91.1%)最高,其次是blaTEM-1基因(83.9%),抗生素耐药基因检测与耐药表型基本相符。

多重耐药鲍曼不动杆菌耐药情况及其携带耐消毒剂基因的研究

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药情况及携带耐消毒剂基因情况。方法收集2014年1月-2015年2月山西省两所三级甲等医院50株多重耐药鲍曼不动杆菌,采用K-B法检测抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测耐消毒剂基因qac EΔ1。结果50株多重耐药鲍曼不动杆菌主要见于神经外科、ICU、呼吸内科,分别为15株(30.0%)、10株(20.0%)、9株(18.0%)。其中痰标本34株(68.0%)、创面分泌物标本2株(4.0%)、血标本2株(4%)、尿液标本5株(10.0%)、引流物标本2株(4.0%)、神经外科患者病床栏杆表面标本5株(10.0%)。50株多重耐药鲍曼不动杆菌对氨苄西林/舒巴坦的耐药率为96.0%(48/50)、左氧氟沙星为70.0%(35/50)、头孢他啶为100.0%(50/50)、头孢哌酮/舒巴坦为100.0%(50/50)、亚胺培南为98.0%(49/50)。50株多重耐药鲍曼不动杆菌中,有21株携带耐消毒剂基因qac EΔ1,阳性率为42.0%。结论多重耐药鲍曼不动杆菌耐药情况十分严重,并且携带有耐消毒剂基因qac EΔ1。因此,应严格规范使用抗菌药物,并采取相应的措施预防多重耐药鲍曼不动杆菌在医院环境中流行爆发。

多重耐药铜绿假单胞菌耐消毒剂基因存在状况

目的了解铜绿假单胞菌(Pa)耐消毒剂基因qacEΔ1-sul1的存在状况。方法从临床分离的Pa中筛选出多重耐药Pa,采用聚合酶链反应(PCR)检测qacEΔ1-sul1基因。结果20株多重耐药Pa中17株为阳性。结论大部分多重耐药Pa携带qacEΔ1-sul1基因,携带率高。

AcrAB-TolC电泵系统介导的鼠伤寒沙门菌多重耐药机理研究

目的探讨AcrAB-TolC电泵系统在鼠伤寒沙门菌产生多重耐药中的作用。方法利用基因敲除技术,敲除多重耐药鼠伤寒沙门菌野生株X2的acrAB基因和tolC基因,获得两个突变株△tolCX2和△acrABX2。通过基因敲除前后细菌耐药水平的改变,验证AcrAB-TolC系统在鼠伤寒沙门菌产生多重耐药中的作用。结果△tolCX2和△acrABX2对万古霉素耐药,对丁胺卡那霉素、头孢曲松敏感,与野生株X2一致;但对11种抗生素由耐药变为敏感。结论AcrAB-TolC系统与鼠伤寒沙门菌多重耐药的产生有关。

动物源沙门菌的耐药表型、基因型及流行特征研究

目的研究动物源沙门菌耐药及流行特征。方法对116株动物源沙门菌进行血清学分型、药物敏感试验、耐药基因(簇)检测和多位点序列(MLST)分析。结果鸡源沙门菌多为ST11克隆肠炎沙门菌和ST17克隆印第安那沙门菌,猪源沙门菌多属于ST40克隆德尔卑沙门菌。ST11克隆主要表现为对氨苄青霉素、萘啶酸、四环素、头孢哌酮耐药,且多数为多重耐药(MDR);ST17克隆多数对9种以上的药物特别是头孢类及氟喹诺酮类耐药,为超级耐药(Super-MDR)克隆。ST11克隆中blaTEM-1-like携带率最高,ST17克隆中blaOXA-1-like、blaCTX-M、blaTEM-1-like及floR、aadA2、sul1及aac(6′)-1b高携带率是其成为超级耐药克隆的主要原因。结论抗菌药物特别是头孢类、氟喹诺酮类药物在动物生产中应当控制使用,对控制耐药菌的产生及传播有重要意义。

159株志贺菌耐药及非典型1类整合子基因盒携带情况分析

目的观察志贺菌临床耐药情况及非典型1类整合子基因盒的携带情况。方法采用K-B纸片法对天津地区3所三级甲等医院分离的159株志贺菌进行药敏试验,分析其耐药情况。采用RT-PCR法检测志贺菌1类整合子基因盒携带情况,并进行基因测序分析其耐药基因盒类型。结果 159株志贺菌中,对3种及3种以上抗菌药耐药148株(93.1%),抗生素耐药情况分别为四环素85.5%、复方新诺明82.4%、氨苄西林82.4%;携带1类整合子基因盒134株,其中非典型1类整合子106株(66.7%);非典型1类整合子可变区携带的耐药基因盒blaox a-30-aad A1(6.6%)、aad A5R(4.7%)、dfr A12R(57.5%)。结论志贺菌多药耐药现象较明显,菌株携带非典型1类整合子比例较高,其主要可变区耐药基因盒种类为dfr A12R。

健康人携带的沙门菌中沙门菌基因组岛1的鉴定及特性分析

目的检测健康人携带的沙门菌中沙门菌基因组岛(SGI1)的分布情况及特性,分析其与细菌耐药性的关系。方法采用PCR方法对5株第一类整合子阳性的沙门菌检测SGI1,分别检测其左侧、右侧部分和其中间的部分基因,以及环状形式和切除状态,通过接合转移及自然转化检测其可移动性。结果一株鼠伤寒沙门菌携带SGI1,位于thdF和int2之间,且其多重耐药区含aadA2,floR,tetG,blaPSE-1基因,存在环状形式及切除状态,且可通过自然转化方式转移至其他菌株。结论 SGI1可通过自然转化方式转移到其他菌株,介导多重耐药的传播。